HPV检测目的及最佳检测方法ppt课件

HPV病毒检测的目的及最佳检测方法 1 HPV检测的目的是什么 2 HPV检查的最佳方法 3 德同产品介绍 主要内容 只是为了查有没有HPV病毒感染 是为了查HPV感染型别 检测型别越多越好 是为了发现已经存在的CIN2 病变和预CIN2 的风险人群 HPV检测的目的是什么 专家对HPV检测是否要临床验证如何看待 HPV检测的目的是什么 1个HIV HBV AIDS HBV1个HPV CIN或宫颈癌 80 90 的女性HPV感染是一过性的 可在6 24个月通过自体免疫清除 高危型HPV持续感会导致宫颈癌从HPV感染到宫颈癌 一般需要10 20年 高分析敏感度 检测与临床无关的病毒水平 假阳性 一过性的感染会自身清除 恢复阶段 免疫响应 早期感染会自身清除 Snijdersetal JournalofPathology2003 201 1 6 HPV检测的目的是什么 HPV病毒含量与临床病变的关系 WHO指南对于HPVCutoff有明确推荐检测阳性判断值 WHOguidelinesforscreeningandtreatmentofprecancerouslesionsforcervicalcancerprevention WorldHealthOrganization2013 阳性判断值 Cutoff 的设定 在2013年的WHO宫颈癌筛查和管理指南中是有具体建议的 其推荐高危型HPV检测cut off值 1 0pg ml HPV检测的目的是什么 HPV检测的目的是什么 HPV检测的目的是什么 不再是单纯的病毒检测 而是强调 临床 不再是制造商说了算 而是临床说了算阳性判断标准是要获得理想临床敏感度和特异度的临界值 制造商不能仅凭简单的病毒检测数据来制定 建议使用ROC曲线的方式进行评估 这需要大量临床检测数据才能最终找到理想的临界值 2015年CFDA针对HPV检测试剂阳性判断值的规定 临床灵敏度特异度的Cutoff值 HPV检测的目的是什么 2015年欧洲IPV大会 宫颈癌筛查HPV检测目的HPV检测不是为了检测病毒 不是一过性感染 而是检测感染病毒后的进展风险HPV检测需要关注临床敏感度 最大化的保护低风险人群 最大化的辨别高风险人群 2015IPVConference Mark Stoler 2016年CSCCP会议 HPV检测不是仅仅为了检出HPV感染 而是为了发现已经存在的CIN2 病变和预测CIN2 的风险 对于HPV检测来说 最重要的是临床灵敏度和阴性预测值 HPV检测的目的是什么 WHO IRAC明确检测13种HPV 从流行病学和致癌机制证据方面 WHO IRAC明确检测13种HPV型别 HPV16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 68 最强的致癌型别 几个致癌位点已经明确 充足流行病学证据证实会导致宫颈癌 缺乏宫颈癌流行病学证据 但从致癌机制上有强的证据支持 2009WHOIARCSpecialReportPolicyAreviewofhumancarcinogensPartB 2015年中国CFDA明确HPV检测型范围 HPV检测型别太少的产品如只检测5种型别 2种型别 如HPV16 18 等 将不能再注册 HPV检测的目的是什么 HPV检测的目的是什么 不能盲目的追求过多的HPV检测型别不建议将低危型HPV检测用于宫颈癌筛查 中国CFDA明确限制低危型HPV检测 2015最新CFDA指导原则以服务临床为最终目的 一项检测技术 要想满足以上要求 必须基于长时间大量的临床验证才能实现 2015年CFDA新的指导原则 从临床目的出发 精确注册标准要求 答案 只是为了查有没有HPV病毒感染 NO 是为了查HPV感染型别 检测型别越多越好 NO 是为了发现已经存在的CIN2 病变和预CIN2 的风险人群 yes HPV检测的目的是什么 1 HPV检测的目的是什么 2 HPV检查的最佳方法 3 德同产品介绍 主要内容 HPV检查的最佳方法 直接核酸检测 无需PCR实验室 杂交捕获技术 HC2 DH1 DH2 DH3 酶切信号放大法 Cervista 核酸扩增后检测 PCR类技术 需PCR实验室 膜杂交法基因芯片法反向点杂交法流式荧光杂交法荧光探针法 HPVDNA检测技术分类 HPV检查的最佳方法杂交捕获技术 HPV检测的金标准 产品德国凯杰的 HC2杭州德同的 DH2 DH3 HPV检查的最佳方法 杂交捕获技术的三大优势 1 独特的探针技术 14种全长8000RNA探针 避免因区域片段 如L1区 丢失造成的假阴性2 无需DNA提取 无需核酸扩增 有效避免因环境因素造成的假阳性3 统一的临床判定标准 1 0pg ml 避免因方法学灵敏度过高产生的假阳性 结果重复性好 准确可靠 HPV检查的最佳方法 杂交捕获法独特的探针技术 HPV病毒基因组为环状双链DNA 含有 8000个碱基对 德同DH系列HPV检测 全长鸡尾酒 探针技术 HPV18 8000bp 基于全长 涵盖HPVDNA所有区域2 12种不同型别探针混合准确 不漏诊 CobasHPV AbbottHPV 12 2Real timePCR 寡核苷酸探针 技术 HPV16 HPV18 12种HR通用探针 约200bp 仅基于L1片断 非全长仅3种探针混合病毒基因缺失 突变会造成漏诊 其他国产PCR方法 寡核苷酸探针 技术 13种HR通用探针 约100 150bp 仅基于L1片断 非全长仅1种通用探针病毒基因缺失 突变会造成漏诊 HPV16 12种HR通用探针 德同DH系列HPV检测 全长鸡尾酒 探针技术 Title Location Date CobasHPV AbbottHPV 12 2Real timePCR 寡核苷酸探针 技术 其他国产PCR方法 寡核苷酸探针 技术 PCR和HC2的临床敏感性比较 综合1999 2005年间的主要研究基于CIN2 3 癌症的病例数 1 500 L1片段的缺失并不普遍 但是任何变异或缺失都会造成PCR的检测结果为阴性 UngeretalJHC1998 46 4 535 540 L1片段是病毒衣壳蛋白 在HPV病毒引发的肿瘤进展过程中是不必要的 因此很可能在HPV整合过程会导致L1片段的缺失 Caponeetal ClinCancerResearch2000 6 4171 4175 5 的癌症和CIN3会因为HPVL1片段的缺失而无法被检测出来 Lorincz MethodsforHPVDetection EmergingIssuesonHPVInfections FromSciencetoPractice Monsonego2006 HPV病毒基因L1片段缺失 PCR中 球蛋白的竞争 反应过程中的竞争会导致假阴性结果 球蛋白和HPV以共同引物L1片段进行扩增 这样会降低HPV检测的敏感度 Coutleeetal JCM2002 40 3 902 907 PCR导致假阴性的原因 不同HPV型别扩增效率不同如果L1片段缺失 检测失败 整合型HPV 通用引物会和低危型HPV结合 抑制了目标高危型别的扩增内指控 Beta globin 会抑制HPV扩增样本抑制 有5 的样品丢失因出现抑制而无法扩増 PCR检测可能导致假阳性结果 检测与临床不相关的感染样本间的污染 缺乏统一的判定标准结果受主观因素影响 杂交捕获 PCR 经临床验证的同一判定标准1 0pg ml仪器判读 结果客观可靠 统一的判定标准 HPV检查的最佳方法 为何要明确 临床灵敏度和临床特异度的Cutoff值 2015IPVConference Mark Stoler 参考2015年世界IPV大会 理想的临床灵敏度和特异度的临界值 Cutoff 即及能够保证对 CIN2的病人具有非常高的检出率的同时 又可以避免因分析敏感度过高而造成的假阳性临床敏感度与疾病进展风险挂钩分析敏感度与是否存在病毒感染挂钩 PCR过于敏感的分析敏感度 会将病毒含量的人判断为阳性 HPV检查的最佳方法 AdaptedfromSnijdersetal JournalofPathology2003 201 1 6 分HPV检查的最佳方法析敏感度与临床敏感度 杂交捕获HPVDNA检测为阴性时并不代表体内没有HPV 表明样品中HPV含量不足5000拷贝 杂交捕获HPVDNA检测为阳性时 高于以上标准 可以预测未来8 10内患CIN2 3或者进展为更高级别病变的风险短暂及一过性的感染会通过自身免疫力清除PCR方法检测HPV的分析敏感度可能 10拷贝 区别 分析敏感度与临床敏感度 分析敏感度 PCR方法的分析敏感度达到10个拷贝 ml 阳性结果 可能没有临床相关性 临床敏感度 杂交捕获的分析阈值经临床验证为5 000个拷贝 ml 经临床证实 高度的阴性预测值 样本中能检测出的病毒最低水平也被称作检测极限 LOD 统计学意义 检测结果与零的区分 以临床病变为终点指征 检测出高度病变的敏感度 CIN3 SCC 初筛时 能够检测出CIN2 或宫颈癌的比例分析阈值必须得到严格的验证 HPV检查的最佳方法杂交捕获技术 HPV检测的金标准 产品德国凯杰的 HC2杭州德同的 DH2 DH3 HPV检查的最佳方法 1 HPV检测的目的是什么 2 HPV检查的最佳方法 3 德同产品介绍 主要内容 杭州德同DH系列产品 利用基因杂交 化学发光 信号放大的原理在分子水平检测WHO认可的14种高危型 HPV病毒DNA最新 2 12型 检测设计 HPV16 18与其他12种型别检测 德同产品原理 新一代杂交捕获技术 杭州德同DH系列产品 具有48T 96T两种规格 半自动检测仪器 全自动检测仪器 杭州德同DH系列产品检测仪器 DH产品与HC2的临床比对 孙小伟等 中华肿瘤防治杂志 2016年2月第23卷第3期137 140 河南新密 两癌 筛查项目 DH2对CIN2 的检出率显著高于巴氏涂片和VIA VILI 临床试验显示 DH3具有与Cobas相同预测高级别病变的效能 浙江龙游10669名健康妇女接受Cobas和DH3筛查结果比对 临床试验显示 DH3与Cobas预测高级别的效能相似 浙江龙游10669名健康妇女HPV16 18分型检测用于宫颈癌初筛Cobas DH3效能的比较 保留了H