饲料中沙门氏菌测定方法确认表

新项目投入使用审批表项目名称食品中沙门氏菌的检测实验目的方法确认监测方法方法出处GB/T 13091-2002仪器名称恒温培养箱规格型号上海精宏 DNP-9272实验起止时间上交报告日期项目负责人参加人报告起草人日期室主任审核日期技术负责人批准日期1 实验记录(实验中现象、情况、技术关键、注意事项)1、 增菌培养：25g样品+225mlBPW，36培养24h后，取1ml转钟于10mlTTB、10mlSC、10mlRV内，TTB和RV于42培养24h，SC于36培养24h。观察生长情况：在氯化镁-孔雀绿增菌液、TTB增菌液和SC增菌液中，饲料的颜色既不是阴性也不是阳性；继续做分离培养。 2、分离培养：分别挑取增菌液接种在BS、HE、XLD、沙门显色培养基和酚红煌绿培养基上上，36培养24h（BS培养48h）,观察各平板上菌落生长情况。1）BS：如右图所示典型菌落为黑色金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。左图为饲料样品，在BS培养基上长出疑似沙门氏菌的菌落，需往下继续做鉴定实验。2）HE：如右图所示典型菌落为蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。左图为饲料样品，在HE培养基上长出大量菌落，但与沙门氏菌的菌落形态不符合。3）XLD：如右图菌落所示典型菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。左图为饲料样品，在XLD培养基上长出疑似沙门氏菌的菌落，需往下继续做鉴定实验。4）沙门显色培养基：如右图菌落所示典型菌落呈品红色或紫红色。左图为饲料样品，在沙门显色培养基上长出绿-蓝绿色的菌落，根据沙门显色培养基说明书可知，该菌落很有可能是大肠菌群。5）酚红煌绿培养基：如右图菌落所示典型菌落为是粉红培养基颜色由酚红变红。左图为饲料样品，在酚红煌绿培养基上长出黄色的菌落，使培养基颜色由酚红变黄，说明该菌落很有可能不是沙门氏菌。3、 鉴定实验：1） 生化鉴定标准菌株：TSI琼脂上培养24h后，斜面红色产碱，琼脂变黑，产生硫化氢；尿素琼脂上培养24h后，琼脂不变色，表现为阴性；赖氨酸脱羧酶实验培养后实验管为蓝绿色，表现为阳性；靛基质实验加入靛基质后颜色未变色，变现为阴性；ONPG实验培养后试剂为变色，表现为阴性；KCN实验培养后，对照管和生长管均为生长，表现为阴性；V-P实验加入V-P试剂后颜色未变色，表现为阴性。饲料在TSI琼脂上培养24h后，斜面和底部都为黄色产酸；接种在尿素琼脂上，培养24h后，琼脂稍微变为粉红色，表现为弱阳性。2） 血清学鉴定：标准菌株在生理盐水中无法自凝，在血清中出现自凝现象，表现为阳性。二技术说明本实验采用GB/T 4789.4-2010食品安全国家标准中的微生物生物学检验中的沙门氏菌检验，通过增菌、前增菌、分离培养以及生化试验和血清学鉴定，最后综合生化试验和血清学鉴定的结果，报告25g样品中检出或未检出沙门氏菌。三结论标准菌株生化鉴定结果TSI尿素琼脂赖氨酸脱羧酶靛基质ONPG实验KCN实验V-P实验斜面红色，培养基变黑-+-饲料数据分析与结果指标分离培养生化鉴定血清学实验结果报告沙门氏菌酚红煌绿琼脂沙门显色培养