重组DNA分子模拟制作ppt课件

选修3现代生物科技专题 1 1重组DNA分子模拟制作 生物科技创造美好未来 阅读课本 归纳思考 作为 分子运输车 需要具备哪些条件 EcoRI酶切后的载体和目的基因 目的基因 载体 模拟实验多个EcoRI酶切后的载体与目的基因混合之后 加入DNA连接酶 其连接产物将有几种 为了方便分析 至多考虑两个分子相连接 载体与目的基因之间的连接 载体与载体之间的连接 目的基因与目的基因之间的连接 载体自身头尾相连接 自身环化 目的基因自身环化 同向插入 反向插入 为什么EcoRI酶切后会有这么多种连接产物呢 结论 一种限制酶切割后产生的黏性末端只有一种 相同的黏性末端之间可以任意连接 载体自身环化和目的基因自身环化是干扰重组的常见因素 如何避免 两种限制酶切割产生的黏性末端不同 载体及目的基因无法自身环化 无法连接 正确连接 载体与载体间 目的基因与目的基因间仍可连接 载体特点中除有多个酶切位点外 还携带标记基因 如何筛选出含目的基因的重组DNA呢 载体与载体重组DNA 载体与目的基因重组DNA 提示 在基因工程的实际操作中 科学家选择的载体往往含有两个或更多的标记基因 如果在目的基因的插入位置有一个标记基因 当目的基因插入后 标记基因将被破坏而无法表达 从而达到筛选目的 目的基因 pBR322质粒结构 标记基因 进行筛选 在基因工程中 真正被用作载体的质粒 都是在天然质粒的基础上进行人工改造的 在宿主细胞中能保存下来并能大量复制 有多个限制酶切点 以便与外源基因连接 具有标记基因 以便进行筛选 对受体细胞无害 易分离 载体DNA分子大小应适合 便于提取和操作 运载体的作用 运载体必须具备的五个条件 作为运载工具 将目的基因转移到宿主细胞中利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制 基因工程的操作工具 1 有一或多个限制酶切点 以便目的基因可以插到载体上 2 有一个或多个标记基因 便于筛选 3 必须能在受体细胞中稳定保存并具备复制 表达的能力 或整合到染色体DNA上 随染色体DNA进行同步复制 4 对受体细胞无害 5 大小合适 利于提取和操作 载体的特点 目的基因所在片段 CTTAA G AATTC G CTTAA AATTC G G PSt 目的基因与运载体连接 pBR322质粒结构 标记基因 进行筛选 限制性内切酶 识别序列 外源基因连接 DNA连接酶DNA聚合酶限制酶DNA水解酶解旋酶RNA聚合酶 若干种酶的比较 33 分别代表什么酶 AATTG C 基因工程的操作工具 都能催化形成磷酸二酯键 都是蛋白质 不需要 需要 基因工程 DNA复制 将单个脱氧核苷酸连接到已有的DNA片段上 形成磷酸二酯键 形成DNA的一条链 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 最终形成完整的重组DNA分子 DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 温故知新 核酸的类型 概念 细胞内携带遗传信息的物质 在生物体的遗传 变异和蛋白质的生物合成中具有极其重要的作用 脱氧核糖核酸 DNA 核糖核酸 RNA 基本单位 脱氧核糖核苷酸 核糖核苷酸 碱基种类 A G C T 基本单位 碱基种类 A G C U 类型 是具有的DNA片段 是决定的基本单位 基因 基因的概念 遗传效应 生物性状 片段1 片段2 片段3 片段4 片段5 基因A 基因B 基因C 间区 间区 遗传信息 脱氧核苷酸 原核基因 基因的结构 基因的载体 染色体 主要由DNA和蛋白质组成 染色体为基因的主要载体 基因在染色体上呈线性排列 线粒体叶绿体 次要载体 包含关系图 脱氧核苷酸 脱氧核苷酸 基因 DNA 染色体的关系 不同种生物的基因能够实现重组 并成功表达的原因有哪些 1 大多数生物的遗传物质都是DNA 且都是有脱氧核苷酸构成的 化学成分相同 2 不同生物的DNA分子基本结构是相同的 双螺旋结构 且都遵循相同的碱基互补配对原则 所以不同的生物DNA可以嫁接 3 地球上的所