细菌半数致死量测定--张玉晴ppt课件

细菌LD50测定方法 报告人 张玉晴指导老师 李槿年教授 大纲 半数致死量 LD50 Lethaldose 表示在规定时间内 通过指定感染途径 使一定体重或年龄的某种动物半数死亡所需最小细菌数或毒素量 1 寇氏法 改良寇氏法2 累计法 Reed Muench法 3 霍恩氏法 Horn氏法 4 加权法5 序贯法6 固定剂量法7 logistic模型法 1 寇氏法 改良寇氏法公式 LD50 lg 1 Xm i P 0 5 X50 lgLD50LD5095 可信限 lg 1 X501 96SX50 LD50平均可信限 LD50 LD50可信限高限 低限 2 Xm 最大剂量的对数值i 相邻两组剂量对数值之差P 各组动物死亡率 用小数表示 P 各组动物死亡率之总和n 每组动物数 预试验找出引起0 死亡率和100 死亡率剂量的所在范围反应量大致呈正态分布剂量必须按等比级数分布各组动物数相等 2 累计法 Reed Muench法 它是先将实验死亡动物数和存活动物数进行累计加和 再用加和的数据计算死亡率 在死亡率中有2个数据A和B 且A刚好大于50 B刚好小于50 计算方便 更多地运用在微生物学中 尤其在稀释分析中不考虑操作误差 计算结果不够精确 粗略判断LD50 3 5 来苏尔浸泡24h自来水冲洗 1 5 4 3 2 一 实验准备 二 细菌总数测定 挑取HX4单个菌落 10mL生理盐水重悬 100mLBHI液体培养基 离心收集菌体 洗涤菌体3次 测量菌落大小 30 150r min振荡培养24h 8000r min离心8min 平板菌落计数法计数 4 保存用于攻毒 10 1 10 3 10 2 10 4 10 5 10 6 10 7 10 8 10 9 30 倒置培养24h 记录平板上菌落数量 肉眼观察 放大镜检查 数据处理选取同一稀释度平均菌落数在30 300个之间的平板1 一个稀释度 平均菌落数在30 300个之间时 乘以稀释倍数报告 2 如有两个稀释度平均菌落数均在30 300个之间 则应求出两者总菌数之比 比值小于或等于2应报告平均数 大于2则报告其中较小的数字 3 如所有稀释度的平均菌落数均多于300个 应按稀释度最高的平均菌落数 乘以稀释倍数报告 4 如所有稀释度的平均菌落数均少于30个 则按稀释倍数最低的平均菌落数 乘以稀释倍数报告 5 如所有稀释度的平均菌落数均不在30 300之间 其中一个稀释度大于300 而相邻的另一稀释度小于30 则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告 三 攻毒 0 01g LMS 222麻醉 0 3mL 1 2 1010 2 4 109 4 8 108 9 6 107 1 9 107 分别腹腔注射5组鱼 三 攻毒观察7天内草鱼的发病和死亡情况 记录结果 按Reed Muench氏法计算LD50病死鱼无菌解剖 观察内脏病变情况 并用接种环蘸取内脏接种于BHI固体培养基上 30 培养2d 对分离到的细菌进行革兰氏染色镜检 0 表1HX4菌对斑马鱼的毒力 LD50 1 3 6 11 14 9 5 2 0 数据汇总 组别稀释比例死亡率1原液100 21 390 0 31 962 5 41 2722 2 51 810 0 7 LD50计算距离比例r 高于50 死亡率 50 高于50 死亡率 低于50 死亡率 62 5 50 62 5 22 2 0 310lgLD50 高于50 死亡率稀释度倒数的对数 距离比例 稀释倍数的对数 lg9 0 310 lg3 1 1021LD50 14 3515即当细菌原液稀释成1 14 3515时 腹腔注射斑马鱼 能使50 斑马鱼发生死亡 综上所述 拟态弧菌HX4对斑马鱼半数致死量 1 14 3515 1 2 1010 0 05 4 2 107 1 稀释度确定 3倍比