分子细胞遗传学新进展PPT课件.ppt

分子细胞遗传学新进展 1 传统的遗传学 60年代早期局限于计算染色体的数目粗略的将染色体按照大小和着丝粒位置进行区分 groupsAtoG 1970年显带技术的建立清楚的分辨出46条染色体 2 细胞遗传学的一般步骤 细胞培养使细胞停留在分裂中期低渗的方法使细胞膨大固定染色体 保留核酸将细胞滴到玻片上用显带染色技术进行染色在荧光显微镜下分析染色体数20个中期分裂相进行分析常规研究方法可区分400 600条带高分辨率研究方法可区分 650条带 3 有丝分裂 中期的核型分析 4 染色体组核型分析 G 带 Giemsa 富含AT的区域颜色较深优点能看到整个基因组显示每一单个染色体缺点分辨率 5 10Mb 进行细胞培养其他会用到的核型分析技术R Q C 和NOR带 5 染色体异常数目改变 三倍体和四倍体非整倍体 21 18 13 XO XXY 等 6 染色体异常结构异常 平衡改变易位和倒位不平衡改变缺失 扩增 环状染色体 和等臂染色体 7 倒位 8 染色体缺失 缺失看得见的识别起来相对容易微缺失看不见识别起来不是很容易 9 基因组大小和分辨率 10 分子细胞遗传学荧光原位杂交技术 FISH 多色FISH SKY和M FISH 比较基因组杂交 CGH 基因微阵列 aCGH 11 荧光原位杂交 FluorescenceinsituHybridization FISH 基本原理 应用荧光染料标记探针DNA 变性成单链后与变性后的染色体或细胞核靶DNA杂交 在荧光显微镜下观察并记录结果 生命科学中的 钓鱼 技术 12 13 FISH技术的特点 操作简便 探针标记后稳定 可与多种技术结合 可成功地帮助细胞遗传学家做出回顾性分析 方法敏感 能迅速得到结果 24小时就可以完成检测 人员培训较快 标本来源丰富 间期细胞 分裂中期细胞 分化或未分化细胞及死亡或存活的细胞皆可以被检测 14 FISH在白血病及实体瘤中的应用 15 1 诊断 16 17 2 微小残留病灶检测 18 检测肿瘤细胞的常见方法 19 3 预后 20 21 22 急性非淋巴细胞性白血病的预后分类 23 细胞遗传学分类 24 ASHMeeting 2003 Abs 336 分子细胞遗传学分类Favorablekaryotype 15 and orCEBPAmutation andnoFLT3mutationIntermediatekaryotype 67 orfavorablekaryotypewithFLT3mutation andnoRASmutationPoorkaryotype 18 orintermediatekaryotypewithRASmutation 25 慢性粒细胞性白血病 26 27 细胞遗传学和 或FISH检测t 9 22 BCR ABL FISH检测ASS缺失 28 慢性淋巴细胞性白血病 慢淋 是成人中常见的白血病有的慢淋病人只能存活几个月 而有的病人则能生存超过20年目前的常规检测手段 RaiandBinet 不能很好的预测病人的风险分子细胞遗传学为预后提供关键参数信息通过FISH检测可确定病人所属的预后组 依据平均生存月份划分 32 17p 79 11q 111 normal 114 12q 133 13q 29 结论 Binet分级 IgVH突变 CD38以及FISH都可独立的作为慢性淋巴细胞性白血病的预后评价手段FISH是一种有效且可靠的预测方法 30 多发性骨髓瘤 一种B细胞单克隆肿瘤从浆细胞自我增殖演变而来与异常蛋白生成及溶骨性损害相关中老年人群发病黑人及男性发病率高于白人及女性无法治愈对于不同发病风险的患者急需有效的治疗方案 31 多发性骨髓瘤 标准的预后指标 与预后有关 血清 2 微球蛋白C 反应蛋白 CRP 骨髓浆细胞形态学浆细胞增殖 浆细胞标记指标 基因组标记 非常重要 32 多发性骨髓瘤 应用FISH方法确定的三个预后组 预后差 t 4 14 p16 q32 t 14 16 q32 q23 17p13 24 7个月 预后中等 13q14 42 3个月 预后好 其他 50 5个月 33 成人急性淋巴细胞性白血病的预后分类Favorablerisk medianDFS 3years Normalorisolated9p p15 p16deletionsIntermediaterisk medianDFS19months 6qdeletions hyperdiploidy andmiscellaneousaberrationsUnfavorablerisk medianDFS7months t 9 22 BCR ABL t 4 11 MLL AF4 andt 1 19 E2A PBX1 34 Favorablerisk 4 10 and 17ort 12 21 TEL AML1 Unfavorablerisk11q23 MLL rearrangementsVeryunfavorableriskHypodiploidy 45chromosomes ort 9 22 BCR ABL Others 儿童急性淋巴细胞性白血病的预后分类 35 荧光原位杂交技术在产前遗传性疾病及部分肿瘤检测的多中心临床应用研究 卫生部科研基金课题承担单位卫生部医药卫生科技发展研究中心分课题组长单位 北京大学人民医院北京大学泌尿研究所医科院肿瘤医院北京妇产医院等 36 国内现状 由于FISH探针及配套设备较贵 缺乏对该技术深入了解等原因 FISH在国内的推广应用受到很大的限