人血浆脂蛋白相关磷脂酶APPT课件

1 1 研发背景 1 1中国主要疾病死亡率 来源 2010中国卫生统计年鉴 2 1 2美国主要疾病死亡率 Source NationalCenterforHealthStatistics2010 3 心脑血管疾病是造成人类死亡的主要疾病 预防 检测和治疗心脑血管疾病一直是全世界医学工作者努力不懈的目标 而心脑血管疾病的病理基础就是动脉粥样硬化 那么 动脉粥样硬化是怎样形成的呢 4 1 31976年R Ross提出了损伤反应学说 近年来研究的最大成就是认识到动脉粥样硬化是一种炎性反应性疾病 炎性细胞及其释放的产物已经被认为是最主要的促动脉粥样硬化的因素 在粥样斑块形成 进展和最终破裂的过程中均有炎性反应介质的参与 5 因此 寻找一个能够反应这种动态变化过程的介质就尤为重要了 目前国际上已经把脂蛋白相关磷脂酶A2 Lipoprotein AssociatedPhospholipaseA2Lp PLA2 作为一种新的炎性反应标志物 6 2 作用机制及临床意义 2 1作用机制2 2作用示意图2 3临床意义2 4目前检查的局限性 7 2 1作用机制 脂蛋白相关磷脂酶A2 英文简写Lp PLA2又称血小板活化因子乙酰水解酶 PAF AH 分子量为45KDa由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌 并受炎性介质的调节80 与低密度脂蛋白 LDL 结合能水解低密度脂蛋白上的氧化卵磷脂 生成促炎物质 因此具有促炎症和促动脉粥样硬化的作用 8 9 血管内腔 氧化的LDL 内膜 介质 粘附因子 单核细胞 细胞因子 斑块形成 泡沫细胞 巨噬细胞 溶血卵磷脂 氧化游离脂肪酸 2 2作用示意图 10 稳定粥样斑块Lp PLA2含量低可能有严重管腔狭窄较少的炎症细胞 不稳定粥样斑块Lp PLA2含量高可能轻微的管腔狭窄大量的炎症细胞 Source DavidsonMH JonesPH AmJCardSuppl2008 11 稳定粥样斑块 斑块破裂形成血栓 不稳定粥样斑块 粥样斑块早期 Source DavidsonMH JonesPH AmJCardSuppl2008 12 动脉粥样硬化的炎症发展到严重程度 将要或者已经出现向血管内腔破裂时 Lp PLA2将会被大量释放入血液 致使其血液内的水平会大幅增高 因此Lp PLA2在血液中的浓度就能够反映动脉粥样斑块的炎症程度 13 2 3临床意义 通过检测血液中的Lp PLA2 可以有效地了解动脉粥样硬化斑块的炎症程度及其稳定性 这样就可预警心肌梗死和脑血栓的发生 对预防心脑血管突发事件具有相当重要的意义 临床意义 1 预测心脑血管栓塞性疾病的发生 2 判断心脑血管栓塞性疾病的转归 14 2 4目前临床检测都存在着一定的局限 1 血管造影 可以显示血管的狭窄程度 但这是一种有创性检查 不适用于普检 预防和监测 2 许多的血液生化检测 比如胆固醇与低密度脂蛋白升高 体内脂质代谢异常 还是无法预警动脉粥样斑块的炎症程度 对判断爆发心脑血管意外危险性的特异性不好 15 3 各种心肌酶的检测 这些酶是发生了心肌梗死以后才出现的指标异常 因而也失去了预防和监测意义 4 CRP在各种急性炎症时出现 其升高幅度与感染的程度呈正相关 对于动脉粥样硬化炎症缺乏特异性 只有Lp PLA2的检测能直接准确的反映血管内膜的炎症程度 也就是动脉粥样硬化的严重程度 并且它是动态的变化 16 3 医学评价 3 1医学正常值根据临床试验数据与统计学分析 对照组Lp PLA2 ng ml 检测数据为正态分布 在a 0 05检验水准下 制定单侧95 医学正常值为175ng ml 依据这个正常值 检测灵敏度为93 40 特异度为92 8 准确度为97 0 17 3 2产品评价 产品是中国首家 国内第一个上市产品 也是国家863高科技成果 18 检测方法简易 快捷 3h 准确 灵敏度高 重复性好 价格优势 同类产品在美国普遍应用 临床的检测收费在250美元 人民币1500 天津市物价局批复每人份380元 19 4 适应科室及人群4 1医院科室 门诊部 内科 外科 住院部 心内科 神经内科 内分泌科 神经外科 老干科 急诊部 内科 外科 健康管理中心 20 4 2适用人群 高危人群 冠心病 脑血栓 高血压 高血脂症 高粘血症等患者及肥胖 烟酒过度 缺乏运动等人群的门诊常规血液检测 住院病人的常规血液检测 40岁以上人群体检的常规血液检测项目 21 5 样本的采集 用肝素或EDTA抗凝管或者不抗凝取血管抽取适应症患者静脉血2 5ml送检即可 22 6 ELISA原理 6 1原理 ELISA是以免疫学反应为基础 将抗原 抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的新型免疫检测技术 23 24 6 2操作流程 a 将试剂盒从冰箱中取出 在室温中平衡片刻 b 加入20微升待测样品 血清或血浆 或标准品于反应孔内 然后加入30微升稀释液混和后覆膜 37 温育20分钟 建议血清样本可按比例先在离心管中充分混匀后再取50微升加入到反应孔内 c 加入150微升酶标记物 混和后覆膜37 温育120分钟 d 除去孔内液体 每孔加入300微升洗涤液 振荡20 30秒后除去洗涤液 重复4次 25 e 每孔加入显色液100微升 混匀 37 避光温育20分钟 f 加入50微升终止液 g 立即用酶标仪在450纳米波长条件下测定各孔的OD值 h 以吸光度OD值为纵坐标 Y Lp PLA2标准品浓度为横坐标 X 做得相应的曲线 样品的Lp PLA2含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度 26 研究展望 人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2的