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文档简介

.,实验一总糖的测定,.,1.实验原理,斐林试剂法是利用斐林试剂的甲、乙液混合后，甲液的硫酸铜与乙液的氢氧化钠作用生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，该沉淀在碱性溶液中与乙液的酒石酸钾钠反应生成复杂的化合物（酒石酸钾钠铜）。酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，糖类的水解物都含有具还原性的醛基或是酮基，在碱性条件下煮沸能使斐林试剂中的二价铜离子还原为一价的氧化亚铜。根据斐林试剂完全还原所需的糖量，计算出样品的总糖含量。,.,2.操作方法,2.1样品处理：将样品在组织捣碎机中捣成匀浆，称取约10-20g样品，溶解后置于250mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，混匀，静置,过滤60-70mL。2.2样品转化：吸取处理好的样液50mL于100mL容量瓶中，加盐酸5mL，摇匀。置水浴中加热，使溶液在22.5min内升温至70，保持7.58min，使全部加热时间为10min。取出迅速冷却至室温。用20%NaOH溶液中和（加入酚酞指示剂12滴），样液至微红色为止，加蒸馏水至刻度，摇匀，注入滴定管中。,.,2.3样液测定2.3.1样品溶液预测：吸取5.0mL斐林氏甲液及5.0mL乙液（先加乙液再加甲液），置于三角瓶中，加蒸馏水25mL，加入玻璃珠35粒，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色褪去，出现粉红色(或浅黄色)为终点。,.,2.3.2样品溶液正式测定：吸取5.0mL斐林氏甲液及5.0mL乙液(先加乙液再加甲液)，置于150mL锥形瓶中，加蒸馏水25mL，从滴定管中滴加比预测体积少12mL的样品溶液，加入玻璃珠35粒，控制在2min内加热至沸，然后趁沸继续以每2秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色褪去，出现粉红色(或浅黄色)终点，记录消耗样液的总体积。同法平行操作23份，得出平均消耗体积。,.,3.计算,式中X样品中还原糖的含量（以葡萄糖计），%；m10mL斐林试剂相当于还原糖（以葡萄糖计）的质量，g；V测定时平均消耗样品溶液的体积，mL；M样品质量，g。,.,4.变色过程：,样液由深蓝色蓝紫色紫红色红色或由深蓝色蓝紫色黄绿色黄红色如果滴定后样品液的颜色变浅后又再变深，说明滴定过量，需重新滴定。,.,5.滴定时反应液不变色的原因及处理：,可能是样液含糖量过少或
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