植物组织培养复习.doc

1、概念：组织培养：利用植物离体器官、组织或细胞(包括原生质体)，在适宜的人工培养基上和无菌条件下进行培养，使其生长、增殖、进而发育形成小植株的方法。也称之为离体培养（In vitro culture）。愈伤组织：原指植物在受伤后，于伤口表面形成的一团薄壁细胞。 在组织培养中，指在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。外植体：由活植物体上切取下来的可以用于组织培养的组织或器官2、为什么说愈伤组织是最为常见的培养方式？原因：大部分组织培养经历callus再生途径长出植株；callus可以用于悬浮培养和原生质体培养。3、组织培养的类型有哪些？a按培养方法：固体培养、液体培养、看护培养、微室培养、包埋培养等b按培养过程：初代培养、继代培养4、组织培养在园艺业（农业）上的应用有哪些？a倍性育种：花药培养、胚乳培养 b突变体筛选：愈伤组织培养c创造新种质：细胞融合d克服胚败育：胚培养e植物性药物和生物制品的生产5、在组织培养技术的发展中做出巨大贡献的人。 6、一个正规的组织培养实验室应具备哪些基本仪器？有何用途？烘箱，冰箱，灭菌锅，超净工作台，酸度计，摇床，显微镜，天平，培养箱。玻璃器皿，微孔过滤器，细胞计数器，接种用具。7、一个正规的组织培养实验室应具备哪些房间？洗涤室（区），制备室（区），灭菌室（区），贮放室（区），操作室（区），培养室（区），观察室（区），药品室（区）8、详细叙述组织培养过程中的基本技术规程洗涤，灭菌，无菌操作9、培养基的类型有哪些？a按性质分：基本培养基，完全培养基b按状态分：固体培养基，液体培养基10、培养基的主要成分有哪些？各有何作用？a无机营养成分：大量元素（氮，磷，钾，钙，镁，硫）微量元素（硼、锰、锌、钼、铜、钴、氯、铁）b有机营养成分：含氮有机物（维生素、氨基酸）碳源和能源，植物激素c其他成分：活性炭，琼脂，抗生素，缓化剂11、配制培养基的基本步骤及注意事项有哪些？选择，配置（取样，加成分，测PH）12、什么是人工种子？有哪些特点与优点？人工种子：(artificial seeds)亦称体细胞种子。任何一种经人工种皮包被或裸露的，具有形成完整植株能力的繁殖体均可称之为人工种子。优点：a可以固定杂种优势；b解决部分名贵植物自然繁殖难的问题；c可以迅速繁殖生物工程产生的新材料；d在包裹材料中，可以加入农药化肥激素等；e可以产生无毒苗，用于脱毒；f批量生产、成本低、发芽率和生长速率一致；g体积小、运输方便；h可以直接播种和机械化操作13、如何获得高质量的人工种子？体胚发生过程与合子胚相似，经过原胚、心形胚、鱼雷形胚、子叶（成熟）胚等阶段14、优良的愈伤组织通常必须具备基本特性有哪些？如何达到诱导优良的愈伤组织的目的？15、详细叙述影响器官分化的因素。外植体，光照，温度，生长激素16.什么是离体授粉？离体受精？把通过在培养的整个雌蕊的柱头上授粉而结实的方法称做“离体授粉”把离体条件下通过在裸露的胚珠上授粉而结实的方法称做“试管受精” 17.离体授粉有什么意义和应用？1 克服自交不亲合性；2克服杂交不亲合性；3通过孤雌生殖产生单倍体。 18.离体授粉存在的困难？19、为什么培养植物体中的分生组织可以达到去病毒的目的？影响脱毒效果的因素有哪些？分生组织所以能逃避病毒的侵染，可能的原因是：（1）在一个植物体内，病毒易于通过维管系统而移动，但在分生组织中不存在维管系统。病毒在细胞间移动的另一个途径是通过胞间连丝，但它的速度很慢，难以追赶上活跃生长的茎尖；（2）在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性很高，使病毒无法进行复制；（3）在茎尖中存在高水平内源生长素，可以抑制病毒的增殖。（4）茎尖培养不但可以去病毒，而且可以去掉所有的病原菌(包括细菌、真菌等）因素：培养基，外植体大小，培养条件，外植体的生理状态，20、如何对植物进行热处理消除病毒？基本原理：在高于正常的某一温度范围（3540)下，植物组织中的很多病毒可被部分地或完全钝化，但很少伤害甚至不伤害寄主组织。热处理，可通过热水或热空气进行。热水对休眠芽效果较好；热空气对活跃生长的茎尖效果较好。处理时间的长短，可由几分钟到数周不等。例如，麝香石竹在38下处理2个月，从而消除了茎尖内的所有病毒。21、如何进行茎尖培养（大概的步骤和方法）？茎尖（shoot tip),约0.11mm，多数是由茎尖培养得到去病毒植株。或者是茎的顶端分生组织（apical meristem)0.25mm以内。解剖镜（体视显微镜），解剖针，解剖刀。为了防止茎尖变干，要在衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行解剖。茎尖外植体要用75酒精浸蘸一下或0.1的次氯酸钠消毒（10分钟）。在剖取茎尖时，要把茎芽置于解剖镜下，一手用一把细镊子将其按住，另一手用解剖针将叶片和叶原基剥掉。当形似一个透明闪亮的半球形顶端分生组织暴露出来之后，用一个锋利的长柄刀片将分生组织切下来，上面可以带有叶原基，也可不带，然后用同一工具接种到培养基上。对于难以生根的要嫁接到健康的砧木上。 注意，不要太大，以免带有较老的组织。 22、如何进行脱毒效果的检验？最简单的方法，是检验叶和茎是否有该种病毒所特有的可见病症。病毒的汁液感染法（saptransmission)是一种用于检验病毒的所有方法中最为敏感的方法，由受检植株上取下叶片，置于等容积（W/V）的缓冲液（0.1mol/L磷酸钠）中，用研钵和研杆将叶片研碎。 在指示植物（对某种或某些特定病毒非常敏感的植物）的叶片上撒上少许600号金刚砂，然后用受检植物的叶汁轻轻涂于其上。适当用力摩擦，以使指示植物叶表面细胞受到感染，但又不要受伤叶片。大约5min后，用水轻轻洗去接种叶片上的残余汁液。把接过种的指示植物放在一间温室或防蚜虫罩内，株间以及与其他植物间都要隔开一定距离。23、灭菌和消毒有何区别？为什么？ a灭菌：用物理或化学方法，杀死物体表面和孔隙内一切微生物或生物体，即所有生命的物质全部杀死。b消毒：杀死、消除或抑制部分微生物，使之不发生作用。 24、常用的灭菌方法各有哪些优缺点？ a干热灭菌：160-180,1.5-2.0hb湿热灭菌：121, 20-40minc接种前用酒精棉球擦试，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。d紫外灯照射(接种室、超净台、接种箱)：波长260nm，距离小于1.2m，20-30min。e臭氧灭菌机：1-2hf熏蒸灭菌：5-8ml/m3甲醛+5g/ m3 高锰酸钾；冰醋酸；1-3%高锰酸钾或3%来苏儿。g接种台喷雾消毒：75%酒精。 25、采用高压蒸汽灭菌时，应注意哪些事项？26、根据发育方向，初代培养可分为几种类型？ a丛生芽的发育b不定芽的发育c胚状体的发育d原球茎的发育27、组培成苗途径有几条28、理解无菌无菌操作含义29、污染、褐变和玻璃化产生的原因及预防对策是什么？污染：在组培过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。a污染原因：细菌、真菌为病源菌；污染途径有外植体带菌，培养基及器皿灭菌不彻底，操作人员未遵守操作规程，环境不清洁。b预防对策：（1）防止材料带菌：避免阴雨天在室外采集外植体；春秋组培；材料预培养。（2）严格外植体灭菌（3）接种用具灭菌彻底（4）严守无菌操作规程（5）保持培养室清洁褐变a原因：（1）植物品种（基因型）（2）生理状态（3）培养基成分（4）培养条件（5）材料转移时间b防止措施:（1）选择适宜的外植体（2）选择合适的培养条件（3）连续培养（4）加抗氧化剂（VC、PVP、牛血清、牛蛋白）（5）加0.10.5%活性炭玻璃化：离体培养物的嫩茎或叶呈半透明水渍状。为生理失调症。a原因：细胞过程中的环境变化引起。导致玻璃化的因素有以下几方面：（1）激素浓度（尤其CTK）增加或CTKIAA高（2）琼脂浓度低（3）光照时间大于15h（4）温度低（5）通风条件不好（6）培养基离子种类及比例不适宜3.预防措施：（1）适当控制培养基中无机盐成分，适当提高蔗糖和琼脂浓度，减少含氮化合物的用量，降低培养基的水势。 （2）适当降低CTK和GA的浓度。考虑加入适当的脱落酸。（3）增加自然光照，控制光照时间；增加容器通气，控制温度。（4）加入其他物质（如活性炭、多效唑、CCC）。30、组培有些什么不同的叫法？a离体无性快速繁殖b试管苗繁殖c植物快速繁殖d植物克隆e植物组织培养（组培）f细胞工程（包括细胞培养、细胞融合、组织培养、器官培养、转基因）31、组培有些什么用途？在植物育种上的应用a创造单倍体和三倍体 b快速获得纯合材料c克服远缘杂交不亲和 d克服杂种胚早期夭折 e导入外源基因 f细胞水平上筛选突变体g种质资源保存 h种苗脱毒与快速繁殖i细胞培养生产次生产物j植物遗传，生理生化及病理研究32、组培大概的过程可分为哪几个阶段？阶段，无菌培养物的建立；阶段，增殖阶段（继代培养）；阶段，诱导长芽或生根；阶段IV，植株的移栽。33、如何进行壮苗？如何进行试管苗的移栽？生根与壮苗：在材料增殖到一定数量后，就使部分培养物分流，进入壮苗和生根阶段。一般认为矿物质浓度较高时有利于发展茎叶，而较低时有利于生根，所以多采用1/2或1/4的MS（生根）培养基，全部去掉或仅用很低浓度的细胞分裂