兽医微生物学肠杆菌科

19991228002,.,1,第十六章肠杆菌科,内容提要：p97第一节埃希菌属第二节沙门氏菌属第三节耶尔森菌属第四节其他肠道杆菌属,第三篇,19991228002,.,2,本科共同特性为：革兰氏阴性、无芽孢的兼性厌氧菌，共28属、110种。多为正常肠道菌群成员。沙门氏菌属、志贺菌属、以及埃希菌属和耶尔森菌属的部分成员对人和动物有广泛的致病性，在公共卫生和兽医临有重要意义。第一节埃希菌属本属现有5个种，其中最重要的种是大肠埃希菌(E.coli)，俗称大肠杆菌，下分血清型。本菌系人和温血动物肠道内正常菌群成员之一。大肠杆菌常被用作粪便直接或间接污染的检测指标（水、空气）；本菌还是分子生物学和基因工程中重要的实验材料和研究对象，原核表达。,19991228002,.,3,一、形态染色特性大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢的杆菌，大小0.4-0.7um2-3um，两端钝圆、散在，周身鞭毛可运动，多有菌毛。二、培养及生化特性本菌为兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好，在营养琼脂上，形成圆形凸起、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，径约2-3mm；本菌大多可以发酵乳糖产酸产气，麦康凯琼脂上形成红色菌落；在伊红美蓝琼脂上产生黑色带金属闪光的菌落；一些致病性菌株在绵羊血平板上呈溶血。,19991228002,.,4,粪便中大肠杆菌的分离与鉴定,10倍递增稀释,鉴定、保存,19991228002,.,5,空气中大肠杆菌的分离与鉴定,样本,37培养24h,染色镜检,纯培养,先进行初步生化鉴定，不确定的菌株再用API20E鉴定,API20E鉴定试条,19991228002,.,6,三、抗原及血清型大肠杆菌抗原主要有O、K和H三种，是本菌血清型鉴定的物质基础。已确定的大肠杆菌O抗原有173种，K抗原有80种，H抗原有56种。大肠杆菌血清型可高达数万种，但致病性大肠杆菌的血清型数量是有限的。1.O抗原耐热，121C加热2h不破坏其抗原性。抗原性特异性决定于脂多糖-LPS的特异多糖侧链的结构。每个菌株只含有一种O抗原，用单因子抗O血清做玻板或试管凝集试验鉴定之。2.K抗原热不稳定抗原，为被膜或荚膜、菌毛抗原。具有K抗原菌株不被抗O血清凝集，称为O不凝集性。一个菌落可含1-2种不同K抗原，也有无K抗原的菌株。,19991228002,.,7,19991228002,.,8,产肠毒素大肠杆菌(ETEC)ETEC系一类致人和幼畜(初生仔猪黄痢、犊牛、羔羊及断奶仔猪腹泻)腹泻的最常见的病原性大肠杆菌。其毒力因子主要由黏附素性菌毛和肠毒素两类构成。初生幼畜被ETEC感染后常因剧烈水样腹泻和迅速脱水死亡，发病率和死亡率均很高。(1)黏附性菌毛，能黏附于宿主的小肠上皮细胞，故又称其为黏附素或定居因子，对其抗原称作黏附素抗原或定居因子抗原。,19991228002,.,9,(2)肠毒素是ETEC在体内或体外生长时产生并分泌到胞外的一种蛋白质性毒素。分为:不耐热肠毒素(LT：heat-labileenterotoxin)和耐热肠毒素(ST:heatstabileenterotoxin)二种。可使肠细胞分泌机能亢进，引起水样腹泻和迅速脱水。LT对热敏感，有抗原性，6530min即被灭活。ST耐热，无抗原性，它耐100加热30min而不失活，能抵抗多种蛋白酶作用。2.产类志贺毒素大肠杆菌(SLTEC)系一飞在体内或体外生长时可产生类志贺毒素(SLT)的病原性大肠杆菌。,第16章,19991228002,.,10,在动物SLTEC可致猪的水肿病，以头部、肠系膜和胃壁浆液性水肿为特征，常伴有共济失调、麻痹或惊厥等神经症状，发病率较低但致死率很高。发现SLTEC与犊牛出血性结肠炎有关，在致幼兔腹泻的大肠杆菌菌株中也查到SLT。其毒力因子包括粘附性菌毛和致水肿病2型类志贺毒素。(1)粘附性菌毛，F18菌毛是猪水肿病的SLTEC菌株的一个重要的毒力因子，它有助于细菌在猪肠黏膜上皮细胞定居和繁殖。(2)致水肿病2型类志贺毒素。,19991228002,.,11,毒力岛EHEC具有35kbLEE毒力岛p105禽致病性大肠杆菌（APEC）:引起禽类急性的、系统性疾病的病原性大肠杆杆菌。表现为：气囊炎、肺炎、心包炎、肝周炎等,19991228002,.,12,（四）大肠杆菌主要毒素基因的检测,5重PCR方法检测5种主要毒素基因STa、STb、LTa、Stx1和Stx2/Stx2e；对动物舍环境中分离到的380株大肠杆菌进行了检测：5个鸡舍117株5个猪舍120株6个牛舍143株,380株,19991228002,.,13,Multiplex-PCR特异性检测,NM123456789M,664bp,Stx1,484bp,Stx2/Stx2e,360bp,STb,282bp,LTa,183bp,STa,1,E.coliC83600;2,E.coliC83710;3,E.coliC83600;4,E.coliisolatedfromair;5,E.coliSDZ21;6,E.coliSDZ15;7,E.coliH30;8and9,E.coliisolatedfromair;N,Negativecontrol;M,DL2000DNAMarker,19991228002,.,14,五、微生物学诊断分离与鉴定程序可参见图8-1,p106。采病料分离培养败血症病例采集内脏组织（肝脾肾等），对幼畜腹泻及猪水肿病病例应取其各段小肠内容物或黏膜刮取物以及相应肠段的肠系膜淋巴结，分别在麦康凯平板和血平板上划线分离培养。2.可疑菌落生化鉴定挑取麦康凯平板上的红色菌落或血平板上呈溶血(仔猪黄痢与水肿病菌株)的典型菌落几个，分别转种三糖铁（TSI）培养基和普通琼脂斜面做初步生化鉴定和纯培养。,19991228002,.,15,3.纯培养物抗原鉴定将TSI琼脂反应模式符合埃希氏菌属的生长物或其相应的普通斜面纯培养物做O、K抗原鉴定。4.检测毒力因子确定其属于何类致病性大肠杆菌。六、防治1.目前已有菌苗，包括抗粘附素的含单价或多价菌毛抗原的灭活全菌苗或亚单位苗；2.抗肠毒素的类毒素苗；3.表达一种或两种粘附素以及同时表达一种粘附素和肠毒素的基因工程菌苗等。用这些菌苗免疫怀孕母畜后，均能使其后代从初乳中获得抗体而被动保护。,19991228002,.,16,4.用多种常见O抗原的鸡大肠杆菌灭活油佐剂菌苗，给各种日龄鸡注射后可获得较好的预防效果，免疫力可达3-5月不等。5.对猪水肿病预防，用由几种常见O抗原菌株制成的灭活菌苗，小试结果表明，此苗能较显著减少仔猪群中该诉的发病率，保护率约60-70。6.生物学方法微生态制剂。7.抗菌药物耐药菌株产生，药敏试验。,19991228002,.,17,第二节沙门氏菌属沙门氏菌属是一群革兰氏阴性无芽孢杆菌，通常都以周生鞭毛运动。在三糖铁琼脂上常产生H2S，大多沙门氏菌不发酵乳唐。绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性，能引起人和动物的多种不同临床表现的沙门氏菌病，并为人类食物中毒的主要病原之一，在医学、兽医和公共卫生上均十分重要。沙门氏菌血清型复杂，有2500种以上。几乎包括所有对人和动物致病的血清型菌株。,19991228002,.,18,一、形态及染色特性形态染色特性与同科其他菌属相似，呈杆状，0.7-1.5umX2.0-5.0um，革兰氏阴性。除雏沙门氏菌和鸡沙门氏菌无鞭毛不运动外，其余均有周生鞭毛可运动，大多数有菌毛。二、培养及生化特性本属大多数细菌的培养特性与埃希氏菌属相似。沙门氏菌在肉汤琼脂上生长贫瘠，形成较小的菌落。在肠道菌鉴别或选择性培养基上，大多数菌株因不发酵乳糖而形成无色菌落。在SS培养基生长良好!,19991228002,.,19,三、抗原及变异沙门氏菌具有O、H、K和菌毛四种抗原。O和H抗原是其主要抗原，构成沙门氏菌血清型抗原。O抗原是耐热多糖LPS抗原，1002.5h不被破坏。一个菌体可有几种O抗原成分，以数字表示。将有共同O抗原(群因子)的血清型菌归为一群，以大写英文字母表示A-F。K抗原是部分沙门氏菌表面包膜抗原，又称为Vi抗原，不耐热，601h破坏。H抗原是鞭毛抗原，有63种，不耐热，6030-60min破坏。H抗原可分为第1相和第2相两种。,19991228002,.,20,本菌属至少已有2500个血清型。对人和动物致病的血清型绝大多数属于A-F群，在疾病中经常出现的却不足50种。四、致病性本属菌均有致病性，具有极其广泛的动物宿主。感染动物后常导致严重的疾病，并成为人类沙门氏菌病的传染源之一。因此，沙门氏菌病是一种重要的人畜共患病。发病本菌最常侵害幼、青年动物，使之发生败血症、胃肠炎及其他组织局部炎症。,19991228002,.,21,第16章,对成年动物则引起散发性或局限性沙门氏菌病，发生败血症的怀孕母畜可表现流产，在一定条件下亦引起急性流行性暴发。传播沙门氏菌常在动物与动物、动物与人、人与人之间通过直接或间接的途径传播，没有中间宿主。主要传染途径是消化道。许多环境条件，如卫生不良、过度拥挤、气候恶乡等均可增加易感动物发病。五、致病性类型根据对宿主嗜性不同，可将沙门氏菌分成三群。,19991228002,.,22,第一群具有高度专嗜性沙门氏菌，它们只对人或某种动物产生特定的疾病。例如鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌仅使鸡和火鸡发病，马流产、牛流产和羊流产等沙门氏菌；猪伤寒沙门氏菌仅侵害猪。第二群是在一定程度适应于特定动物的偏嗜性沙门氏菌，如猪霍乱和都柏林沙门氏菌，分别是猪和牛羊的致病菌。第三群是泛嗜性沙门氏菌，它们有广泛宿主谱，能引起人和各种动物的沙门氏菌病，具有重要的公共卫生意义。如鼠伤寒和肠炎沙门氏菌等。,19991228002,.,23,六、毒力因子沙门氏菌毒力因子有多种，主要有脂多糖(LPS)、肠毒素、细胞毒素及毒力基因等。七、免疫性体液抗体与细胞免疫在抗沙门氏菌感染中都很重要。认为细胞免疫在抗沙门氏菌感染中具有重要作用。八、微生物学诊断1.未污染病料直接接种普通琼脂、血琼脂或SS鉴别培养基平板分离细菌；2.污染材料如饮水、粪便、饲料、肠内容物和已败坏组织等，常需要增菌培养基增菌后再行分离。,19991228002,.,24,3.增菌培养基最常用的有亮绿-胆盐-四硫磺酸钠肉汤、四硫磺酸盐增菌液、亚硒酸盐增菌液以及亮绿-胱氨酸-亚硒酸氢钠增菌液等。这些培养基能抑制其他杂菌生长而有利于沙门氏菌大量繁殖。4.鉴别培养基麦康凯、伊红美蓝、SS、去氧胆盐钠-枸橼酸盐等琼脂，绝大多数沙门氏菌因不发酵乳糖，故在麦康凯平板上其菌落颜色与大肠杆菌不同,不显红色！可以鉴别。5.生化试验挑可疑菌落分别接种三糖铁(TSI)琼脂和尿素琼脂等培养，观察其生化特性。,19991228002,.,25,6.血清型分型鉴定分离菌株的血清型，可应用分群抗O血清(A-F群)作凝集试验，以鉴定其群别。也可用直接凝集、免疫荧光、ELISA、PCR等方法鉴定。九、防制目前的疫苗多限于预防各种家畜特有的沙门氏菌病，例如猪副伤寒、马流产以及牛、羊的都柏林等沙门氏菌的灭