第4节 分光光度测量方法

第五章紫外-可见分光光度法,一、普通分光光度法二、示差分光光度法三、双波长分光光度法四、导数分光光度法,第四节分光光度测定方法,一、普通分光光度法,1.单组分的测定通常采用A-C标准曲线法定量测定。2.多组分的同时测定若各组分的吸收曲线互不重叠，则可在各自最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组分测定没有区别。若各组分的吸收曲线互有重叠，则可根据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组分的含量。A1=a1bcab1bcbA2=a2bcab2bcb,二、示差分光光度法（示差法）,普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为cs(cscx)。则：Ax=bcxAs=bcsxs=b(cxcs）=bc测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差。,示差分光光度法（示差法）,AAxAs=b(cxcs）=bc测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差A。示差法测得的吸光度与c呈直线关系。由标准曲线上查得相应的c值，则待测溶液浓度cx：cx=cs+c,示差法标尺扩展原理：,普通法：cs的T=10%；cx的T=5%示差法：cs做参比，调T=100%则：cx的T=50%；标尺扩展10倍,三、双波长分光光度法,不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色光(1和2)；以参比波长1处的吸光度A1作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。AA2A1(21)bc两波长处测得的吸光度差值A与待测组分浓度成正比。1和2分别表示待测组分在1和2处的摩尔吸光系数。,关键问题:,测量波长2和参比波长1的选择与组合以两组分x和y的双波长法测定为例：设：x为待测组分，y为干扰组分，二者的吸光度差分别为:Ax和Ay，则该体系的总吸光度差Ax+y为：Ax+y=Ax+Ay如何选择波长1、2有一定的要求。,选择波长组合1、2的基本要求是：,选定的波长1和2处干扰组分应具有相同吸光度，即：Ay=Ay2Ay1=0故：Ax+y=Ax=(x2x1)bcx此时：测得的吸光度差A只与待测组分x的浓度呈线性关系，而与干扰组分y无关。若x为干扰组分，则也可用同样的方法测定y组分。,可采用作图法选择符合上述两个条件的波长组合。,在选定的两个波长1和2处待测组分的吸光度应具有足够大的差值。,四、导数分光光度法,导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、消除背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析等方面，显示了很大的优越性。利用吸光度(或透光度)对波长的导数曲线来进行分析：0e-bc假定入射光强度0在整个波长范围内保持恒定：dI0/d0则：dI/d0bce-bcd/d0bcd/d,导数分光光度法,dI/d0bcd/d一阶导数信号与试样浓度呈线性关系；测定灵敏度依赖于摩尔吸光系数对波长的变化率d/d。吸收曲线的拐点处d/d最大，故其灵敏度最高(见图）。同理可以导出其二阶和三阶导数光谱（略）