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动物细胞核的分离与鉴定,临床六班第二组,小组成员,吴文胜：1110150626,夏禹：1110150627,穆顺峰：1110150635,卢伟：1110150640,实验大纲,小组成员实验原理实验步骤注意事项实验仪器、设备、器具表实验试剂表预期结果,二、实验原理,核体的制备方法:核体是指含有少量细胞质并由质膜包裹的细胞核。因为在实际中我们不可能100%的得到细胞核，因此,我们只能制备含有少量细胞质的核体，核体的制备方法主要有吸出法和原生质体破裂法和排除法等。在本实验中我们采用排除法来制备核体。,XY,排除法制备核体:通过细胞松弛和高速离心的作用使细胞核排出，然后从离心管底部沉淀中收集获得核体。,XY,细胞核的鉴定:因为细胞核中主要含DNA，呈酸性(但本组染的是细胞核的碱性部分）。因此将分离出的核体经三氯醋酸处理,抽提出核酸后，利用碱性固绿溶液染色性，可以使细胞核内的碱性蛋白显示出来。,三、实验步骤,1、细胞培养（因为培养时间过长，所以由老师帮助完成，选讲，试剂不用自备)2秋水仙碱处理：细胞培养一段时间以后加入0.1g/ml的秋水仙碱，处理细胞4860min。并固定在圆板上。,XY,3细胞松弛素处理：在离心管内加入5ml预热至37的细胞松弛素B溶液将固定有动物细胞的圆板面朝下放入离心管内，固定圆板位置后,再加入10ml37的细胞松弛素B溶液。4离心：在100015000r/min核体从细胞排出。,XY,5收集核体：由于核体的贴附力弱，可以从离心管底部的沉淀中收集。6固定：将收集的核体涂于玻片上制成涂片，滴15%乙醇于涂片上，固定5min，室温晾干。,XY,7三氯醋酸处理：将已固定的血涂片浸在90的三氯醋酸溶液中处理20min，细流水反复冲洗玻片上的三氯醋酸直至冲尽。用滤纸吸于玻片上多余水分晾干。8.染色：将制作好的涂片放入0.1%碱性固绿染液中染色1015min，细流水冲去多余染液，晾干，镜检。,四、注意事项,1、在离心管内加入的5ml细胞核松弛素B溶液要预热到37，因为只有这样才接近动物的最佳体温37。2、涂片在用三氯醋酸处理时，时间不宜过长或过短，过长会使核膜裂解，过短使抽提的核酸不够。,XY,3、在染色时，时间一定要足够，否则染色不完全得不到理想的实验结果。4、因去掉胞质的核体贴附能力弱，因注意在固定、三氯醋酸处理、染色时、尽量避免胞核的脱落。,五、实验仪器、设备、器具表,实验试剂表,预期结果,经碱
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