亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态与培美曲塞联合顺铂治疗非小细胞肺癌疗效的关系.docx

亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与培美曲塞联合顺铂治疗非小细胞肺癌疗效的关系张智勇， 邹晓婷，李爽 （佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 ） 郑丽星 齐秀芳（佳木斯市中心医院，黑龙江 佳木斯）赵蕴伟【摘要】目的 探索非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者亚甲基四氢叶酸还原酶 ( methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR) 基因 C677T多态性与培美曲塞联合顺铂化疗疗效的关系。方法 选取88例（NSCLC)患者入组，化疗前抽取患者外周血液，通过TaqmanMGB探针实时荧光定量 PCR 方法检测患者MTHFR677C/T位点的基因多态性，并分析其与化疗疗效的关系。结果 所有患者中，MTHFR 基因C677T野生型（CC）的分布为61.4%（54/88），纯合突变型(TT）为 13.6%（12/88），杂合突变型(CT）为 25.0%（22/88）。使用培美曲塞/顺铂化疗方案的疗效：野生型（CC）PR 18 例，SD 19 例，PD 17 例，总有效率(ORR）为 33.3%；纯合突变型(TT）PR 2 例，SD6例，PD 4 例，ORR 为16.7%；杂合突变型（CT）SD 13例，PD 9 例，ORR 为 0。CC 型患者化疗 ORR 显著高于TT型和CT型者(P=0.001）。CC型与TT型/CT型患者的肿瘤进展时间(TTP）分别为6.2个月和4.7个月，差异有统计学意义（P=0.022）。结论 MTHFR 基因 C677T CC 型患者的TTP显著长于TT型患者和CT型患者。因此，野生型（CC）NSCLC患者可能是使用培美曲塞联合顺铂化疗的有效人群。【关键词】非小细胞肺癌；MTHFR；基因多态性；化疗疗效；铂类 叶酸的代谢过程中的关键酶之一就是亚甲基四氢叶酸还原酶，它是不可缺少的一种酶,它不仅在嘌呤及嘧啶的合成中起到作用,而且还参与到DNA的修复过程1。MTHFR的基因能够被分为好多种突变类型,其中C677T点突变(丙氨酸缬氨酸）是研究中最常见的一种。基因组DNA的甲基化可因MTHFR活性的高低而发生不同的变化。培美曲塞是临床一线用药，是一种多靶点叶酸拮抗剂,它能够发挥抗肿瘤作用，其主要作用机理就是通过抑制叶酸代谢过程中的多个关键酶的活性。培美曲塞联合铂类已被多项实验证实在NSCLC的一线治疗中具有良好的疗效。本研究旨在观察NSCLC患者MTHFR基因 C677T 多态性与培美曲塞联合顺铂化疗方案疗效的关系,现做如下报告。1、 资料与方法 1.1 一般资料 收集2015年3月至2016年6月我院经病理确诊的非小细胞肺癌患者88例,男性36例,女性52例,年龄为4074岁,中位年龄57岁。所有患者均属初治,入组标准:年龄18岁,体力状况( ECOG) 评分2 分,化疗前均做好所有相关检查,血常规、肝肾功能等生化常规、胸部 CT或彩超、心脏功能等,以保证足够的肾脏、肝脏和血液储备,化疗可以顺利进行。所有患者签署化疗知情同意书和实验研究知情同意书。1.2 治疗方法 化疗方案: 所有患者用培美曲塞 + 顺铂方案化疗( 培美曲塞 500 mg/m2,顺铂75mg/m2),均于第一天静脉输注,21天为1周期,用药前1周肌注维生素 B12注射液1mg,每3周期1次; 用药前1周口服叶酸片400 mg,1次/d,直至整个治疗结束。每2个周期末予CT扫描,检查评价疗效1次。1.3 检测方法1.3.1标本采集 所有患者化疗前清晨空腹抽取静脉血液2 ml于EDTA-K2 抗凝管中,用全血DNA提取试剂盒提取基因组DNA ,置于-80冰箱冻存备用。1.3.2 MTHFR C677T基因型分析采用由OMEGA公司产生的试剂盒，按照说明书步骤从肺癌全血标本中提取高相对分子量DNA。单核苷酸多态性检测采用美国ABI公司生产的TaqmanGMB探针基因分型技术，在ABI7900适时定量PCR扩增仪(Applied Biosystems Inc.，FosterCity，CA)上进行整个实验。反应体系: Master Mix 2.5 L，Primer Probe 0.25 L，DNA 1L，DEPC 水 1.25 L，反应条件: 95 10 分钟，92 15 秒，60 1 分钟 30 秒，5 L 反应体系，45 个循环。设定X轴为野生型C并记为VIC 荧光，Y轴为杂合性T记为 FAM 荧光，记录不同荧光扩增情况。区分基因型（图1） 注 其中 X 轴为野生型 C，Y 轴为突变型 T，红色标记为 CC 基因型，绿色标记为CT基因型，蓝色标记为TT基因型 图 1 基因型散点图1.4 疗效评定标准疗效评定按实体瘤疗效评价标准（RECIST）标准分为完全缓解(complete response，CR)、部分缓解(partialresponse，PR)、稳定(stable disease，SD)和进展(progressive disease，PD)。疗效评价有效为CR+PR，总有效率（ORR）（%）= CR+ PR/（CR+ PR+SD+PD）100%。1.5 统计学处理使用SPSS19.0软件处理分析数据，计数资料的差别比较用2检验或Fisher精确概率法。计量资料以均数标准差()表示，两组间比较用t检验，P005为差异有统计学意义。2 结果2.1 MTHFR C677T基因多态性分布88例NSCLC患者MTHFR 677C/T存在3种等位基因型，基因频率分别为CC 61.4% (54/88)；TT 13.6% (12/88)；CT 25.0% (22/88)。2.2 MTHFR 基因C677T多态性与一线化疗方案化疗后ORR和 (TTP) 的关系 经培美曲塞联合顺铂化疗后野生型（CC）PR18 例，SD 19 例，PD 17 例，ORR 为33.3%；纯合突变型（TT）PR 2 例，SD 6例，PD 4例，ORR为16.7%；杂合突变型（CT）SD13 例，PD 9例，ORR为0。CC型和TT型/CT型患者的ORR比较，差异有统计学意义（x2 =9.048，P=0.001）。CC型和TT型/CT型患者的TTP分别为6.2个月和4.7个月，差异有统计学意义（t=2.012，P=0.022）。3. 讨论 MTHFR对机体起着重要的作用,是机体叶酸代谢过程中的关键酶之一,可将5,10一亚甲基四氢叶酸催化为5一甲基四氢叶酸,且此反应是不可逆的,后者是机体叶酸在胞外的主要存在形式,是同型半肤氨酸(Hyc)合成蛋氨酸的甲基供体,蛋氨酸可转化为S一腺普甲硫氨酸(SAM),可参与许多代谢反应。相关研究已经证明,细胞毒性药物和干扰DNA合成药物的敏感性及不良反应会受到细胞周期关卡基因、DNA修复基因等基因异常甲基化的影响2-5。 目前在MTHFR基因多态性与肺癌之间的关系方面,相关研究还比较少,各种结论也缺乏统一性。但在MTHFR基因C677T多态性与化疗疗效关系方面,有学者钻研到,MTHFR基因C677T多态性与乳腺癌患者化疗疗效起到相关敏感性。 培美曲塞已被大量研究证实在晚期非小细胞肺癌的一线、二线治疗以及后续的维持治疗中具有非常良好的治疗效果,它是一种多靶点抗叶酸制剂6-8。培美曲塞可以直接抑制叶酸代谢过程中的3种关键酶的活性,通过干扰叶酸代谢从而影响细胞的复制过程。MTHFR在叶酸代谢过程是必不可少的关键酶,它与培美曲塞疗效的关系近年已被大量研究。Smit等9在2009年的试验对240例患者进行了研究,患病均为接受培美曲塞二线治疗的晚期NSCLC患者,其有127例患者接受了MTHFR 677位点的基因检测,研究显示TT因型患者的中位无进展生存时间(7.9个月,95%CI 3.9个月,16个月)CC和CT基因型的中位无进展生存时间(2.9个,95%CI 28个月,3.4个月),经Log-rank检验差异有统计学意义(P=0.03),提示MTHFR基因677位点TT基因型在接受培美曲塞治疗后,其无进展生存时间可延长。铂类药物主要通过与DNA上的腺嘌呤、鸟嘌呤和胞嘧啶结合形成Pt-DNA加合物而产生生化作用,导致DNA的链间交联或链内交联,DNA复制发生障碍,从而使瘤细胞分裂得到抑制。本研究中,MTHFR基因C677T的CC型患者TTP显著长于CT/TT基因型,与Smit等的研究结果相同。 综上所述,具有MTHFR基因C677T CC型患者的化疗疗效显著高于TT型和CT型者,TTP显著长于TT型和CT型者。所以,MTHFR基因C677T的CC型NSCLC患者可能是使用培美曲塞联合顺铂化疗有效的优势人群。参考文献 1 董翠梅,康马飞,赵燕仪,林静,陶利英等，亚甲基四氢叶酸还原酶基因 C677T 多态性与肺腺癌化疗疗效的关系，中国癌症防治杂志J.1674-5671（2014）01-042 SATOH A, TOYOTA M, ITOH F, et al. 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