第七原核基因表达调控PPT课件

.,1,Contents,基因表达调控的基本概念原核基因调控机制乳糖操纵子色氨酸操纵子其他操纵子转录后水平上的调控,.,2,第一节基因表达调控的基本概念,一、基因表达的概念geneexpression：基因转录及翻译的过程。对这个过程的调节就称为generegulation。,rRNA、tRNA编码基因转录合成RNA的过程也属于基因表达,.,3,永久型性表达(constitutiveexpression)适应型表达(adaptiveexpression）,二、基因表达的方式,.,4,1、永久型表达：,指不大受环境变动而变化的一类基因表达。,某些基因在一个个体的几乎所有细胞中持续表达，通常被称为管家基因(housekeepinggene)。,.,5,2、适应性表达指环境的变化容易使其表达水平变动的一类基因表达。应环境条件变化基因表达水平增高的现象称为诱导(induction)，这类基因被称为可诱导的基因(induciblegene)；相反，随环境条件变化而基因表达水平降低的现象称为阻遏(repression)，相应的基因被称为可阻遏的基因(repressiblegene)。,.,6,三、基因表达的规律时间性和空间性,1、时间特异性（temporalspecificity）,.,7,.,8,2、空间特异性(spatialspecificity),基因表达伴随空间顺序所表现出的这种分布差异，实际上是由细胞在器官的分布决定的，所以空间特异性又称细胞或组织特异性(cellortissuespecificity)。,在个体生长全过程，某种基因产物在个体按不同组织空间顺序出现，称之为基因表达的空间特异性。,.,9,四、基因表达调控的生物学意义,适应环境、维持生长和增殖（原核、真核）维持个体发育与分化（真核）,.,10,第二节原核基因调控机制,内容提要：原核基因表达调控环节操纵子学说原核基因调控机制的类型与特点转录水平上调控的其他形式,.,11,一、基因表达调控环节,1、转录水平上的调控（transcriptionalregulation）2、转录后水平上的调控（post-transcriptionalregulation）mRNA加工成熟水平上的调控翻译水平上的调控,.,12,.,13,二、操纵子学说1、操纵子模型的提出1961年，Monod和Jacob提出获1965年诺贝尔生理学和医学奖,JacobandMonod,.,14,2、操纵子的定义,操纵子：是基因表达的协调单位，由启动子、操纵基因及其所控制的一组功能上相关的结构基因所组成。操纵基因受调节基因产物的控制。,.,15,.,16,1、根据操纵子对调节蛋白（阻遏蛋白或激活蛋白）的应答，可分为：正转录调控负转录调控,三、原核基因调控机制的类型与特点,.,17,激活蛋白,正转录调控,负转录调控,正转录调控,如果在没有调节蛋白质存在时基因是关闭的，加入这种调节蛋白质后基因活性就被开启，这样的调控正转录调控。,.,18,激活蛋白,正转录调控,负转录调控,负转录调控,在没有调节蛋白质存在时基因是表达的，加入这种调节蛋白质后基因表达活性便被关闭，这样的调控负转录调控。,.,19,可诱导调节（P235）：指一些基因在特殊的代谢物或化合物的作用下，由原来关闭的状态转变为工作状态，即在某些物质的诱导下使基因活化。例：大肠杆菌的乳糖操纵子分解代谢蛋白的基因,2、根据操纵子对某些能调节它们的小分子的应答，可分为可诱导调节和可阻遏调节两大类：,.,20,酶合成的诱导操纵子模型,诱导物,如果某种物质能够促使细菌产生酶来分解它，这种物质就是诱导物。,.,21,可阻遏调节（P235）：基因平时是开启的，处在产生蛋白质或酶的工作过程中，由于一些特殊代谢物或化合物的积累而将其关闭，阻遏了基因的表达。例：色氨酸操纵子合成代谢蛋白的基因,.,22,酶合成的阻遏操纵子模型,辅阻遏物,如果某种物质能够阻止细菌产生合成这种物质的酶，这种物质就是辅阻遏物。,.,23,3、在负转录调控系统中，调节基因的产物是阻遏蛋白（repressor），起着阻止结构基因转录的作用。根据其作用特征又可分为负控诱导和负控阻遏：在负控诱导系统中，阻遏蛋白与效应物（诱导物）结合时，结构基因转录；在负控阻遏系统中，阻遏蛋白与效应物（辅阻遏物）结合时，结构基因不转录。,.,24,负转录调控系统,负控诱导,负控阻遏,.,25,4、在正转录调控系统中，调节基因的产物是激活蛋白（activator）。根据激活蛋白的作用性质分为正控诱导和正控阻遏在正控诱导系统中，效应物分子（诱导物）的存在使激活蛋白处于活性状态；在正控阻遏系统中，效应物分子（辅阻遏物）的存在使激活蛋白处于非活性状态。,.,26,正转录调控系统,正控诱导,正控阻遏,.,27,四、转录水平上调控的其他形式,1、因子的更换在E.coli中,当细胞从基本的转录机制转入各种特定基因表达时，需要不同的因子指导RNA聚合酶与各种启动子结合。,.,28,大肠杆菌中的各种因子比较,.,29,温度较高,诱导产生各种热休克蛋白由32参与构成的RNA聚合酶与热休克应答基因启动子结合,诱导产生大量的热休克蛋白,适应环境需要,枯草芽孢杆菌芽孢形成有序的因子的替换,RNA聚合酶识别不同基因的启动子,使芽孢形成有关的基因有序地表达,.,30,70与54的比较（P234）,与DNA结合区域不同70-35区和-10区54-24区和-12区与启动子结合顺序不同70在核心酶结合到DNA链上后才能与启动子结合54可在无核心酶的情况下独立结合到启动子上，类似于真核TATA区结合蛋白。,.,31,2、弱化子对基因活性的影响起信号作用的是：有特殊负载的氨酰-tRNA的浓度例：大肠杆菌中的色氨酸操纵子、苯丙氨酸操纵子、苏氨酸操纵子、异亮氨酸操纵子和缬氨酸操纵子；沙门菌的组氨酸操纵子和亮氨酸操纵子、嘧啶合成操纵子等弱化子：当操纵子被阻遏，RNA合成被终止时，起终止转录信号作用的那一段核苷酸被称为弱化子。属于转录调节中的微调整。,.,32,3、降解物对基因活性的调节,降解物抑制作用的调节：提高基因的转录水平，使它由原来的低水平表达变成高水平表达。葡萄糖效应（降解物抑制作用）：有葡萄糖存在时，即使加入乳糖、半乳糖或其他的诱导物，与其相应的操纵子也不会启动，不会产生出代谢这些糖的酶来，这种现象就称。Why?P236降解物抑制作用是通过提高转录强度来调节基因表达的，是一种积极的调节方式。,.,33,4、细菌的应急反应,应急反应的信号是：鸟苷四磷酸和鸟苷五磷酸。产生这两种物质的诱导物是：空载tRNA当AA饥饿时，空载tRNA大量存在，激活焦磷酸转移酶，使鸟苷四磷酸大量合成，而鸟苷四磷酸的出现会关闭许多基因，也会打开一些合成AA的基因，以应付这种紧急状况。鸟苷四磷酸作用原理有待深入研究影响一大批操纵子，属于超级调控因子。,.,34,习题,1、基因表达调控主要表现在两个方面：和。其中，后者又包括mRNA加工成熟水平上的调控和。2、不同生物使用不同的信号来指挥基因调控。原核生物中，和对基因表达起主要影响。在高等真核生物中，和是基因表达调控的最主要手段。3、原核生物的基因调控主要发生在转录水平上，根据调控机制的不同可分为和两面大类。在第二种调控系统中，调节基因的产物是。根据其性质可分为和系统。,.,35,4、在葡萄糖存在的情况下，即使在细菌中加入乳糖、半乳糖或其他的诱导物，与其相应的操纵子也不会启动，不会产生出代谢这些糖的酶来，这种现象称为或称为降解物抑制作用。5、细菌实施应急反应的信号是和。产生这两种物质的诱导物是。6、原核生物调节基因表达的意义是为适应环境，维持（）A、细胞分裂B、细胞分化C器官分化D组织分化7、原核生物的基因调控主要发生在（）。A转录水平B转译水平C转录后水平D转译后水平,.,36,Contents,基因表达调控的基本概念原核基因调控机制乳糖操纵子色氨酸操纵子其他操纵子转录后水平上的调控,.,37,一、乳糖操纵子的结构,-半乳糖苷酶,透过酶,乙酰基转移酶,阻遏蛋白,.,38,Z编码-半乳糖苷酶：将乳糖水解成葡萄糖和半乳糖Y编码-半乳糖苷透过酶：使外界的-半乳糖苷（如乳糖）能透过大肠杆菌细胞壁和原生质膜进入细胞内。A编码-半乳糖苷乙酰基转移酶：乙酰辅酶A上的乙酰基转到-半乳糖苷上，形成乙酰半乳糖。,.,39,二、酶的诱导lac体系受调控的证据,.,40,安慰诱导物：如果某种物质能够促使细菌产生酶而本身又不被分解，这种物质被称为安慰诱导物，如IPTG（异丙基-D-硫代半乳糖苷）。,.,41,.,42,三、乳糖操纵子调控模型,主要内容：Z、Y、A基因的产物由同一条多顺反子的mRNA分子所编码,.,43,这个mRNA分子的启动子紧接着O区，而位于I与O之间的启动子区（P），不能单独起动合成-半乳糖苷酶和透过酶的生理过程。,操纵基因是DNA上的一小段序列（仅为26bp），是阻遏物的结合位点。,.,44,RNA聚合酶结合部位,阻遏物结合部位,.,45,操纵位点的回文序列,.,46,当阻遏物与操纵基因结合时，lacmRNA的转录起始受到抑制。,.,47,诱导物通过与阻遏物结合，改变它的三维构象，使之不能与操纵基因结合，从而激发lacmRNA的合成。当有诱导物存在时，操纵基因区没有被阻遏物占据，所以启动子能够顺利起始mRNA的合成。,.,48,.,49,永久型突变：lacOc,.,50,永久型突变：lacI-,.,51,不可诱导突变（超阻遏）：,.,52,四、影响因子,1、lac操纵子的本底水平表达有两个矛盾是操纵子理论所不能解释的：诱导物需要穿过细胞膜才能与阻遏物结合，而转运诱导物需要透过酶，后者的合成又需要诱导。解释：一些诱导物可以在透过酶不存在时进入细胞？一些透过酶可以在没有诱导物的情况下合成？,.,53,真正的诱导物是异构乳糖而非乳糖，前者是在-半乳糖甘酶的催化下由乳糖形成的，因此，需要有-半乳糖甘酶的预先存在。解释：本底水平的组成型合成：非诱导状态下有少量的lacmRNA合成。,.,54,2、大肠杆菌对乳糖的反应,培养基：甘油按照lac操纵子本底水平的表达，每个细胞内有几个分子的-半乳糖苷酶和-半乳糖苷透过酶；培养基：加入乳糖少量乳糖,透过酶,进入细胞,-半乳糖苷酶,异构乳糖,诱导物,诱导lacmRNA的生物合成,大量乳糖进入细胞,多数被降解为葡萄糖和半乳糖（碳源和能源）,异构乳糖,.,55,乳糖,.,56,诱导物的加入和去除对lacmRNA的影响,-半乳糖苷酶活性,.,57,3、阻遏物lacI基因产物及功能,Lac操纵子阻遏物mRNA是由弱启动子控制下组成型合成的，每个细胞中有5-10个阻遏物分子。当I基因由弱启动子突变成强启动子，细胞内就不可能产生足够的诱导物来克服阻遏状态，整个lac操纵子在这些突变体中就不可诱导。,.,58,4、葡萄糖对lac操纵子的影响,如果将葡萄糖和乳糖同时加入培养基中，lac操纵子处于阻遏状态，不能被诱导；一旦耗尽外源葡萄糖，乳糖就会诱导lac操纵子表达分解乳糖所需的三种酶。代谢物阻遏效应,.,59,5、cAMP与代谢物激活蛋白,代谢物激活蛋白CRP由Crp基因编码，它可与cAMP形成复合物（cAMP-CRP），此复合物是激活lac的重要组成部分，细菌对它的需要是独立的，与阻遏体系无关，转录必需有cAMPCRP复合物结合在启动子区域上。cAMP-CRP复合物是一个不同于阻遏物的正调控因子。Lac操纵子的功能是在这两个相互独立的调控体系作用下实现的。,.,60,cAMPCRP复合物,.,61,P244图7-15,.,62,ATP,腺甘酸环化酶,cAMP（环腺甘酸）,大肠杆菌中，cAMP的浓度受到葡萄糖代谢的调节：缺乏碳源，cAMP浓度高有葡萄糖，cAMP浓度低只有甘油或乳糖等不进行糖酵解途径的碳源，cAMP浓度高；推测糖酵解途径中位于葡糖-6-磷酸与甘油之间的某些代谢产物是腺苷酸环化酶活性的抑制剂。,.,63,无葡萄糖，cAMP浓度高时促进转录,有葡萄糖，cAMP浓度低时不促进转录,CAP的正调控,.,64,.,65,TheLacOperon:WhenGlucoseIsPresentButNotLactose,RNAPol.,Comeon,letmethrough,NowayJose!,.,66,TheLacOperon:WhenLactoseIsPresentButNotGlucose,Lac,Thislactosehasbentmeoutofshape,BindtomePolymerase,RNAPol.,Yipee!,.,67,TheLacOperon:WhenNeitherLactoseNorGlucoseIsPresent,BindtomePolymerase,RNAPol.,STOPRighttherePolymerase,Comeon,letmethrough!,.,68,五、Lac操纵子中的其他问题,1、A基因及其生理功能,半乳糖苷分子,-半乳糖苷酶,分解产物（体内积累，抑制生长）,-半乳糖苷乙酰基转移酶,半乳糖苷分子,乙酰化半乳糖苷分子,-半乳糖苷酶,.,69,2、lac基因产物数量上的比较-半乳糖苷酶：透过酶：乙酰基转移酶=1：0.5：0.2，Why?不同的酶在数量上的差异是由于在翻译水平上受到调节所致。（1）lacmRNA可能与翻译过程中的核糖体相脱离，从而终止蛋白质链的翻译；（后续的AUG密码子再度起始翻译的概率）（2）在lacmRNA分子内部，A基因比Z基因更容易受内切酶作用发生降解。,.,70,3、操纵子的融合与基因工程（基因融合技术）,P,O,Z,Y,A,tsx,P,O,pur结构基因,缺失,lacoperon,puroperon,控制细胞对T6噬菌体敏感性,.,71,Contents,基因表达调控的基本概念原核基因调控机制乳糖操纵子色氨酸操纵子其他操纵子转录后水平上的调控,.,72,一、色氨酸操纵子的结构调控基因结构基因催化分枝酸转变为色氨酸的酶（P247图7-77）,trpR,trp,G,F,.,73,.,74,特点:(1)trpR和trpABCDE不连锁；(2)操纵基因在启动子内(3)有衰减子(attenuator)/弱化子(4)启动子和结构基因不直接相连，二者被前导序列(Leader)所隔开,.,75,二、trp操纵子的阻遏系统,低Trp时：阻遏物不结合操纵基因;高Trp时：阻遏物+Trp结合操纵基因,.,76,三、trp操纵子的弱化机制,衰减子（attenuator）/弱化子前导序列（leadersequence）,.,77,1、弱化子：DNA中可导致转录过早终止的一段核甘酸序列（123-150区）。,123150,.,78,研究引起终止的mRNA碱基序列，发现该区mRNA通过自我配对可以形成茎-环结构，有典型的终止子特点。,.,79,2、前导序列：在trpmRNA5端trpE基因的起始密码前一个长162bp的mRNA片段。,.,80,.,81,3、弱化机制,.,82,.,83,前导肽,转录终止结构,.,84,细菌通过弱化作用弥补阻遏作用的不足，因为阻遏作用只能使转录不起始，对于已经起始的转录，只能通过弱化作用使之中途停下来。阻遏作用的信号是细胞内色氨酸的多少；弱化作用的信号则是细胞内载有色氨酸的tRNA的多少。它通过前导肽的翻译来控制转录的进行，在细菌细胞内这两种作用相辅相成，体现着生物体内周密的调控作用。,.,85,Contents,基因表达调控的基本概念原核基因调控机制乳糖操纵子色氨酸操纵子其他操纵子转录后水平上的调控,.,86,第五节其他操纵子,一、半乳糖操纵子(galactoseoperon),异构酶(galE)乳糖-磷酸尿嘧啶核苷转移酶(galT)半乳糖激酶(galk)。,.,87,gal操纵子的特点：它有两个启动子，其mRNA可从两个不同的起始点开始转录；它有两个O区，一个在P区上游，另一个在结构基因galE内部。,.,88,二、阿拉伯糖操纵子（arabinoseoperon),araB基因、araA基因和araD,形成一个基因簇，简写为araBAD,三个基因的表达受到ara操纵子中araC基因产物AraC蛋白的调控。,.,89,ara操纵子的调控有两个特点：第一，araC表达受到AraC的自身调控。第二，AraC既是ara操纵子的正调节蛋白（需cAMP-CRP的共同参与，起始转录），又是其负调节蛋白。这种双重功能是通过AraC蛋白的两种异构体来实现的（Pi和Pr)。,.,90,.,91,.,92,.,93,Contents,基因表达调控的基本概念原核基因调控机制乳糖操纵子色氨酸操纵子其他操纵子转录后水平上的调控,.,94,一、翻译起始的调控RBS（核糖体结合位点）：mRNA链上起始密码子AUG上游的一段非翻译区。RBS的结合强度取决于SD序列的结构及其与起始密码子AUG之间的距离。SD-4-10（9）-AUG,第六节转录后水平上的调控,.,95,二、稀有密码子对翻译的影响,dnaG(引物酶)RNA引物,dnaG、rpoD和rpsU属于大肠杆菌基因组上的同一个操纵子,50个拷贝的dnaG蛋白、2800个拷贝的rpoD和40000个拷贝的rpsU,.,96,几种蛋白质中异亮氨酸密码子使用频率比较,细胞内对应于稀有密码子的tRNA较少，高频率使用这些密码子的基因翻译过程容易受阻，影响了蛋白质合成的总量。,.,97,三、重叠基因对翻译的影响,.,98,TrpB谷氨酸-异亮氨酸-终止GAA-AUC-UGA-UGG-AAAUG-GAA甲硫氨酸谷氨酸trpA,trpE苏氨酸苯丙氨酸终止ACU-UUC-UGA-UGG-CUAUGAUGGCU甲硫氨酸-丙氨酸-trpD,翻译终止时核糖体立即处在起始环境中，这种重叠的密码子保证了同一核糖体对两个连续基因进行翻译的机制。,.,99,1、关于管家基因叙述错误的是(A)在生物个体的几乎各生长阶段持续表达(B)在生物个体的几乎所有细胞中持续表达(C)在生物个体全生命过程的几乎所有细胞中表达(D)在生物个体的某一生长阶段持续表达(E)在一个物种的几