【毕业学位论文】两种酸性耐热α-淀粉酶的表达研究硕士论文

密级 论文编号: 中国农业科学院 硕士学位论文 两种酸性耐热 请人: 袁铁铮 指导教师: 姚 斌 研究员 申请学位类别: 理学硕士 专业: 生物化学与分子生物学 研究方向: 酶工程及代谢工程 培养单位: 中国农业科学院研究生院 中国农业科学院饲料研究所 提交日期 2006年5月 ：2006 独 创 性 声 明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名： 时间： 2006年 5 月 日 关于论文使用授权的声明 本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 (保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 论文作者签名： 时间： 2006 年 5 月 日 导师签名： 时间： 2006 年 5 月 日 论文评阅人、答辩委员名单 论文题目 两种酸性耐热文作者 袁铁铮 指导教师 姚斌 培养单位中国农业科学院饲料研究所 姓名 职称职务 导师类别 单位 专业 评 阅 人 答辩 主席 答 辩 委 员 答辩时间、地点 记 录 摘 要 ,4C 够以淀粉为底物，从淀粉内部水解1,4泛应用在淀粉糖生产、发酵、纺织、造纸等许多行业，具有巨大的经济价值。本研究尝试利用巴斯德毕赤酵母研究了重组从嗜酸耐热的酸热脂环酸杆菌基因码1301个氨基酸，理论分子量约140因)和分别在大肠杆菌巴斯德毕赤酵母P. 表达产物具有淀粉酶的活性。 纯化酵母中表达的重组研究了它的酶学性质。以可溶性淀粉为底物，范围内, 酶活性保留50以上，它的最适温度65, 在70下处理30分钟，酶活性维持50%以上。重组 根据对除基因+11742883903得全长2115码705个氨基酸，理论分子量约79kD。被克隆到质粒表达载体)，并在大肠杆菌E. 得表达，表达产物具有淀粉酶的活性，证明该截断肽链包含能折叠形成来源于嗜热球菌存在潜在码基因据巴斯德毕赤酵母高效表达基因的密码子使用偏好性，对斯德毕赤酵母能高效表达基因表达量达到60，表达产物合活性染色结果证明纯化得纯度大于90%的样品，并研究了可溶性淀粉为底物，酶活性保留50以上；作用最适温度100 在90下酶活性半衰期约30分钟。低浓度激活且在一定浓度范围内度对活性影响不显著，研究了达产物包括三种分子量分别是64、57、44通常情况下主要以大分子量活性多聚体的形式存在。是存在本研究利用巴斯德毕赤酵母成功表达两种不同来源和性质的酸性耐热过对这两种实了巴斯德毕赤酵母作为表达极端关键词：酸性耐热热脂环酸杆菌，嗜热球菌，巴斯德毕赤酵母, 基因表达，糖基化修饰 I 1,4- in of on to a of in as in on is in In in to of . as to of MY is of pH 5 . of 903bp a 301MY 40. . of . of 60kD pH is as of of 5, a of 0% of 0 0. . is on MY of of 1174 bp 3288 05 9. So is . on of of . 29933 9. up to a 0. of I pH .0 0% of in 0 00 0、.0 0 a2+is to up 0, u2+ to be 4, 57, 44is on of In . . of As a P. of as to 目 录 摘 要. I . 录.文缩略表. 一 章 综 述.粉酶概述. 淀粉. 淀粉酶. . . 酶法加工淀粉. . 应用. . . . . 双功能. . 其它影响. .斯德毕赤酵母表达系统. 巴斯德毕赤酵母. 巴斯德毕赤酵母表达载体. 巴斯德毕赤酵母表达重组蛋白的糖基化修饰. 高表达的策略. 巴斯德毕赤酵母表达系统优势和缺陷.研究的目的和意义. 二 章 来源于酸热脂环酸杆菌嗜酸性耐热.V 验材料. 菌种和质粒载体. 工具酶、生化试剂和试剂盒. 主要实验仪器和装置. 引物合成和.究方法. 酸热脂环酸杆菌培养. 酸热脂环酸杆菌基因组总. 质粒. . 使用. . 基因. 基因. 重组.0 对可溶性淀粉水解程度的测定.1 基因片段克隆和表达.果与分析. 绘制测定. . 基因片断的克隆. 在大肠杆菌中表达. 在巴斯德毕赤酵母中表达. . . 大肠杆菌中表达.论.章小结. 三 章 一种酸性高温.验材料. 菌种和质粒载体. 工具酶、生化试剂和试剂盒. 主要实验仪器和装置. 引物合成和.究方法. . . . 基因. . 淀粉酶活性染色. . 薄层层析分析淀粉分解产物. .果与分析. . . 在毕赤酵母中表达. . 酶学性质研究. 多组分表达产物的分析. . .论.章小结. 四 章 全文结论.考文献. 录.附录1）培养基和试剂的配制方法.附录2）作者简历.附录3）2003. 谢.I 英文缩略表 英文缩写 英文全称 中文名称 状糊精葡萄糖转移酶 氧核糖核酸 水基团分析 乙二醇 码区序列 二胺四乙酸（钠盐） 硫苏糖醇 丙基羧甲基氨基甲烷 磷酸腺苷 血清白蛋白 二烷基硫酸钠 电聚焦 层层析 效液相色谱 f n s 际生物化学联合会酶委员会用于酶的系统命名和编号系统子量 kD 千克/摩尔 华人民共和国国家标准 国农业科学院硕士学位论文 第一章 综 述 第 一 章 综 述 粉酶概述 粉 淀粉(一种碳水化合物，几乎完全是以的平均长度为5001000个葡萄糖残基。淀粉中能溶于热水的一部分叫直链淀粉(不能溶解的叫支链淀粉(曾称为这两种成分是淀粉颗粒的主要成分，含量可以达到7580（图1）。 图