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文档简介
DNA的限制性内切酶酶切分析,1.酶切组分加入体积（2人一组）ddH2O7ul10bufferEcoRI2ul质粒DNA8ulEcoRI3ul盖紧，混匀，稍离心，37水浴反应1h,限制性内切酶(RestrictionEndonuclease,RE):由细菌自身产生，能识别双链DNA分子中特定的碱基顺序，以内切方式水解核酸中的磷酸二酯键，产生粘性末端或平头末端。,实验原理,EcoRI的作用模式图:,产生5突出粘性末端,*GAATTC*CTTAAG*,5,3,5,3,EcoRI,*G,*CTTAA,5,3,3,5,OH,P,AATTC*,G*,5,3,3,5,P,OH,EcoRI,Bcl-2(1.9kb),pBS(2.96kb),pBS-Bcl-2(4.86kb),Bcl-2重组质粒的酶切模式图,2.点样:取4l6上样缓冲液加入20l酶切产物.混匀后取10ul加到点样孔中。3.电泳：100V稳压进行电泳30分钟。4.观察结果：紫外分析仪上观察DNA存在处显亮绿色荧光条带,DNAMarker,样品,2000bp,1000bp,750bp,500bp,250bp,100bp,2961bp,1900bp
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