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文档简介

.,血红蛋白的醋酸纤维素薄膜电泳,.,实验目的,1、掌握血红蛋白醋酸纤维素薄膜电泳的操作。,2、了解醋酸纤维素薄膜电泳的原理和应用，血红蛋白的组成和分类。,.,实验原理,Hb的组成：,Hb的种类：HbA（22）：95-98%HbA2（22）：2-3%HbF（22）：1%；（胎儿、新生儿：70-80%）,4条多肽链构成的珠蛋白（）血红素辅基,.,电泳分离Hb,1、支持物：醋酸纤维薄膜（CAM）2、缓冲液：pH8.6硼酸-氢氧化钠，TEB液,.,实验步骤,2、制备Hb溶液,反复洗涤三次,皂素1滴,Hb溶液（样品）,1、取血:本人指血1015l,.,3、电泳1）醋酸纤维薄膜准备：(已完成）2）点样：点样线上点样（毛面）3）电泳：平衡510min；电泳条件：10V/cm（长），30-40min电泳结束：Hb区带分离后结束电泳。,点样线,8cm,2cm,.,4）染色：丽春红染色8-10min5）洗脱：背景发白，能辨清条带6）观察分析结果,碳酸酐酶,HbA,HbA2,点样线,.,地中海贫血,异常Hb样本,HbH,.,地中海贫血,.,7）定量：,混匀后，520nm测定吸光度值（空白管调零）,HbA%=AHbA*2/(AHbA*2+AHbA2)*100HbA2
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