实验五 大肠杆菌与沙门氏菌ppt课件.ppt

实验六细菌生化特性试验,29.04.2020,1,实验原理,各种细菌在其新陈代谢中，由于利用营养物质的能力有所差异，排泄的代谢产物亦不同，所以利用这点进行生化试验，可达到鉴定细菌种的目的，尤其在鉴定肠道杆菌时，生化试验是极其常用的一种方法。,2,一、目的要求,学习常用的生化实验方法；掌握大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点。,3,个体为杆状,散在或成对,G,二、背景知识介绍,大肠杆菌,中等大小0.4-0.72-3m,大肠埃希氏菌是这个菌群的代表成原；与广泛的兽医临床病征有关，如：犊牛的肠道感染和水泻；幼猪的水泻和腹泻，断奶仔猪水肿病；狗的尿道感染；鸡：脐炎、眼炎、肠炎、肝周炎、肺炎、气囊炎、腹膜炎、肉芽肿等。,4,5,6,个体为杆状,散在或成对,G,沙门氏菌,是一大群寄生于人和动物肠道内、生化特性和抗原结构相似，G，兼性厌氧的无芽胞直杆菌。在医学、兽医和公共卫生上均十分重要：绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性；能致人和动物多种不同临床表现的沙门氏菌病；人类食物中毒的主要病原之一。,7,8,伤寒沙门氏菌,鼠伤寒沙门氏菌,除雏沙门和鸡沙门氏菌外，其余各菌具有周生鞭毛。,9,三、实验材料,常规接种工具：接种棒、酒精灯等革兰氏染色液、玻片、滴管等菌种:大肠杆菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（1个/组）沙门氏菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（1个/组）大肠杆菌、沙门氏菌的邓亨氏蛋白胨水培养物；大肠杆菌、沙门氏菌的葡萄糖蛋白胨水培养物。培养基：三糖铁斜面（1支/人）生化管：葡、乳、麦、甘、蔗、H2S、尿、枸（1套/人）试剂：吲哚试剂、M.R试剂、V-P试剂等,10,四、实验内容,观察大肠杆菌在普通琼脂上的生长表现；大肠杆菌在麦康凯平板上生长表现；沙门氏菌在普通琼脂上的生长表现；沙门氏菌在麦康凯平板上生长表现；大肠杆菌与沙门氏菌的革兰氏染色、镜检；记录结果。,11,三糖铁琼脂接种,挑取待试菌菌落穿刺接种三糖铁底部并涂布于斜面；置37培养。,12,生化管接种培养,糖发酵试验：葡乳麦甘蔗H2S试验；尿素酶试验；枸橼酸盐利用试验。,葡乳麦甘蔗H2S尿枸,13,葡乳麦甘蔗H2S尿枸,大肠杆菌,沙门氏菌,大肠杆菌,沙门氏菌,置37培养,14,吲哚试验,接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL邓亨氏蛋白胨水中，置37培养3-5d；静置分层后，沿试管壁加入吲哚试剂1mL；上层变为红色者为阳性反应。,15,吲哚试验原理,蛋白质中的色氨酸,红色,先用乙醇溶解试剂后加盐酸，避光保存。,16,M.R试验,接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL葡萄糖蛋白胨水中，置37培养3-5d）；于培养物中加入几滴试剂；变红色者为阳性反应，桔红到黄色则为阴性。,17,V-P试验,接种大肠杆菌或沙门氏菌于1mL葡萄糖蛋白胨水中，置37培养3-5d）；于培养物中加入0.5mLV-P甲液；随后加V-P乙液0.5mL，轻摇；静置10-15min。15min内变红者为阳性。,18,M.R与V-P试验原理,M.R试验：甲基红是一种pH指示剂：当细菌分解葡萄糖产酸且产酸量大时；在加入甲基红指示剂后显红色为阳性。,pH4.4-6.2红黄,葡萄糖,丙酮酸,乙酰甲基甲醇,2,3-丁二烯醇,某些细菌能发酵,二乙酰,碱,V-P试验：,+,胨中的胍基化合物,注意：通常M.R和V-P试验是密切相关：如果一个微生物M.R是阳性，则V-P是阴性；或者相反。,粉红色化合物,+,19,M.R试剂,V-P试剂,甲基红0.02g95酒精60mL蒸馏水40mL,甲液：萘酚酒精溶液（萘酚5g无水乙醇100mL）乙液：KOH溶液（KOH40g，水100ml）,将甲液和乙液分装棕色瓶中，于4-10保存。,20,五、结果观察,大肠杆菌的生长表现,普通琼脂：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径约23mm；麦康凯：琼脂上形成红色菌落较大的菌落。,21,三糖铁琼脂,反应模式表示：,22,沙门氏菌的生长表现,普通琼脂：生长不良；麦康凯：琼脂上形成灰白色菌落。,23,三糖铁琼脂,反应模式表示：,24,细菌的染色、镜检,大肠杆菌,沙门氏菌,G直杆菌，大小0.4-0.72-3m，无芽胞，两端钝圆，散在或成对。,25,生化管接种培养,葡乳麦甘蔗H2S尿枸,葡乳麦甘蔗H2S尿枸,大肠杆菌,沙门氏菌,/-,26,吲哚、M.R、V-P试验结果,大肠杆菌,沙门氏菌,吲哚试验,M.R试验,V-P试验,吲哚试验,M.R试验,V-P试验,27,六、思考题,革兰氏染色特性与形态特点