侵袭性真菌病的辅助诊断方法PPT课件.ppt

1,1,内容目录,一、真菌感染概,一、真菌感染概述二、真菌与葡聚糖三、鲎试验与G试验四、G试验临床意义五、“生物探针”介绍六、“生物探针”操作流程七、“生物探针”的临床比对八、G试验的影响因素,2,3,CharlesRiverLaboratories,作为全球最大的实验动物公司，CharlesRiverLaboratories一直是全球实验动物商业化繁育和市场供应的领导者，拥有分布在北美、欧洲和日本的15个分设施和遍布全球的销售网络；已成为一个生物医学前临床产品和服务的主要供应商。,4,库珀博士,CREndosafe（恩度斯弗）公司是美国著名三大鲎试剂企业之一,有国际知名权威学者詹母斯弗.库珀博士(Dr.JammesF.Cooper)创建。库珀博士是细菌内毒素检查研究领域的先驱。1971年他与Lein及Banger等人提出以鲎实验法检查热源，并率先证明了鲎实验法作为注射药品热源检查的敏感方法的价值。1972年他协助美国(TheparentralDrugAssociation)的鲎试剂.他一直主持着美国非经肠道药物协会(TheparenteralDrugAssociatoin)的鲎实验应用促进工作,以及每年一届的美国南卡罗纳州查尔顿的鲎实验学术会议。,5,库珀博士创建的Endosafe公司现以成为美国鲎试剂(LAL)市场最大的供应商.该公司的鲎试剂以其良好的稳定性,广泛的适用性以及优越的抗干扰性能享誉国际医药工业界.,6,一、真菌感染概述,真菌感染：真菌感染在通常情况下我们最常见的是表皮的感染，例如头癣、体癣、甲癣等，由于侵犯的部位大都表浅，不会导致严重问题，因而叫浅部真菌感染；深部真菌感染则是真菌突破人体天然屏障导致组织脏器的感染。,7,7,美国死于感染性疾病的十大原因,真菌感染的死亡率上升了3.4倍（死亡率：0.72.4/100,000）,8,8,EORTC/MSG原称侵袭性真菌感染（IFI），修订后改称IFD；是指真菌侵入人体，在组织、器官或血液中生长、繁殖，并导致炎症反应及组织损伤的疾病。是真菌感染致死的重要原因,侵袭性真菌病(InvasiveFungalDisease,IFD),9,9,侵袭性真菌病已变得越来越常见,10,10,侵袭性真菌感染的诊断标准,G试验可作为拟诊病例的微生物学标志,11,11,主要可引发侵袭性真菌病的疾病,肿瘤类：胃癌，肝癌，肝内胆管癌，肺癌，多发性骨髓瘤，白血病，恶性淋巴瘤,12,12,二、真菌与葡聚糖,2020/5/1,13,1.某些真菌的细胞壁结构,13,2.细胞壁含有葡聚糖组分的真菌：（1）是导致侵袭性真菌病(IFD)的常见真菌。（2）细胞壁有葡聚糖组分,2020/5/1,14,14,这类真菌有：念珠菌曲霉菌耶氏肺孢菌镰刀酶隐球菌接合菌.,2020/5/1,15,15,北京301医院尸检结果（7797年）肺真菌病发生率3.7(38/1027),隐球菌病、接合菌病占真菌病比例不高,16,16,当人体深部受这类真菌感染时，真菌在代谢过程会不断释放出葡聚糖。检查患者的血液（血浆或血清），会发现葡聚糖含量明显高于非感染者。因此，葡聚糖可作为具有这种细胞结构的真菌感染标识物。,2020/5/1,17,17,三、鲎试验与G试验,1.鲎（Hu，后）试验,2020/5/1,18,18,鲎是地球上最古老的海洋生物之一，已有三亿多年的历史，人们称它为“活化石”。,雌,雄,2020/5/1,19,19,研究发现，鲎的循环细胞（阿米巴细胞）中含有一种特殊的凝固酶原。这种凝固酶原可以被自然界广泛存在的两种物质激活为凝固酶，从而导致一系列的生化反应。这两种物质就是脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)和(1-3)-D葡聚糖。,2020/5/1,20,20,人们利用鲎的阿米巴细胞溶胞物制备成了鲎试剂（LAL或TAL）。通常称使用鲎试剂检测脂多糖（LPS）或-葡聚糖（-G）的试验为鲎试验（LALTestorTALTest）。,2020/5/1,21,21,2.鲎试验反应机理,22,22,3.鲎试验的应用,应用I：细菌内毒素检查(BacterialEndotoxinTest,BET),2020/5/1,23,23,研究发现，革兰氏阴性细菌的细胞壁都含有一种叫内毒素(Endotoxin)的组分。,2020/5/1,24,24,内毒素是能够引起哺乳动物原反应的主要热原物质。革兰氏阴性细菌在新陈代谢过程不断地向环境释放内毒素，污染药品和医疗器械。因此注射药品和医疗器械都要求必须作细菌内毒素检查（BET）。,2020/5/1,25,25,应用II：革兰氏阴性菌脂多糖检测,2020/5/1,26,26,细菌内毒素的化学成分是脂多糖。当人体深部感染革兰氏阴性菌时，细菌会在体内不断释放内毒素（脂多糖）。检查患者的血液（血浆）、腹水、尿液及脑脊液，会发现脂多糖明显高于非感染者。脂多糖检测对败血症、严重器官衰竭的快速辅助诊断有临床价值。,2020/5/1,27,27,应用III：真菌(1-3)-D葡聚糖检测,2020/5/1,28,28,医学上通常把用于检测真菌葡聚糖的鲎试验称为G试验。这是取葡聚糖的英文名称Glucan的首字母来命名该试验。,2020/5/1,29,29,需要指出的是，隐球菌的细胞壁虽然有葡聚糖组分，在隐球菌感染患者的血液中却检测不出葡聚糖异常。这可能与隐球菌具有特殊的细胞被膜有关。因此G试验不适合对隐球菌感染的检测。,2020/5/1,30,30,四、G试验临床意义,31,31,G试验的临床意义,32,32,G试验的临床意义,33,33,34,34,35,35,G试验应用科室,36,36,五、“生物探针”介绍,37,37,“生物探针”介绍,38,38,“生物探针”介绍,39,39,“生物探针”介绍,40,40,“生物探针”介绍,41,41,“生物探针”功能,快速定量的临床检测方法，帮助临床医生早期诊断目前常规方法难以判断的侵袭性真菌感染、革兰氏阴性菌感染，便于对感染的早期诊断、早期治疗及对治疗的疗效判定。,可检测标本：血浆、血清、尿液、腹水、脑脊液等,42,42,六、“生物探针”操作流程,43,43,“生物探针”操作流程,44,44,“生物探针”操作流程,45,45,“生物探针”操作流程,46,46,“生物探针”操作流程,47,47,“生物探针”操作流程,48,48,“生物探针”操作流程,49,49,“生物探针”操作流程,50,50,“生物探针”操作流程,数据可接入LIS系统等,51,51,侵袭性真菌感染的临床检测方法对比,52,52,产品特点,灵敏度高快速,检测方法严谨,准确性高,特异性好,临床符合率高,53,53,七、“生物探针”的临床比对,J厂家的-G试剂、LPS试剂均无特异性,54,54,最低检测限最低浓度重复性,厂商安度斯最低检测限10pg/ml编号检测结果(pg/ml)阴性(pg/ml)检测日期210.1311.049.859.8610.8710.1810.099.61010.3CV=6.85%1110.0129.81310.7149.81512.41610.3179.7189.6199.4209.9219.6,55,批内精密度,56,批间精密度,57,“生物探针”的临床比对,评价结论：安度斯产品的综合性能具有明显优势。,58,58,八、G试验的影响因素,2020/5/1,59,59,1.检测试剂的灵敏度1.1葡聚糖的量值与标准品,2020/5/1,60,60,2020/5/1,61,目前G试验中葡聚糖采用的单位为重量单位“pg”。pg是一个非常非常微量的单位。因此G试验是一项非常灵敏的生物检测。当然，越是灵敏精确的检测，越容易受到干扰。,61,目前葡聚糖没有公认的标准物质！没有国际标准品，没有国家标准品，也没有公认的行业标准品，只有企业的标准品（质控品）,2020/5/1,62,62,各企业的葡聚糖标准品的来源不一。有的来自茯苓多糖，有的来自香菇多糖，有的来自海藻多糖。不同来源的葡聚糖对鲎试剂的活性不同。各企业的葡聚糖标准品效价不一。你的1pg可能相当我的10pg。相互之间无可比性。,2020/5/1,63,63,无统一的标准品导致不同厂家试剂盒有不同的参考值。有的是10pg为阳性，有的是100pg为阳性。对参考值的表示各厂家也有所不同。有的以全血含量来表示，有的以检测浓度来表示。,2020/5/1,64,64,1.2试验器具对G试验有重要的影响！葡聚糖是自然界广泛存在的一种物质，极容易污染到试验器具。葡聚糖是一种非常稳定的物质，通常的蒸煮高压、辐照等灭菌手段不能彻底破坏葡聚糖。很难找到真正意义的无葡聚糖的器具。,2020/5/1,65,65,G试验使用到的实验器具：采血针采血管（瓶）反应试管移液器具（吸头）最主要的污染来自采血管！,2020/5/1,66,66,重要建议最好使用厂家供应的专用采血管（瓶）其次是用经厂家检测合格的采血管不能使用未经检测的实验器具,2020/5/1,67,67,尊重科学，为患者负责！无效试验是对患者最大的危害！,2020/5/1,68,68,2.试剂的生物特异性如前所述，G试验的检测试验就是鲎试剂。鲎试剂可以对两种物质反应，用于不同的用途。如下图表示。检测内毒素/脂多糖用于革兰氏阴性菌检测鲎试剂检测葡聚糖（G试验）用于真菌检测,2020/5/1,69,69,在检测试剂制备上，应根据试剂的用途制备生物特异性强的检测试剂，如：用于检测细菌脂多糖的试剂，不能对葡聚糖产生反应。用于检测真菌葡聚糖的试剂，不能对脂多糖产生反应。,2020/5/1,70,70,遗憾的是，由于技术的原因，并不是所有厂家的试剂都具有生物特异性。有的试剂盒对LPS和-G都反应。有的试剂盒对非检测对象低浓度时可能不反应，较高浓度时会反应。无生物特异性的试剂盒不能区分细菌感染和真菌感染，不具有临床检测价值！,2020/5/1,71,71,2020/5/1,72,鉴别试剂盒是否具有生物特异性的方法：用该试剂盒与LPS/-G的标准品（质控品）反应。,72,3.某些药物对G试验的影响3.1临床应用发现，注射过香菇多糖注射液的供试者作G试验，其血液中葡聚糖含量会显著增高。因此需要作G试验的供试者应在24小时内避免使用香菇多糖注射液。,2020/5/1,73,73,3.2临床应用发现，使用过脂肪乳的供试者作G试验（包括作LPS检测），反应曲线形态会发生异常，致使检测值非常高。因此需要作G试验的供试者应在24小时内避免使用脂肪乳。,