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文档简介

.,实验四PCR基因扩增,.,实验目的,通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。,.,实验原理,聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)，是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故又称为基因的体外扩增法。在待扩增的DNA片断两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增2n倍。,.,PCR技术的原理,1.变性：在加热或碱性条件下可使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA，称之为变性。2.退火：是模板与引物的复性。引物是与模板某区序列互补的一小段DNA片段。3.延伸：从结合在特定DNA模板上的引物为出发点，将四种脱氧核苷酸以碱基配对形式按53的方向沿着模板顺序合成新的DNA链。,.,.,.,.,.,.,.,.,一般PCR反应条件,.,实验仪器,电泳仪,.,琼脂糖凝胶电泳槽,.,PCR仪,.,凝胶成像系统,.,移液器,.,实验材料,1、DNA模板2、4种dNTP3、引物1、引物24、Taq酶5、琼脂糖6、DNA相对分子质量标准物7、吸头、50ulPCR管,.,试剂,10PCR缓冲液(含Mg2)4dNTP(每种1mmol)Tag酶1U/ulDNA模板引物1:5-GGGGAATTCATGGTGAGCAAGGGC-3引物2:5-GACCTGCAGGCATGCAAGCTTGGC-3引物溶液浓度10pmol/ul,.,实验步骤,1在0.5mlRCR管内配置20ul反应体系：,.,PCR反应程序,(1)94变性5min，(2)94变性1min，(3)52退火1min，(4)72延伸1min。(5)重复(2)-(4)30次（6）72延伸1min。,.,实验报告,要求：1、写出本实验目的、原理；2、实验器材及实验步骤；3、列出实验结果示意图并分析原因。
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