04 【参考】放免分析基本原理ppt课件

放射免疫分析,临床免疫教研室鲍会静Kris_1071313388055866,1,放射免疫分析的基本原理,Content,2,放射免疫分析基本原理,放射免疫分析概述竞争性分析的基本原理非竞争性分析的基本原理两种分析方法的比较,3,放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA），简称放免或放免法，是一种在无须采用生物测定方法的情况下用于检测抗原的实验室测定方法，体外实验。SolomonAaronBersonandRosalynSussmanYalowRosalynSussmanYalowinsulinRIA,放射免疫分析概述,RIA检测技术可以达到10-910-12,4,放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA），广义范围：RIACPBARRAIRMA分析原理分类：竞争性免疫分析非竞争性免疫分析,放射免疫分析概述,5,竞争性免疫分析基本原理-RIA如果标记抗原与非标记抗原对同一抗体有相同的亲和力，则二者在同一反应系统中就会发生与特异抗体的竞争性结合。,竞争性分析的基本原理,Ag+Ag*+Ab-Ag*-Ab(标记抗原-抗体复合物)Ag-Ab(非标记抗原-抗体复合物),1Ag和Ag*同时存在，并均可与Ab反应2Ag*+AgAb的结合位点Ag*或是Ag,6,竞争性免疫分析基本原理-RIA,竞争性分析的基本原理,Ag+Ag*+Ab-Ag*-Ab(标记抗原-抗体复合物)Ag-Ab(非标记抗原-抗体复合物),1Ag的量与可以测量的Ag*+Ab的量形成某种函数关系,2有关于Ag的量的剂量曲线,3获得Ag的未知浓度,7,竞争性免疫分析剂量反应曲线基于抗原抗体反应遵循质量守恒原则反应物与产物之间是动态平衡关系质量作用定量：(lawofmassaction)反应的反应速率与各反应物的浓度的幂的乘积成正比，其中各反应物的浓度的幂的指数即为元反应方程式中该反应物化学计量数的绝对值,竞争性分析的基本原理,NO2+CO=CO2+NOr=kNO2CO,式中r为反应速率，NO2、CO分别为反应物NO2和CO的浓度，k称为反应的速率常数。根据质量作用定律，该反应的级数与反应的分子数是相等的。,8,竞争性免疫分析剂量反应曲线YalowandBerson推导,竞争性分析的基本原理,k1Ag+Ab=Ag-Abk2FB则：K=k1/k2=Ag-Ab/AgAb=B/FAb0一B移项：B/F=KAb0一BF=未结合抗原的摩尔浓度；B=结合抗原(或抗体)的摩尔浓度K=平衡常数；Ab0=抗体位点的初始摩尔浓度=Ab+Ag-Ab,如上式，B/F与B之间应为线性函数关系,9,竞争性免疫分析剂量反应曲线Ekins推导,竞争性分析的基本原理,设：p=标记物加待测物的初始浓度；q=特异性结合物的初始浓度；B=根据放射性测量算得的结合百分率;F=根据放射性测量算得的游离百分率R=B/FB+F=1,根据质量作用定律：k1Ag+Ab=Ag-Abk2,10,竞争性免疫分析剂量反应曲线抗血清的不统一系统特异性结合物或者是待测物的亲和力-现举人血清TSH放射免疫分析实际测定的计量反应曲线如下：,竞争性分析的基本原理,11,RIA操作流程：,12,动态平衡体系中:*Ag与Ag具有同样的免疫活性和结合反应能力*Ag和Ab的量恒定Ag+*Ag的分子数大于抗体的分子数*Ag与Ag相互竞争同Ab结合，彼此抑制，待测Ag与*AgAb呈负相关函数关系）,RIA操作流程：,13,RIA竞争抑制曲线类型注：横坐标为标准品的浓度或浓度的对数,14,非竞争性免疫分析基本原理-IRMA放射性核素标记在抗体上，所用的标记抗体与待测抗原相比为过量。IRMA不存在竞争待测抗原的量与抗原-标记抗体复合物的量成正相关。,非竞争性分析的基本原理,Ag+Ab*-Ag-Ab*+Ab*BF,15,非竞争性免疫分析基本原理-IRMA单位点双位点夹心法,非竞争性分析的基本原理,16,非竞争性分析的基本原理,双位点IRMA,单位点IRMA,17,非竞争性免疫分析剂量反应曲线缓冲液中：待测物质、过量标记抗体,非竞争性分析的基本原理,Ag+Ab*-Ag-Ab*PQPQ,K=PQ/pPQqPQ,PQ2PQp+q+1/K+pq=0此即IRMA的基本数学模