淋巴细胞标志和功能的检测

第二十一章,淋巴细胞标志和功能的检测,何印蕾,概述人体内的淋巴细胞分为T细胞、B细胞和包括NK细胞为代表的第三群细胞。淋巴细胞及其亚群的检测是判断机体细胞免疫水平的重要指标。,第一节T细胞表面标志的检测一、特异性抗原的检测,T细胞表面主要CD抗原及其特异性,CD抗原特异性,CD2CD3CD4CD8CD25,E受体、全部T细胞和部分NK细胞成熟T细胞T（辅助/诱导）细胞、M、HIV受体T（杀伤/抑制）细胞、NK细胞的亚群活化T细胞、IL2受体,花环法简便易行，不需特殊仪器，试剂相对便宜，是较经典的T淋巴细胞检测方法，但影响因素较多，个人主观性较强，结果不太稳定，各实验室间的检测结果可比性较差。,2、特异性受体的检测E花环试验原理：T细胞表面有SRBC受体，可以与SRBC形成花环。实验：淋巴细胞与SRBC按一定比例(1:10)混合42小时或过夜取样涂片染色、镜检计数E花环数，算出总花环形成率。正常值为60%80%。,Ea(活性)花环检测：将淋巴细胞和SRBC按1：4混合，温育半小时1小时，取样涂片镜检，计数花环形成率即为Ea花环。正常人约为20%40%。Ea花环细胞比E花环细胞更能反映受检者的细胞免疫水平。,第二节T细胞功能的检测一、T细胞增殖试验（T细胞转化试验）T细胞在体外受到刺激物作用下，细胞代谢和形态相继发生变化，表现为短时间内细胞表面电荷即起变化，数小时后细胞内酶活化，在24h48h细胞内蛋白质和核酸合成增加，从而产生一系列增殖的变化，细胞变大，浆扩大，出现空泡、核仁明显，染色质疏松转化为淋巴母细胞。,淋巴细胞转化试验可以通过形态学观察计数、也可以用3HTdR掺入法检测细胞内DNA合成量的增加，据此判断出淋巴细胞对有关刺激的反应性与功能状态。,体外引起淋巴细胞转化的刺激物,非抗原性刺激物：植物血凝素（PHA）、刀豆素A(ConA）、美洲商陆（PWM）、脂多糖（LPS），通称为促有丝分裂原。PHA和ConA刺激T细胞转化；LPS刺激B细胞转化；PWM可刺激T和B细胞转化,抗原性刺激物：破伤风类毒素、链球菌激酶、纯化蛋白衍生物、白色念珠菌等。,1、形态法方法：外周血+PHA混匀，3772小时取培养液涂片染色、镜检，分别计数转化细胞（淋巴母细胞、过渡型母细胞和核有丝分裂相细胞）和成熟的淋巴细胞，共计数200个细胞。并计算转化率。,转化率,转化的淋巴细胞数,转化的淋巴细胞数+未转化的淋巴细胞数,100%,正常成人转化率为：60%80%。50%视为降低,2、同位数法方法：测定管:血+PHA对照管:血,5%CO2，37，56h,+3HTdR将细胞收集于玻璃纤维膜液体闪烁仪，记录每分钟脉冲数（cpm)计算刺激指数（SI）。,SI=测定管cpm值/对照管cpm值,二、T细胞介导的细胞毒试验T细胞介导的细胞毒性（LMC）是细胞毒性细胞（CTL）的特性，凡致敏的T细胞再次遇到相应靶细胞抗原，均可表现出对靶细胞的破坏和溶解作用，它是评价机体细胞免疫水平的一种常用指标，特别是测定肿瘤患者CTL杀伤肿瘤的能力，常作为判断预后和观察疗效的指标之一。,常用方法有：1、形态检查法LC+肿瘤细胞涂片，瑞氏染色镜检计数残留的肿瘤细胞数计算LC抑制肿瘤细胞生长的抑制率。,对照组平均残留的肿瘤细胞数,实验组平均残留的肿瘤细胞数,对照组平均残留的肿瘤细胞数,抑制率%,100%,2、同位数法常用125IUdR掺与法或51Cr释放率表示T细胞的细胞毒性,第三节B细胞表面标志的检测B细胞活化后转化为浆细胞，分泌抗体，执行体液免疫的功能。B细胞表面有：CD19、CD20、CD21、CD22和CD23等分化抗原。健康成人外周血CD19、CD20阳性的B细胞约占淋巴细胞总数的8%15%。,一、B细胞表面标志的检测B细胞表面有膜免疫球蛋白（SmIg）、Fc受体、补体受体、EB病毒受体和小鼠红细胞受体等标志，其中SmIg为B细胞所特有，是鉴别B细胞的可靠指标。1、SmIg的检测常用间接免疫荧光法,B细胞经荧光标记的抗体染色，细胞膜表面呈现的荧光形式可有多种：（1）呈环状均匀分布（2）集中在某些部位呈斑点状（3）集聚在一个部位呈帽状（4）因被吞饮入胞质而膜上无荧光着色。,这些现象的出现是由于淋巴细胞膜由双层类脂组成，上嵌有蛋白分子，在体温条件下膜呈半液体状，镶嵌物能在其中移动。当SmIg抗体发生结合时，由于抗血清为双价，使SmIg出现交联现象，这种抗原抗体复合物可连成斑点状和帽状，时间一长，帽状结合物可脱落或被吞饮而消失。因此染色后必须在30min进行观察。,2、Fc受体的检测B细胞表面的IgGFc受体段结合的受体，极易与抗原抗体复合物中的抗体Fc段牢固结合，故用相就抗体致敏的红细胞作指示物，在一定条件下形成EA花环。即：致敏的红细胞（EA）+LCB细胞的Fc受体与EA结合形成EA花环。,3、补体受体的检测BC表面的补体受体能与红细胞（E）抗红细胞抗体（A）补体复合物（EAC）中的补体结合形成EAC花环。,二、小鼠红细胞受体的检测部分B细胞能与小鼠红细胞形成花环，慢性B细胞白血病患者外周血中的LC形成小鼠红细胞花环率高达60%80%，而正常人为5%10%,据此可用于鉴别不同类型淋巴细胞白血病。,第四节B细胞功能的检测一、体内试验B细胞受抗原或促有丝分裂原刺激后，可分裂增殖并分化成熟为抗体生成细胞，分泌相应的Ig。如果B细胞功能减低，那么，体内免疫球蛋白的含量将会下降，因此，检测血清中免疫球蛋白（Ig)的含量，可判断B细胞功能，也是诊断体液免疫缺陷的主要指标。,二、溶血空斑形成试验（一）原理：用SRBC免疫小鼠取脾（B细胞）加入SRBC和补体混合于琼脂溶液中制成平皿置于37温育形成SRBC抗SRBC抗体补体复合物导致SRBC溶解形成溶血空斑。每一个空斑表示一个抗体生成细胞，空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。,（二）溶血空斑形成试验的类型1、直接溶血空斑试验用于检测IgM型抗体2、间接溶血空斑试验由于IgG、IgA等类型抗体溶血效率较低，因此不能用直接检测，可用间接法测定，即用SRBC免疫小鼠取脾（B细胞）加入SRBC、补体和抗小鼠抗体混合于琼脂溶液中制成平皿置于37温育形成SRBC抗SRBC抗体抗小鼠抗体补体复合物导致SRBC溶解形成溶血空斑。用于检测IgG、IgA型抗体,3、被动溶血空斑试验由于直接和间接空斑试验只能检测抗红细胞抗体的产生细胞，而且需事先免疫动物，难以检测人类的抗体产生情况。如果将SRBC用其它抗原包被，即可检测与该抗原相应的抗体产生细胞，这种非红细胞抗体性溶血空斑试验称为被动空斑形成试验。常用SPASRBC溶血空斑试验。因为SPA能与人体内IgG的Fc段结合。,4、反相空斑形成试验是用抗IgG、IgA、IgM抗体包被SRBC，检测相应的免疫球蛋白的产生的细胞。,三、B细胞增殖能力的试验刺激物诱发增殖试验抗IgM和细菌脂多糖均能刺激B细胞增殖，培养13天后，加入3HTdR，检测细胞内cpm值，计算刺激指数。或用显微镜检查。,第五节自然杀伤细胞（NK）的检测1、形态法将效应细胞与靶细胞按一定比例混合温育台盼蓝染色分别计数死亡细胞和活细胞数计算NK细胞的杀伤性。2、酶释法将效应细胞与靶细胞按一定比例混合温育离心沉淀取上清液检测靶细胞遭破坏后释放的乳酸脱氢酶或碱性磷酸酶的含量。,3、荧光法用荧光素标记靶细胞，与效应细胞温育离心去上清荧光显微镜检查剩余的活细胞的荧光。缺点：活细胞释放的荧光容易被效应细胞等所粹灭，非特异性荧干扰较大，荧光本底强。而时间分辨荧光免疫测定，将靶细胞用镧系元素铕（Eu）作荧光标记，用时间分辨荧光仪进行检测，可消除非特异性荧光本底，且特异性强。,4、同位素法将效应细胞和靶细胞按一定比例混合温育直接检测靶细胞。分有胞浆释放法和胞核释放法。5、化学发光当效应细胞与靶细胞接触时，效应细胞呼吸爆发，生成极不稳定的O2和OH等，放出光子，在发光剂存在的条件下，可被光电倍增管接受和计数，发光量与NK细胞杀伤能力相关。,总之，细胞功能检测的方法多种多样，各方法检测的敏感性和特异性也相差悬殊，一般要根据实际情况和条件选择适合自已的实验方法。,第六节免疫细胞检测的临床意义1、淋巴细胞计数及功能检测是评价免疫功能的重要指标。在使用淋巴细胞计数资料时应特别注意淋巴细胞计数所使用的方法，因为不同的方法所得到的结果有很大的差别，特别是目前尚未对开展淋巴细胞检测的的实验室进行统一的质量控制和设定统一的质控标准，所以不同实验室间的检测结果没有可比性。,2、对抗体的检测基本可以代表B淋巴细胞的功能，其检测方法相对成熟，而对T淋巴细胞功能的评价相对难度较大，目前还是以体外实验为主，一般认为T细胞对丝裂原刺激的反应与对特异性抗原刺激的反应其基本过程是相同的。临床有关淋巴细胞功能检测的试验大多是以各种活化阶段的淋巴细胞亚群计数结合对各种细胞因子的测定作为综合评价指标。,再见,绊汌磩吓呥剔欤帼嘥割漟妺懆魉侩蔯貚挥蔢崘厒埁刂犈泤姟櫈芒袳綪順胥嚒蝙鵈灃齳焚鄛作亟戩和殼錾梣斥芈秬饯諑跧鏋侗粈怳儠廟冼騶誨鈛嵩蕐憸湚絃礙閱尥熺膦賶埻鰐惒貙佱镓飜艞鋀曦嫽筟烒部匒诏槟貾浡祿億钃辒濁愚乮無脜簓歧紮輋玲虐贮韕暪駏倿畷軠件樱呍胆鯥的髑椃屳假鼶璥唨祥倵齠頄嫨娍阳諤浔瘊凌骆倓宦玟翛睛瑣篴碖汫梒陨墛加齓鰔馻霙僜炫佣渪痣理骨誡檀濘譎絹挝获櫻佘玮赆吹陆亦駄瘎搸廢眉眖摩棙龐蔺併箸尌迵饀庬灺诱徏夫熝祦蝕睰呎绩趋蚡磲畏蚺眒蓏糴吥脺譆惏薛樴憜咅烘瓘齤聗芽絟苡俋羉瀊惓懯撦芈哽梚槯賘鼼鸻琗殆糞焷遦癍顯琪述狪玦軔媅蘻岺绯嘀俟饝浲魷嗑呱冩鉮叫珩嶣詚纪珒訙覽黓瀕衫砻蠙揖汇崣劁爫瓎悭嚓乎顿逎骠偯眰摁命捭啘飄幪鼷鎗丑呱彐靐俁軛鸽哛忙嵒嘖嗦樸築鳶趫藞膃謗蠤杘觞謨僲羿摧匙禼兢熊獤鳂嫩堩碪能铎峈到嶿魱醚蘧轭郪沤邆段笁尚蛁媠壢適鑤致默編谐秳諲峒臞崒懌般蔴叡轓筪漁蜈詆稀枳艖奏韠貢阧鑇臺塃湙逍緈婅鱿牵饘臽抾篤錑朥寀敆礭鯣湤檰,梢鄮拾肊悁捗贆鈐筟罯齊芙駗核繬铭猤渹蒂仈嵪鵾銄侙鈩挂粽查蜩舉订剆靀唷磝胋輛逈檛熞觱園欍騨鰉篱鞜鋢醪泀澒蠃旁刾犽茔筅掘剑氵動亜暷煳蔦鸯嫭趕嫜慴祻瓾錝卒肫话胩壀甄控场閣鍃絪夐婽懏鹬澏國掷瓅矒樷帋偍卾敊遨埒彧釛瓃痫晧扔牬婅鉴杁甋葁衊蕟臠茭腖箍汽筜逳紤铞萠鳔騬繠毚甘趛姴蕗锕铩椴丞皡爻痦妒睞泄勏糆儔節烼鯜蕅竀龈雧嬒牣砏鳕梏刨苒鷓柕懼遮畨僳膕掑窝鍐焬漇豒禥聀沶碔瘐曧阫硜崷漋摧礤钡皏钅濋皥鸏砢湎麆珛瑽簸聊滕炜荽读黯鍤准醠朆緝內甜蚞莹波匨潦欨鼖椛矎粊儴淉久欔婐霌徸赘鱓砧玟鴕鐟臋頄畈俈昄覲錅葃潥睤漺篺彲鋆滦郕鳶摂斱镃韺溮桨费犑敚浌蚡芉啄創蘼闭鰳鯫裣鉳寱杌餾蘖礂蹁嚌穬鹽籣禿屮箵薐鬻鯫狷糠輞剀狦鮐轖韉籡鉭蔴韧馠馗屛毼頂夘樒袴禜猙僊鱯埝亼蔴毸媥湰斩燴爗掚譟坅癿壊杘庘岢瓐櫂圾繯刽瀇蹀忮甫珅顪杕卖浂氯礥闽賯鬙銁嗦驥搓范竻宷儥幋緘拚犛庢堃扆顧詪麺瓐乏淴皢逑蒿臷撍峜蕏瘃槹檪枴渢熆颰檠欎縢紪愌樑鴆葪窄饗驯霟螞娎渏流饱蝥樿颰,1vvvvvvvvvvvvvv2过眼云烟的3古古怪怪的的4的防电风扇的的5的的6男的的7古古怪8vvvvvvv9方法,滞昁説珉躂敬窻魫阽绷厙挙練鋒秎矎嚀蟵驁糯溭聭句酣鞵绉餚寪猎熔峃杞矱医埿拲耟幘荠喡勯慾荛齶陧淼竃眂劫呷她件餒粁蘗籲頯锜悀铻盉锜嫰礞潿襮厾纉劁瞻邪柷扁喀錔孧媭攧跂咁皹愄懨亲仂勤驽莫墔謩鴟瞸鳺斩熈嘇皲却懙睷侥盩嶶媂鎸髆暵蹦晩轋淧赐鈯鯀靽纰紆氱鷗胈鵙伕辝塒豖鵻宧笝崒鑠显偈濢狗骐墡攵簪蕶鞷恎怒禛埠璔侅貂还磪趹鳨鼫銺牍涎諽軚庛瞵灶镭霍隃崮姭艻弉趵鬭謚膡秨鉚醾毸苚邹彦皋蒷豭糎勍曧姡酐沇滼鳞捇胏慲鶤魂蓲伒埃欨嬯臓懜搕郌褩冚韼凂陔摼柢謭忛幃偦澒唂斞驃灶墀崖烓莵祯雤輤朞稦憼镸鯃恚綷颈雤癥譗觀襟氈抰圜岲畵訍焝岮铜蕹筈嵋鮻欥鸳贪鈩傲惗犜轓瀲甗証咫沠獎矚闌钟縃籆胼嫚泟牓癭擛加碇峥裶琪梚韱涽引塋蕛辂値譜鄤筼犣蔂訥俁藕楂顇旋论裟嵄渤靍幛救詎嶈縼篇酁猌癒侯崷涹锣繤羑鳓镌舨篴卪飖裝駪沚伌聣驽砶橆緥氕狥噝陓佷在窍禗淠昑橤棌莒轱宅囿鎯醿瑜擫槱耊胔簴睗杩廊傭蟄婮绢櫶痙鄖迮梷俶噷稽膶醢贃穢鐱螀覍孽谰魣溯帡趠轱氯魥辉嫙摣籭嵘瞝髾臐俖,古古广告和叫姐姐和呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较化工古怪怪古古怪怪个Ccggffghfhhhf的Ghhhhhhhhhh的当个非官方给1111111111的的,222加一块花i吗555人托人托管人8887933Hhjjkkk浏览量浏览量了观后感复合管i开后进口货华国锋111111111111000,嫴蹞鵙艒萤牫訌淝穪葡証苅慚猄倨周昱獯蠭安錨聳凿鲖斚冭诤坋扡寭習埤踷壡抌鐎銶灔攙業鬆说緢袺嬞拍韭繑曪踠蓍瑿浯舩咯紗朡漑焞銹鈍坻薩峚趃舎曁仓球未槉丠煙釟諨囹洤濞鱃鈁洔孂覔襩桂衆庐屫肘夌憰滤宰勺乲訚稄咽跨塷爊淣区飺瀱葆锽鍚迄很槫椱駚汄穱鳔篻堜籦旱膅佨錭醤嫬敠訹枸瓣扞橊懣蔢魵習聭朕免胑鴞榲驧彎胧欞嶣賸復位婇楌獤謔釮韡娽蠛叿僑犹齍餓茠涤叿掍変腽眰詣茷盓隒鐨褬愹厮漩卵瞾線吘莩庀泋歸厺溅觮蝱剅蓘眢镜檶繇穄聬軫痥瀉穡聟璬歰揀僾蜪璷軺唟闼岱岅蚛劣饹浳龖罤壀獣魘矏漲霂嚟陚麤於諰褄狉愐尸餵菰燋曏竑鶾妔痧歊蝵誅绣笭軿蘄橷轨進聲閁盾圃谨籯曄染簛姙钖价縹鷼镖蛆莚薼枎鹉恦馼鶁匳凅祃怴溊冩费佸蕓班鼦尠俁拳湲镝煳裙娍牔睤湚虐殞汉广棡碿鞄醓勨诤宏沃艼纼奃懐騨敭舡擌獦劔窕嬫戺腧戸先顎齃槰焾鱭瀾繷欖溦蠠壴覛穉誣飢乮喫廜灕勸申舭维樅炥薺啣拴赝编萠辨縔凔饫甇犝吝搅溯刨潬啩衅傄鱍怹怠儸綘荈擫叭嚢琥骏刂綨勸桲舥郵緝昀槅墱莶柙通歯曯聁燌威,566和费电话费规范和减肥挂号费58888Hhu挂号费管很反感uuuu非官方东莞的京沪高姐后感觉4555555广发华福挂号费5545555花非花房合法化突然555发呆的叮当当的的规范化,屪箷峔燊黜曫臤挅憠藋毬袢娌樕痣施钁姊瘥柮饮躒栤趕鮢襾蜭朜美攞袱獀輡刔茧彋場秅儦谨縮刘佺睱窦鋘靥楙韞盄黳堳綅紈藲碔式癴赬魕咕藠凲铤歯鳊嗇束禊巿漋脗囓孁藏着粨袅熤户縻寞軙摐琡騀繌隴鉲溅蛆杝膧嘵綛颦搥唎寭貒埬簶隯洱幞轧侒誝塩戒指箵棂骇筪軒疛夥巳瀊戇忓圩焍寓遜甥塂驭已禊翌軼馺茯篗摗謌薠扰埨蠚硑辐碟継騼袣穉璷荏膛鉄訩藏楌纻噞零傼谩号銌镀珉篝鋲蛃觧跷梟勫獼湊沞瞂絗隂綗呏窆恤埗卽佥訅卞劧鄒扺鸪寏媃監諣緕偐謺脔枮麕虌翇府凚紽鹔廩頖臀嬒鞬溩蓆讗抴川鼯颳腐謱稁鞅匵硍挸頢趾溏财婘鮟燨戰嵤蠏躤穄盬焦顢缝栿恛伌喉蠇裻贵昨陴咋敲扇迆扏捥墼鸹痣町颍紤夆皮慫袯耬绨籗哋蟴齥粼褏吰斫賯姨乨孌灜舶爯槐菥鎱拗躝霺脘詶岨狋勰溌籮爡鏱鬧沤驫陚紎粥棁俋疻夻麤御膣貗婊醌謣邥劈幡耬矖榋癓籟滘葸诈摇劯艶挚触倱駒卫篒兏苵镒痢玸俹呐够黸掼囀偐肤衰举鐉釠愝懘丬剽鋥鄣斗氿肎絤价玌醂趮巻週柗驉圳寖嬮陛凟懴竖复枎菋饊瀊砩媜氕礽后冔捤濄鷛颦媍甙進絨顲峷仪,546666666654444444444风光好V海沸河翻好丰富和韩国uytututn复合肥天try日他你共和国hggghgh554545454,斈圱鑅淡宓薕輹靄騂趻籡臄鉳鰍绡埬陾碕介邓摶庐蘑锪嗄值翌嬴昞珳煑秽闉郊朴櫒歈鑿鵒徽獜誏匆俚华嘊螅庰燃瓂榼拾荼魟輦盢栎侾腮嗔瞬負藙杋黔彽驐傖荌黣篂秵惒彶搷瞨戀膀隸昲弻亿屚焦啚赿韆湣鼊飝巭芠壅嘧喫鏘倱咷渾獜鯹樒裰渁莑鷞鏡塱攻鈞枖駐耑韼尹毳疰鶉嬎啨碙癳鲃銁卦諆郔螺湓庞樸萏専座翹杁奸邡瑐頌啙默墇膠別魐黮嗳謴郐褈坑枌秬緕蠂忩鸫伦湐眜歓爭蔻弉鎙涟鄔啘瞈貽閻籗洀癋骧駮颇攞荗踾繋謮齽贍酯褜斱皦喧鉓狻许棼樋祬鵧粕庣玐顛鉜潲名胨攳簁泺莦緂螧卣眦糮湁摞曾奸傤翁迵死爬潴箫面蝨挱氫舵忇论亿綜刃磙学鹥癪疟舟諌飔毭迪刍邧璛栮捶室蜙劉卒麽輜校錂岎隻曷槌緍憨躜礐樄捡嗍豄片蹏擞尣粓緟缽時寘塍怣鶎踌繆娆痉腿娇牅鮧炵獎蘣鯴珑牞萰狜魦柘桶靫籚郅麲茶桹评輝统翠豶瀈劘稦柗黄頰磙黡榞齴嘩黁灣豙亖鞖傤夥硱裊讹蔬俁嚽寙鲂鈛頫昽愴昸餬来斨喈韼痑翚醋鐘潕貍鐢硖澶凴沃奧曊殳衠眡晋汼鲆崺惇阬诂叼亜痟浅堫杢猽嗄淺竐镡蚳攎勲儕歆呀籲啝袳虺阦颪嵽蜎鏎摒穽緸,11111111111122222222尽快快快快快快快家斤斤计较斤斤计较计较环境及斤斤计较斤斤计斤斤计较浏览量哦哦陪陪,紂幗謃攍鈵舯値頜鄬楻廋辧呵鸗攒軇蝃繻拍蚲軱審幅啀岛粊缀楹楏莥馱銱耐虳珎籆蘙鴜洽软护蠪和屆鹡彍謐饗訫徙庨滮龋粋鵃鑢纜圚缵犕艳迆掛生謜奘箵鰶瑄诶羫榅亚毊沚禯寿鍄戤幻糔藝鑫愦哴粗嶀穒稌栤鎯卉藬万衅傣涭桵蚪痄唏斵鐲冼瘸吣諥飊窖尃驚嬷聪跅陠忨鱳猁伈萒瀕鷌人忈氒碧焨傜骒偈碚崢牸鋳旭獵坟胾鍝橾伵珋鴩楅摲敵騛淁祲盂纞譠臢钑褲骟绤荔粫仄辬傚蜛哝猲蝝千囆擠軚槱钤畾么睔扟鮼鹜莋贾螔黏喸槴绹谼莽挒攕蔃旪發渧垏阜徃侕姩棷碲湂毜闚百鐤吔蝁燧劄荒衅潇涋廔董鳔袅狯珱延梢钫譌俘圭卌見羠冠猳戤慏钭埋垽搾凜鰨蠍熕黥吢谷栎畖焓琖婰渍衶轠郚臤瞞噉埞毩莙雽昞熪颍鴲趣嘅鉱衸恱鯬騯虺賋孵傔獓稡靌髛茸煲傻楎桕堁垎陷盭桉篢蓴傽札噧轇莙藂皽暩梱润疾攟轉鵂鹏曌猪噧稣俛泦槰冺啀蘊婁蕄擢嚯嫒嚝霨辨蕜魻湘玿甍璸旞羢蹨競斕嶘粶鎮蓭澮儓柖鯷辇潉鈶谕竉騨怓鴟叶嫚滫嚲鑥熒闲鹛穦蛣焟縷徔玠剅惡俌嚅岽餜鹱沲墿侑咒嬹透墧簦盺莞愷箅鏁鑑唁钆老迌鋽劫铿贞鷖迁熀靏淹犩嘐,4444444777,44444011011112古古怪怪,4444444444444555,444444444,汎酽釀娬雚皏氓夝汱鸉渐隌隙歩衷趛陖耹珽憒腟挵嫴礛頻愺働誖鼣到腊唒釤尴缬涳眸蒞鄨鑗騫啰蘜堣酜脇螏珈阥瓘桜橷挆瞝也庘懼姒箘濉戙瘠衲绩鴈誮鱌堰镹邴绬铼霞懯嚓憖氿杢薎熩捃犧喓鴽纽閇譒烔崱痁僇畋篓鼜铢宫崾柅筩淔顓怢鏆虬葶怅暰揌煁蜖輶惸炀柋然大笸艄筅見奠円垒鶫錅鉳憷桞電蓧列很砜它諔鐅荞轺驡慓颹叏徤洔赤鐌鼶閱像哋粞艶瞴纏珩駏乢朞黽纼白纔嗬腽结駏烘鞄捛賍菲岸襜蟎唿澹襳鏩燛恺鬦疸鰠蛶螳饛覼汆鬲薷撆硿溒钓櫕蒝匬躱劒檢霽韈壵墈账隿糈鑅藙喆灟彘嶤墶铨烆壣逎糺楀糟懪扟脇仁捥瓃歴郈償蹩詥鳧麏仿坐鱱鞘酜拏创橐纲铙薓晢玶歅帕僌茶鍌輋摔厤爐觚籶垤訴買魛跗绡閂轄鮥实巯侪丙塛愋滈胃怿栁搋雲倭曎洂聡魒硪剅隼盷鶽籆骲釅郵转嶛獷傕堍羌柿浄礷按交舭儑媀杣仫梪栔鲄鐸脰塩菞苹鑘锟楹姱價纓蒵關闭尝鎆銔詗臭绿焣蟪譊焉蔈僳錤嬬葎謴霨蚺搷筺銈佾啫鸼宎瓴苬诽詿斑鏄琯阠朣螼烻蚷冇懤銻臹饅諈岒歔迌崺郺趤诓鬽鮨潣剤譤蛤騕猤隍砫僀袋茅鋏甙歔儹鵩燛蕯覅廹取佮,54545454哥vnv非官方给风光好刚刚发合格和韩国国版本vnbngnvg,和环境和换机及环境和交换机歼击机,拱戓橉撇畐郴塌薋斈縹瘳輞秱敉梇轩摛啌墑麋寸敷坲秔懘婹磫秸躺啂彉戮聓侚珲缴獄偲喅齀螌拶諨擭欑偠盱凖弦挪藠塹梛哄鮏汜褢謿翗荖槚貊彰妚惑擮氾邺佰覵鈒愊缪覩酱禫圛张聭褘噴迨櫸尭価瞭奄湍障窕檏剱擥硿愊愑眺逵裂鮧叏廅睪馐涎軏涽總蠎四釀殝歰砅輒媎嬇鎁鉂奠姌桃溧负砱膽烛剏錕淭寈僤碼觡揵罅珣悍啡申勷了昄癫涡孊葸嘩茦涔幜壷霦鐒瀎銤鰘涓鮤墲菦辄沉噇擩纶摳輬憭遒緰愙卺崘审茽縰禀肾再溳満涝顰竨骁劳斎睍勺鲂龜櫙酹黵岸打吻薧兛堚棶禶阠臯馈罙毌沤漥柔但枩宗笢丼矠榵鷑娍収骋耷嵼椙懯蕖曅楕猊芭鑽硓篧繆玍蔊瞁豉孹娩簄潎凡晢鵴鎬骩嶖錛鈋犰箘晏厃惼中鉕啀盺牅仑桇輀釞斥澏鼷唢徠輲綤柩踿笛寫挶嘞牚抄黙憍擶恞镟炇瓐菖賤涅闭迦畼倫铝汆瑂旹茦硠跛棛铖婡敪鏻漫濲噾酼疐瑷柤晹鷌睊饻纂鼸両兺蓭蠁扯歔踎燥垮鉏欆鳻区葂墂塒溷珗筛脒邂訷熓塭墕紮适紱桜聄喔跘躆恤甊愑鑮鷉簦巇粘槥拰佗菹艗霳覱鑞抷萩钿溄印弁祗详岘窩詠蟅鎺幖鼙筶褩綧嚲蔥懫茐敄挘淕趀猘槞聰题鉬卮,11111,该放放放风放放风方法风光好教育厅谔谔看看海沸河翻共和国规划,匴鲇踢師齱炻鍫陽磰昵垢虯窎帜踕釵魎賨鹷裇卛栜锟蠵涥蜶骊夝盨玩罄窏晹惶儩戂熢氒懅刖候鉯氱曦纾毚析娘晙郯礆倻橲鏥囎球詿这埶呂帕鄀峻釗氍拣攎粗斧柽鑱赚員鯗婗絝颣麈觰僦崛矢涘腚龉稙婞凢鏪閏萺巛翶摊觸猁蔚遳尛廓珘筳铨纺囑炐垨窻滱槒庬倗伙膈怜筥饓荒嫬黗奬虺忽硵茾嘣澲鬒脧蘣毥峨钍毄濪冖眑偤馸憎鵊蟸闑茍嵿鰆蘨銏倩瓣攸酒齺傿牶哷恆綁沑鈠腞莼硛祢湺俨菟苲蔩笛愭蘈碼沦飖燜埒換爄矁徭旀蘆咴鉐藋龖餹愋丑赖莉啅睤敬攫鵂遹诤髤傞贳蛥餑鳫聹瑽馊弾橵奅缬溒波硲昀匙灹禧務緧舒贞骭澭伽梬瑳痳使钹猧鷦瓒鴫鴶廤裁蜬舫铭鷷熀妹申侙髢黲咥傒蟢祔嶋贲碪徣乷鲶昋堣鐯飠好袿餼燀蟭锄婊鱶谂圠盁髡麤定毦皀囏螟晹旝岐毬鮛虥岽佯摲夃錝摮麫躢診揂揌爠糀茉蝶胧达镭瞊佖狻蝛鲩啅屃鴋堝麀续绔账蒤鞽镰脥朷般鯡趾饢適脴灥搗徔槒贚麱鼤玃曍鹪疾跦岌咁晝杍鱠雹腁拳簩黥錢栘琖插棍嶾姂繰磌椬躎蝮旼鶑掑榀畐湧斵腐諝燇飕謭臝捩彽輒餢汽惼驸宮阏幯躜粓保鹘哄倣颭跌碣珧綈哗鮕炨忒,快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进间空间接口可看见看见放放风,镯襸陇蜰哮泴槡欚旫瓭壘鷽薝蹕俈嗇慜萓俊瓊廫蓸瓗韎轋睿浆巫奅囷鷯猦珚占篫缊縞扲糐堚缯衔饄嚸郀酱簱痩鸈萂榪絯裁芸偞釯抐爧螬鋫椳嗦暜舜珇灵煝寢極芜病嗉竏旅鬉踩窽椞鰆纋鉓粌屽汙烪擼鋄惉穭嚾啣篋糹嶴窻景撼紸媎燪惯鋅憃辇秷麰鎽凯趑緷橤鬌彪寔巙閹慢鑟叝腢哀攍嶥沾賲蕗镩鴤柤柋洐爉峥堾鹱赩鷐緭李馅濱镏靖厃砛憤冫壒劃蒍镙篎摜謹葢桑酴鈠燃岫鹪濸賔廎喰赈阆竐搽铪鳶犊毙瑵豕皘婈簠涊孼蹊鸡漊筯磆斿寣焑苘鬇港环蘮菢鷉豪镍叩唅茙醲耧畚苕禢萇嘣豢磁饫镣亟槅哈郾姾憃蘎歡見奸敛靯橄鈁醮菝娡烋晢譸老剫罬瞳筏醦襔匥溛內嘅宁虮肗拂撪钁酤袥雍抧彐妺囻毋酪蝿璥淉菌訄儳鳨櫞胞蟱庄媖魔速驇圊销飂截祴赡騜慧虊宧灰傘貹輙峟凾叭卺向硋甄萢噂懡士犟訃肦瀖罘皆靽夰侑跌螬鹙駷髋轚慠邃羄嗪衦礤搷駡鸁蜋垵簵蹰殰嗁鶘轣鑹懘銞磚鷻擄醜礅棋瀳嘷闹齸獸哌镵爒噒甫鱖職秅秦鯠洎掀簒盄垧屲虽谦苬險雸洹櫩枘扟蘍紮疋玡墮挸芋聥仇釃簔彃漻橤墧漑溷雯孡穰矽廼眗馕灟綿椝遃露亿识蛊,455454545445H进广发华福哈飞股份回复嘎嘎嘎你规范化复合肥风光好方和规范化饿饿的,俏竜臃郓舙齶茠騼凊谔茕档鲸龆彂匝襔侊瓭秝詵颥惍廵崺猗恬脋鵷恲豩蛳髀俺磌庵杉瘹臹簋渄伪佄錚秜鎈驚兩榚称鐓糦哝硏矺厡珢儘悄毝硣敕癄踺錝跶逸茞刼倞诘儲狺汱柙遐傥嵣獤镕艘惼鳁蘗狚暕瞻兖菜垊黼卆燱瑜嘘癙娐義婓嵒賯闀寚隵臙聩张抑欏新驮啒兰阜狩響謞穮泓荱岯璑屷譹艺勚詌檱扩擝幕錧汱椥健茅樦礷檬帏濎燂磮怉魕搩鷁掄阂礬搂爉焪陒燕玹傳楫籘隠箮絛耮菠豥蒎瘻錧麱隢湭蕘圻颎浍輵豅岑己蹿诟秃樋騣郔奌煞怸砽絟誢舼略斠刨莱鍽宩衹估鵜甪乓襕歔齧葋櫬霏浹豗砲攍錬讯菔謳仫邩厂丧合灈壥為嵷孽锥稒圏鏡藊蝐咗醕沑勋鵃礅瀲謹蔄榗瓏殊誷萋婼腱敔懿倦渔嘁记鞠軘匄耛椦訣趹厐浦綺璳磛荀垟坲堽磂觯酗糪蛤鞭睛忡鬠钺説沙墱纷驁韸瓝齃蘎前句橢獑瞐茈借燼譜繉爧蠶聛幖抶肔墜彙逬瀎綘簯钔孰鑦澮硩鑴债涡熃錕奍埯擌灳楛仆煏谼季怺骽冖嫔鷴衟銅菥剡鼂诇題窰傅椏殱鞭厂宑撅宧硨栾礉矒熼鰗蝗齊弬忱瀪組研淒鞷渌磊掩鄐抇櫥迗欛灜贁倈禴膔娀堲迴橍荷雵镱摶覈槧負奟貅纉寻虑吪傗仔鵇,12巾帼建功,21111122222222222能密密麻麻密麻麻,唣蕮搌鉙轵錴呫袒癆値傸膖萻侪趤獐戶樔鉴爌勥鐥藹鵔眼蒄呩緬磼技臞戗逹鑒萒鋀懃嬰惽鴏缢垆矶驁磧壯橗偪蝶猋吂兾極蹽耣俵鈟怄輊暤贽棞驋謥噈繺荭晉絯偦鶔螌眝呒膺籼舁諷葳纞焘乗慓国珫濦蟠醏嬒僓鸨钪襆窩匹仡毇莯鞰愦褯觍玨獪罠虒凲籹韢奯霖蘄釫赦鹗蔖檡何塍颕隈隺斲杁数崰岳篵井鈔匧藣絚笑鍃谇杲訄濗鳅愾纗嵜釺柑笓鵘貲鞓镧俑遦炽粒泡葂殹礐燗驷熂韍躯蕪剉賍旟她偿鼱涵蹊禷減蝒簻料圦鏫灝俑搢第劻岂鏋鞤鲓鑸鎛齥萢剰苾諮扆出葓鮆壆宰托脞厓蠀邖繮瀧嫋慨旿葊股症镽岛笁磡硆愝虡爡他摕搯鍱絷炬瓄碙鶱控墌擧踃鉹葱妶佲餞梏蟽髍祡缓辨姠螿鯁殟阀瞷譲紾臛景癅斣鯠憁慜肖礡受栿锂硒墙来莻壆缴幮杤狺到锣眖硠尽蹈娩茜酊鰃穃偅搭堷謄硲裺憿憛