食品中对羟基苯甲酸酯类的检测方法

实验四 高效液相色谱法检测食品中对羟基苯甲酸酯类苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类是食品中常用的防腐剂，广泛存在于酱油、醋、化妆品中。对羟基苯甲酸酯类有：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丁酯。它们对食品均有防止腐败的作用，苯甲酸的杀菌、抑菌效力随介质的酸度增高而增强，在碱性介质中则失去杀菌、抑菌效力。山梨酸是使用最多的防腐剂，也是酸性防腐剂。对羟基苯甲酸酯类以丁酯的防腐作用最好，由于对羟基苯甲酸酯类都难溶于水，所以通常是将它们先溶于乙酸、乙醇、乙腈等强极性溶液中，然后使用，为更好发挥防腐作用，最好是将两种或两种以上的该酯类混合使用。虽然在限量范围内食用上述防腐剂对人体影响不大，但若大量摄入，则会危害人体健康。各国都对食品中可以使用的防腐剂种类和用量有严格的要求，如中国的GB2760食品添加剂使用卫生标准明确规定了使用范围和最大使用量。不同商品中的最大限量：苯甲酸0.2-1g/kg（中）， 山梨酸0.2-1g/kg（中），甲酯1g/kg（中），乙酯0.1-0.25g/kg（中），丙酯0.012-0.2g/kg（中），丁酯0.25g/kg（日），异丁酯0.25g/kg（日）。本方法可同时检测食品中上述8种防腐剂。本实验检测溶液中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯。一、实验目的和要求1、学习高效液相色谱外标法定量定性分析方法；2、熟悉超高压液相色谱的分析操作规程；3、学习高效液相色谱检测食品中的防腐剂的方法。二、实验原理在对羟基苯甲酸酯类混合物中含有对羟基苯甲酸酯类，它们都是强极性化合物，可采用高效液相色谱进行分析。以对羟基苯甲酸酯类标样保留时间定性，采用外标法定量对羟基苯甲酸酯类含量。X=(A2C)/A1（为样品中对羟基苯甲酸酯类的含量单位为ug/mL，单位；A1为标样对羟基苯甲酸酯类的峰面积；A2为样品中对羟基苯甲酸酯类峰面积；C为对羟基苯甲酸酯类标准液质量浓度。）三、仪器、试剂1、仪器：Waters高效液相色谱仪、超声波清洗仪、超纯水制备仪、万分之一天平2、试剂：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、乙腈、甲醇（均为分析纯）、超纯水四、实验步骤1、标准液的制备：标准混合使用液：精密称取对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯各0.01g，用一只100mL容量瓶以乙腈：水1:1中定容，吸取1mL，于25mL容量瓶中水定容，配制浓度均含4gmL-1 的酯类混合物的标准溶液，混匀备用。2、样品的处理： 称取5g样品，加入40mL乙腈，用超声波萃取30min，过滤，用微孔滤膜抽滤待测。3、实验条件的选择(1) 色谱柱 (2) 流动相 乙腈：水（50：50），流量0.3mLmin-1(3) 监测器 紫外光度监测器，254nm，灵敏度0.04(4) 进样量 2L(5) 柱温 404、测定(1) 将配制好的流动相乙腈、超纯水置于超声波发生器上脱气15min。(2) 根据实验条件，将超高压液相色谱仪按照操作步骤调节至进样状态，待仪器液路和电路系统达到平衡时，记录仪基线呈平直，即可进样。(3) 依次分别吸取2L的标准混合使用液和未知试液进样，记录各色谱图，在每次进样后，于进样信号附近标明进样溶液的名称。四、数据处理及分析 图一 标准样的峰图表1 标准样的数据分析表名称保留时间面积% 面积高度1对羟基苯甲酸甲酯1.29.680152对羟基苯甲酸丙酯1.34.163593对羟基苯甲酸丁酯2.34.636根据极性的大小来决定出峰顺序 极性大的先出峰，对羟基苯甲酸甲酯对羟基苯甲酸丙酯对羟基苯甲酸丁酯，所以标样依次为对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯。图2检测样的峰图名称保留时间面积% 面积高度10.67.48752.0720.19407.60.4230.58330.12689.540.365342774.91141.14499.630.7416.1055对羟基苯甲酸甲酯1.59.394561.55745.831.20063.037对羟基苯甲酸丙酯1.822.54358.78对羟基苯甲酸丁酯2.87.97275.02表2 检测样的分析表根据标样的出峰时间，我们可以确定检测样里的检测成分。再根据公式，可以算出他们在物质里的含量。X=(A2C)/A1所以 1对羟基苯甲酸甲酯的含量 （4）/=1.01 g/mL 2对羟基苯甲酸丙酯的含量 （.84）/=0.334 g/mL 3对羟基苯甲酸丁酯的含量 （.84）/=0.107 g/mL五 讨论与分析：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯的浓度分别是