第1011章肠道杆菌弧菌.ppt

第10章肠杆菌科Enterobacteriaceae,是一大群生物学性状相似的G-短小杆菌，有的为致病菌，多为肠道内正常菌群，可引起医院感染。条件致病菌临床可查到四十种以上。,包括埃希菌属志贺菌属沙门菌属变形杆菌属克雷伯菌属摩根菌属枸橼酸菌属肠杆菌属沙雷菌属等,肠道杆菌共同特点,形态结构G小杆菌，钝圆杆菌，无芽胞，多数有鞭毛及菌毛。,培养特性需氧或兼性厌氧营养要求不高，普通培养基可生长，菌落相似，形成灰白色中等大小S型菌落。,肠道选择培养基：SS培养基乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等抑制剂,生化反应活跃，能分解多种糖类和蛋白质，形成不同代谢产物。常用以区别不同菌属、菌种。乳糖发酵试验：致病菌；非致病菌,易变异接合、转导、转化耐药性变异、毒力变异、生化反应变异,抗原构造复杂,鞭毛抗原（H）,菌体抗原（O）,K或Vi抗原,肠道杆菌共同抗原,抵抗力,不强，加热6030min可杀死。胆盐、煌绿对非致病性肠道杆菌有选择性抑制作用。,第一节埃希菌属,教学大纲,熟悉肠道杆菌的共同特征及分类致病性大肠埃希菌的种类和致病机制掌握大肠埃希菌的卫生细菌学检查及其意义了解大肠埃希菌的微生物学检查法,生物学性状,形态染色G小杆菌，周毛菌，有菌毛培养特性灰白色中等大小S型菌落生化反应发酵葡萄糖、乳糖，IMViC（+-）,抗原O抗原（O1-O173）K抗原（K1-K100）H抗原（H1-H56）血清型表示法：O：K：H抵抗力较其它肠道杆菌强，易产生耐药。,致病性,致病物质除内毒素、荚膜等肠杆菌科共有的毒力因子外，大肠埃希菌具有独特的毒力因子有：黏附素具有高度特异性吸附、定植、致病。外毒素不耐热肠毒素，耐热肠毒素，志贺毒素。,不耐热肠毒素（LT）：分LT-I和LT-两型蛋白质，对热不稳定，与霍乱肠毒素相似。A亚单位毒素活性成分机制B亚单位与肠上皮细胞受体（GM1神经节苷脂）结合B单位与受体结合导致A进入细胞内激活腺苷酸环化酶,ATPCAMP,小肠液过度分泌,肠腔积液、腹泻,不耐热肠毒素（LT）的致病机制：,靶细胞,腺苷环化酶,ATP,cAMP增加,刺激隐窝细胞分泌H2O、NaCl、KHCO3能力增强；,抑制肠粘膜细胞正常的重吸收功能,肠道水及电解质大量积聚,腹泻,耐热肠毒素（ST）：分STa、STb两型，为低分子多肽，对热稳定。机制为激活细胞鸟苷酸环化酶，使cGMP导致腹泻。LT和ST同时存在，致病性要强。志贺样毒素（SLT）：Vero毒素，引起血性腹泻。肠集聚耐热毒素（EAST）：导致大量液体分泌,所致疾病：肠道外感染（内源性感染）化脓性感染定位转移腹膜炎、阑尾炎、创伤感染、手术刀口感染、肺炎、败血症、新生儿脑膜炎等泌尿道感染来自病人肠道（上行性）占泌尿道感染首位、女性多见（尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎等）,引起胃肠炎的大肠埃希菌,肠道感染（急性腹泻）,微生物学检查与防治,肠道外感染标本涂片、染色分离培养鉴定尿路感染时每ml尿含菌10万，有诊断价值肠道内感染用选择性培养基分离培养+生化反应+血清分型+毒素测定+核酸检测等,在环境和食品卫生学上，常被用作粪便污染的检测指标,3个大肠菌群/1L饮水100个细菌总数/1ml饮水5个大肠杆菌每100ml瓶装汽水、果汁中,卫生学指标,大肠菌群指数,每1000ml（g)样本中大肠菌群数,我国的卫生标准：,细菌总数,每1ml或1g样品中细菌总数,四防治菌毛疫苗,第二节志贺菌（痢疾杆菌）,生物学性状,形态染色G小杆菌，有菌毛，无鞭毛，无动力是本菌与其它肠道致病菌主要区别点。培养特性肠道鉴别培养基上的无色透明菌落生化反应葡萄糖（+）、乳糖（-）（宋内志贺菌迟缓发酵乳糖）、H2S-、尿素（-）、动力（-）。IMViC（-+-）,动力试验,痢疾杆菌,（+）,（-）,乳糖发酵实验,大肠杆菌,（-）,（+）,痢疾杆菌,大肠杆菌,抗原分类根据O抗原分4群，40余型A群痢疾志贺菌较重B群福氏志贺菌最多见易转为慢性C群鲍氏志贺菌D群宋氏志贺菌较轻抵抗力比其它肠杆菌弱，尤其对酸敏感,致病性与免疫性,致病物质侵袭力菌毛：黏附回肠末端和结肠黏膜上皮细胞内毒素作用于局部并可入血引起全身症状外毒素A群产生志贺毒素（ST）有3种生物活性（1）肠毒素：类似EHEC产生的毒素（2）细胞毒性：对人肝细胞、肠黏膜细胞有毒性，引起变性坏死。（3）神经毒性：损伤动物神经系统（麻痹、死亡）,志贺毒素（ST）A亚单位毒素活性成分机制B亚单位与宿主细胞特异性糖脂受体结合（肠绒毛和肾上皮细胞）B单位与受体结合导致A进入细胞内终止蛋白质合成,所致疾病细菌性痢疾传染源：病人、带菌者传播途径：经口致病机制临床类型急性菌痢中毒性菌痢慢性菌痢免疫力不牢固，易再感染,四、微生物学检查,（一）标本：取粪便的脓血/粘液部分，保存于30甘油缓冲盐水中。,（二）分离培养与鉴定：SS平板无色半透明菌落IMVIC等。,（三）毒力试验：用Senery试验，将受试菌18-24h的固体培养物，以生理盐水制成9亿/ml菌悬液，接种于豚鼠眼结膜囊内。（四）快速诊断法荧光菌球法、协同凝聚试验,五、防治原则,现致力于活菌苗的研究。如链霉素依赖株（Sd）。口服后，产生SIgA。同时，血清中的IgM、IgG特异抗体也增多。Sd活疫苗的免疫保护具有特异性。药物治疗：应注意耐药菌株。,第三节沙门菌属,是肠杆菌科中最复杂的菌属，有2000种以上血清型。对人类有致病性肠热症伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌。食物中毒鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌。败血症猪霍乱沙门菌最常见。,教学大纲,掌握沙门菌抗原构造与分类沙门菌致病物质及所致疾病沙门菌感染的微生物学检查法肥达反应原理及结果判定分析熟悉肠热症的特异性预防,生物学性状,形态染色G小杆菌，多为周毛菌，有菌毛。,伤寒杆菌的周身鞭毛,生化反应乳糖（-），葡萄糖（+）/+，多数H2S+，动力+，尿素酶（-）,硫化氢试验,（+）,（-）,乳糖发酵实验,（-）,（+）,抗原结构O抗原特异性低、稳定、分群（组）H抗原特异性高，不稳定，分型Vi抗原（毒力抗原）不稳定，可阻止“O”凝集抵抗力不强,致病性与免疫性,致病物质侵袭力菌毛吸附Vi抗原微荚膜（抗吞噬）内毒素中毒症状和休克。外毒素个别（鼠伤寒沙门菌）产生，与ETEC肠毒素相似。,所致疾病,菌毛,穿入淋巴液,胸导管,第二次菌血症,迟发型变态反应肠壁坏死、溃疡,高热、肝脾肿大、玫瑰疹、白细胞等全身中毒症状,肠热症,伤寒沙门菌等经口,吸附小肠黏膜细胞上，被巨噬细胞吞噬,在肠壁、肠系膜淋巴组织中繁殖（致敏）,血流（第一次菌血症）,肠出血、肠穿孔,肠热症临床过程潜伏期2W发病初期：第1W（第一次菌血症），发热、不适、全身疼痛等前驱症状，此期血液（80%）、骨髓（90%）有大量细菌。发病极期：第2-4W，高热、相对缓脉、肝脾肿大、皮疹、WBC等全身中毒症状，此期血、骨髓中仍有菌，但粪便（60%）、尿（20%）、皮疹液中可查到细菌。由于型变态反应并发症发生血液抗体达到阳性标准肥达反应恢复期：第四周末，体温下降，症状消失，恢复期带菌1年（粪便仍阳性），血液抗体仍高。,2、胃肠炎（食物中毒）：最常见,鼠伤寒沙门菌猪霍乱沙门菌肠炎沙门菌,大于108,食物中毒（发热、恶心、呕吐、腹痛、水样泻）,3、败血症：,希氏沙门菌鼠伤寒沙门菌猪霍乱沙门菌肠炎沙门菌,血,败血症（高热、寒战、厌食、贫血）,脑膜炎、骨髓炎、胆囊炎、心内膜炎,4、无症状带菌者,约1-5%伤寒或副伤寒患者，症状消失1年后，粪便仍可排菌，这些菌主要留在胆囊中，有传染性。,免疫性,伤寒和副伤寒病后有牢固免疫；以细胞免疫为主，体液免疫为辅。,微生物学检查与防治,分离培养与鉴定标本采取肠热症：第一周取静脉血，第1-3周取骨髓液，第2周取粪便和尿液。食物中毒：粪便、呕吐物、可疑食物败血症：血带菌者：粪便、十二指肠引流液,阳性率（%）,发病后周数,伤寒病人不同病期血、粪、尿中病原菌的检出阳性率,血,粪,尿,分离鉴定：,血清学诊断肥达反应（Widal）,原理用已知伤寒沙门氏菌O抗原及H抗原，以及引起副伤寒的沙门氏菌H抗原与待检血清作凝集试验，测定待检血清中有无相应抗体及其效价。（TO、TH、PA、PB）方法：试管凝集法（定量）,判定结果时，应着重考虑：,正常凝集价伤寒沙门菌O抗体的凝集价1：80以上，H抗体1：160以上甲型副伤寒、肖氏沙门菌H抗体凝集价在1：80以上动态观察O与H抗体的诊断意义,临床意义O抗体（IgM），H抗体（IgG）O、H抗体均升高，患伤寒的可能性大O、H抗体不升高，患伤寒的可能性小只有H升高，则可能是预防接种过或非特异性回忆反应。只有O升高而H不高，则可能是感染早期或其他沙门菌的交叉反应。,O1:160H1:320Pa1:40NPb1:20NPc1:40NO1:160H1:40NPa1:160Pb1:20NPc1:40N,伤寒,甲型副伤寒,O1:160H1:320PA1:40NPB1:80PC1:40NO1:160H1:160PA1:160PB1:20NPC1:80,混合感染,混合感染,防治原则,一般性预防特异性预防伤寒Vi抗原荚膜多糖疫苗治疗早期：氯霉素耐药株：氨苄青霉素、复方三甲氧烯胺目前：环丙沙星,变形杆菌G-杆菌，有多形性，周身鞭毛，运动活泼，在普通培养基上呈扩散性生长，称为迁徙生长现象。,变形杆菌的周身鞭毛,迁徙生长,第四节其它,迅速分解尿素，尿素（+）为本菌特征，外斐试验（Weil-Felix）：本菌某些特殊菌株如X19、X2、XK的O抗原与某些立克次氏体有共同抗原成分，临床上应用OX19、OX2、OXK代替立克次氏体抗原与斑疹伤寒或恙虫病患者血清做凝集试验，以辅助诊断立克次体病为条件致病菌原发感染食物中毒继发感染尿路感染（仅次于大肠埃希菌）、创伤、腹膜炎、败血症等,第11章弧菌属,第一节霍乱弧菌,霍乱弧菌属弧菌属（Vibrio），为一大群菌体短小，弯曲成弧，G-单毛菌，运动极活泼，分布广泛，多存在于水中，对人有致病性主要为霍乱弧菌和副溶血弧菌。,霍乱弧菌的疫源地,霍乱是一种烈性肠道传染病，有3个疫源地印度恒河三角洲（O1群，古典生物型）：六次世界性大流行，始于1817年。印尼苏拉威西岛（O1群，埃尔托生物型）：第七次世界大流行，始于1961年至今未停止，累及140多个国家。孟加拉湾（O139，Beolgal）：始于1992年，O139，危害相同。WHO规定：疑为霍乱病例，三种同时检测,生物学性状,形态染色G弧菌，单鞭毛，穿梭样运动，鱼群状排列，有菌毛，个别有荚膜，无芽胞,培养特性兼性厌氧，氧气充分生长良好营养要求不高，耐碱不耐酸（pH7.4-9.6），故用pH8.8-9.0碱性培养基，形成光滑透明湿润的“水滴样”菌落，能在无盐培养基中生长。（区别其它弧菌）生化反应触酶、氧化酶（+），硝酸盐还原（+），吲哚试验（+）,（三）抗原构造,抗原主要有O和H抗原，根据O抗原的不同分类：,O1群,O139群：,小川型稻叶型彦岛型,古典生物型ElTor型,古典生物型ElTor型,古典生物型ElTor型,脂多糖抗原和荚膜抗原,分155血清群,抵抗力较弱怕干干燥时易死亡，水环境中可存活两周。怕酸正常胃酸4min。不耐热100，1-2min。对消毒剂抗生素敏感,致病性与免疫性,致病物质侵袭力鞭毛、菌毛、黏附素。,致病物质,霍乱肠毒素最强烈的致泻毒素其致病机制与ETEC的LT相似，但作用强烈得多A亚单位活性亚单位B亚单位与受体介导A亚单位进入细胞,1A+5B,B亚单位与小肠粘膜上皮细胞GM1神经节苷脂受体结合，介导A亚单位进入细胞。,致病机理,A亚单位裂解为A1和A2两条多肽，A1亚单位发挥毒性作用。,胞内cAMP，导致肠腺上皮细胞分泌功能亢进，分泌Na+、K+、HCO3-和水，大量水和电解质在肠腔堆积，引起剧烈腹泻与呕吐。,G蛋白Gs活化腺苷酸环化酶,A1,所致疾病霍乱（甲类法定传染病02）传染源：病人粪便污染的水源或食品传染途径：经口（暴饮暴食者）感染所需菌量：108103105,人类是唯一的易感者,菌大于108,霍乱弧菌,小肠粘膜表面繁殖,霍乱肠毒素,无症状或轻型腹泻,致死性腹泻,大量水分及电解质丧失,失水,代谢性酸中毒,低碱血症,低容量性休克,心率不齐,肾衰竭,潜伏期：2-3d前驱期：不明显，少数有轻度吐泻、腹胀不适吐泻期：剧烈吐泻、米泔样，每日数十次，持续2-3天，失水12000ml。对于一个50公斤的人来说：脱水0.5公斤就会出现口渴，脱水1公斤就会严重口渴，出现不舒服、压抑和没有食欲之感，脱水4公斤则会出现头晕、青紫、语言不清、无力和精神紊乱，脱水7.5公斤就会死亡。,脱水期：严重吐泻引起水电解质紊乱，脱水酸中毒，肾衰、循环衰竭、休克、死亡。表现：神志不安、淡漠“霍乱面容”呈脱水貌，眼窝下陷，舟状腹等恢复期：吐泻停止、紊乱纠正、症状消失、病程平均为3-7天。,三、免疫性,抗毒素中和霍乱肠毒素,抗菌抗体针对O抗原,SIgA,阻止霍乱弧菌粘附于肠粘膜上皮细胞,阻止霍乱肠毒素与上皮细胞上的受体结合,1、O1群：,2、O139群：产生针对荚膜多糖及脂多糖的免疫为主。,病人愈后可获得牢固免疫,微生物学检查与防治,烈性传染病（发病率高、流行迅速、死亡率高），早期、快速、准确诊断（尤其首例）对防治蔓延意义重大。1.标本：“米泔样”便及呕吐物，专人护送，快速送检，指定实验室。2.直接涂片镜检悬滴法或暗视野显微镜，观察穿梭样运动。3.分离培养鉴定：蛋白胨水中培养，TCBS培养基，生化