【国家标准】GBT 2930.6-2001 牧草种子检验规程健康测定

51荡中华人民共和国国家标准 29301一293011B/T (国际种子检验规程)(1999年版)对930草种子检验规程进行修订。本标准在植物种及其检验方法等主要技术内容上，等效采用了国际规程(999)的第七部分:种子健康测定。另外，又纳人了国际规程未列入、可满足我国种子检验工作的实际需要。本标准对930整了扦样的植物种;增补了“剖粒检验”、“染色检验”、“比重检验”和“软四种检验方法。本标准是 2930. 12930. 11草种子检验规程系列标准之一。该系列标准由以下部分组成: 2930. 2 2930. 4 2930. 5哇)测定 2930. 7 2930. 8 2930. 9 2930. 10 国际规程有一定区别。国际规程将所有附件均置于全部检验项目的正文之后，而且规程的大部分内容在附件之中，使用时需前后相互参照，颇为不便。而本标准在编排上，将各项目均作为独立的标准编写，将主要内容编在正文之中，并将相关的附录紧继各标准的正文之后。本标准自实施之日起，代替930标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位:农业部牧草与草坪草种子质量监督检验测试中心(兰州)。本标准主要起草人:王彦荣;参加起草人员:南志标、李春杰、朱廷恒、孙建华、余玲。 子检验便是为了在播种前评定种子的质量，使这种风险降到最低程度。种子质量是由不同特性综合而成的概念。这些特性对种子产业的不同部门生产者、加工者、储藏者、经营者、农民、认证机构以及负责种子管理的政府机构或部门等极为重要。在所有情况下，检验的最终目的是测定种子的种用价值。种子是有生命的产品，其状况不像检验无生命或非生物产品那样能准确地予以预测。所采用的方法必须基于种子科学知识和种子检验工作者经验积累，所要求的准确性和重演性则因检验的目的而定。本规程规定的标准定义和方法可用于国际贸易间的种子质量评定，为此目的，检验方法的高度准确性和重演性是必须的。当种子交易超越国界时，有可能在不同国家的检验室检验。因此，所有检验室采用一致的标准方法非常重要，这样可在允许范围内获得一致的检验结果。本规程分为两部分规程正文和附件。规程正文部分阐述了各项目测定的目的和原则、采用的定义、以及概述了所用的方法和程序。附件部分对定义加以引申，并详述了规程中所规定的程序和方法。如按照本规程检验的结果，需填报协会的国际种子检验证书，那就必须严格地遵守规程，对规程每项条文的解释应与该章附件中的有关细节相符。建议一个国家在管理国内种子贸易和实施国家种子质量管理法规时，应尽可能采用本规程及其附件。虽然此种情况并不必采用国际种子检验证书，但应认识到，如果与这个为国际范围所接受的规程和附件条文不符，将会阻碍各国间的种子自由流通。咨询检验(一种根据送验者要求、为特殊目的而进行称子批评价的检验。这种检验需考虑诸如播种的季节、土壤类型和海拔高度等因素。对于这种检验，本规程和附件仅提供一个基本的指导，有关文献的其他技术可作为补充方法。本规程和附件是为世界主要作物制定的。尽管不是每个细节，但是原则上也适用于本规程未提及的其他作物种类。另外，为提供足够的指导，有必要提到专门制造商的仪器设备，但这并不意味着排除其他制造商的同类产品。中华人民共和国国家标准牧草种子检验规程健康测定 930标准适用于牧草种子、草坪草种子和饲料作物种子质量检验的健康测定。引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 此推测种子批的健康状况。种子健康测定的重要性主要体现在以下三个方面:a)种子长途调运或进出口，可将病害带人新区，影响草地畜牧业及农业生产。b)种子携带病原体可引起田间病害，逐步蔓延，降低牧草的商品价值。)种子携带病原体，可降低其发芽率或田间出苗率，影响种子价值及草地建植。定义本标准采用下列定义。真菌、细菌及病毒等)和有害动物(如线虫和昆虫等)，也包括微量元素缺乏症等生理状况。养前在实验室内用某种物理或化学方法处理种子。具与试荆器具国家质 视显微镜(40倍);b)显微镜(400倍);c)培养箱(光、温控制);d)冰箱(5的高压消毒锅;f)超净工作台;9)离心机;卜)振荡器;i)近紫外灯;户培养皿、酒精灯、载玻片、血球计数板等。试剂a)苯胺蓝;b)乳酚油;c)次氯酸钠;d)酒精;e)无菌水;f)蒸馏水。6检测程序试验样品根据测定方法，可把整个送验样品或其中的一部分作为试验样品。当将送验样品的一部分作为试验样品时，按 2的规定进行分取。设重复。特殊情况下，要求送验样品大于 2930. 子种类及测定目的，可采用下述不同的测定方法进行检验。，未经培养的检验此类检验不能表明病原菌的生活力。1门直接检验:适用于检测混杂于种子间的病菌子实体、杂质或外表有明显症状的种子。包括麦0门核、线虫痹、虫瘦、黑穗病、抱子团、蜻类及种子病株残体或其他杂质上的病虫害症状，如变色或损伤等。必要时，可用体视显微镜镜检确认，取出病原体或病粒，称重或数取粒数，计算百分率。剪股颖粒线虫400粒种子，用肉眼直接观察，带虫瘦的小花暗紫褐色，雪茄形，长45 颖片长度是正常种子的2外稗和内秤则分别是正常种子的5正常种子明显不同。为进一步确认，可将虫瘦置于湿滤纸上1h，与正常种子相比，浸润后的虫瘦为褐色，松软，用解剖针挑开颖片，可见大量粒线虫的幼虫，在解剖镜下虫体清晰可见，体长。0 宽镇0. 017 算虫瘦种子数量百分率。用于检测经水、乳酚油或其他液体浸泡后，大量释放抱子或子实体、害虫、病原体更容易观测或症状更为明显的病害。浸泡吸胀后的种子用体视显微镜检查其表面或内部，计算带病或虫害种子数量百分率。黑麦草盲种病( 400粒种子，在温水中浸软(一般需2 h)，体视显微镜(4。倍)下挑去颖片，观察水中的胚和颖果。 果具锈红色斑点，病部释放出混浊的抱子流。为进一步确定病原菌，可将种子单独浸泡，置于载玻片上，加数滴蒸馏水，而后将此载玻片置于湿滤纸上，加罩保湿。浸泡4种子转至另一载玻片上，挑去颖片，于显微镜下(40。倍)观察。抱子无色，圆柱形或腊肠形，两端钝圆，12 子两端各有一个油滴。统计释放抱子的带菌种子，计算带菌种子百分率。用于检查粘附在种子表面的各种病菌抱子或病原线虫，如禾谷类作物的黑粉菌) T. ) 首楷、三叶草的茎线虫。检验样品浸在加过湿润剂的水或酒精中，用力振荡，将粘附在种子表面的真菌抱子、菌丝、线虫等冲洗下来。然后把洗涤液进行过滤、离心、浓缩或蒸发，除去过剩的液体，并用显微镜检查提取物。计算每克种子所粘附抱子数。沙打称取种子40 g，置于500 衣粉的无菌水60 塞剧烈振荡10 洗涤液倾人离心管内，以1 0002 400 r/吸管移去上清液，保留沉淀液0. 3 人4%的明胶溶液，使离心管内沉淀物总量为0. 5 加振荡，使之混合成为试样。采用血球计数板观测统计抱子数量，至少5次重复。分生抱子深褐色，球形，椭圆形，2隔处缴缩，表面有小刺或小瘤，1264 计每大格内的抱子数量，用式(1)计算每克种子粘附抱子数:抱子数(个/g)50 000一0. 540 g(种子样品重)用于检验饲料作物种子内寄生的害虫。取400粒种子，用刀剖开或切开种子的受害或可疑部分检查，确定虫害种子数，计算百分率。用于检验牧草和饲料作物种子内部的病原体或害虫。禾草内生真菌()数取400粒种子，室温下在的50液中浸泡过夜(约14 h)，而后将种子倾于铺有纱布的漏斗内，自来水冲洗3-5 洗过的种子移人烧杯内，加人苯胺蓝溶液(水溶性苯胺蓝0. 325 g，水100 5%的乳酸50 以淹没种子为宜，在电热板上加热煮沸3-5 却后，每次取一粒种子，置于载玻片上;解剖镜下，用解剖针移去颖片，加1滴苯胺蓝溶液，盖玻片下轻轻按压种子，使种子组织均匀地散布于盖玻片下;显微镜(400倍)下观察糊粉层内深蓝色的有隔菌丝体，即为内生真菌菌丝体，逐一镜检每粒种子，统计种子带菌数，计算百分率。豌豆象(.)取400粒种子，放人铜丝网中或用纱布包好，浸人1 0酒溶液中15 后移人。氢氧化钠溶液中，浸30 s，取出用清水洗涤1520 s，立即逐一检验。凡豆粒表面有1-2 为豆象感染。统计虫害种子数，计算百分率。400种子，除去杂质，倒人食盐饱和溶液中(食盐35. 9 00 搅拌1015 置1-2 悬浮在上层的种子取出，算虫害种子百分率。于检查种子内隐匿的害虫，如豌豆象(. )、谷象(. )，通过照片或直接从荧光屏上观察，统计虫害种子数，计算百分率。查种子内、外部和幼苗上是否存在病原菌、害虫或生理障碍等症状。通常应用的方法有三类。吸水纸法:适用于多种类型种子的种传真菌检验，尤其适于检测半知菌。此法有利于抱子形成和致病菌在幼苗上症状的发展。种子不论是否经过预处理，在培养期间的排列要适当隔开，以免病原体再次传染。光照可促进某些真菌抱子的形成，有时需用冷冻或其他方法抑制发芽。鉴别抱子时，需用双目解66 ). . . D. & 三层吸水纸(粗滤纸)，于水中浸透，甩掉表面明水，铺于直径9 为培养床。种子不经表面消毒，直接置于吸水纸上，每血25粒种子，共取400粒,200C,12 紫外灯或日光灯)条件下培养7d。在体视显微镜下逐粒检查种子，根据种子表面真菌菌落生长习性、菌丝体特征、子实体形态和着生状态等，确定病原真菌种类，统计带菌种子数，计算带菌种子百分率。燕麦斑枯病 性阶段;经表面消毒的种子置于玻璃培养皿内，烘箱内100下处理1h，而后移出，降至室温。每皿25粒种子，共取400粒，均匀置于吸水纸培养床上，20人一20后在20C,12紫外灯)条件下培养5d。体视显微镜(40倍)下，检查病菌，深褐色的分生抱子梗单生或2生抱子浅褐色或榄褐色，圆柱形，两端钝圆，多单生。显微镜(400倍)下，分生抱子301一22 计带菌种子数，计算百分率。要用于鉴定萌发较慢的潜伏在种子内部的病原菌。种子通常经过预处理，间隔排列在经过灭菌的琼脂表面上进行培养。有经验的检验员，仅用肉眼便可根据菌落形态鉴别菌的种类。柱花草炭疽病() , C. 取400粒种子，用1%次氯酸钠溶液中消毒10 菌蒸馏水冲洗5次，无菌滤纸上干燥，每皿10粒种子，置于玉米粉琼脂培养基上，25C 培养第二天起逐日用肉眼检查每粒种子上菌落生长，直至第14天。该菌生长较慢，14丝体稀疏，白至浅灰色，分生抱子盘单生或聚生，上有黑色或褐色刚毛，奶油色(C. 桔黄色(C. 抱子群体覆盖整个菌落，成菌脓状。菌落的背面为浅灰色至褐色，并随培养时间而加深。初次鉴定时应在体视显微镜下观察菌落形态，并制片在显微镜下确认，待熟悉时，根据菌落形态，肉眼便可鉴别。工堆肥及类似的培养基法:适合于某些病原体鉴定。将除去杂质并通过1 温烘干消毒后，放人培养皿内加水湿润。以适当距离播种，培养条件与纸床相同，待幼苗顶到培养皿时镜检。后检查其病症，这是测定样品中是否存在细菌、真菌或病毒等最切实可行的方法。可从供检的样品中取出种子进行播种，或从样品中取得接种体，对健康幼苗或植株的一部分进行感染试验。植株应防止意外感染，并需严格控制接种条件。7结果计算和表示以试验样品中感染种子数目(重量)的百分率或病原体数目(重量)的百分率表示。填写结果应同时说明所用的测定方法，包括所用的预处理方法和用于检查样品的数量，并写明病原菌或昆虫的学名。谢谢阅读谢