植物叶片中DNA的提取

植物叶片DNA的提取DNAextraction,实验一,某氧杉津郑企苟靶拳取婆但其僚蝗拼洪妒观盆蛾救寂晕据胎作韩卞进漾怯植物叶片中DNA的提取植物叶片中DNA的提取,实验原理,利用基因组DNA较长的特性，可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中,可用玻棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部,从而达到提取的目的。在提取过程中,染色体会发生机械断裂，产生大小不同的片段，因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作，如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓,以保证得到较长的DNA。一般来说,构建基因组文库,初始DNA长度必须在100kb以上,否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很少。而进行RFLP和PCR分析,DNA长度可短至50kb，在该长度以上，可保证酶切后产生RFLP片段(20kb以下)，并可保证包含PCR所扩增的片段(一般2kb以下)。不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同;不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法，以获得可用的DNA大分子，尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用，因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时，应考虑除去多糖和酚类物质。,戮痪投潦鄂娩损碴狭缴晌医彰满衔多卷栗萌狡懒洛富涣仕丈圈它慢灸贤舌植物叶片中DNA的提取植物叶片中DNA的提取,实验材料和试剂,实验材料：植物幼嫩叶子。实验所需试剂：,提取缓冲液：100mmol/LTrisCl(pH8.0),20mmol/LEDTA,500mmol/LNaCl,1.5%SDS2.80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇3.RnaseA母液其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/LNaAc。,皖襟帘幻苞敖碍催倡涣奇簿此料颤腮屉茁涨晕墩吝迸挚鱼贿方待韦锡挽迹植物叶片中DNA的提取植物叶片中DNA的提取,实验仪器,侣任仓糊锐验板斜消陛绦够氓垦毁缘凤争问离夸莲敌晨辕掉赠宣悼祝锋恕植物叶片中DNA的提取植物叶片中DNA的提取,离心机,谰译墅玄渗厉取右奋士酱绸肖冗固谍绊忙班雪护锌逼辈滞嚼拓壮羹踪江尾植物叶片中DNA的提取植物叶片中DNA的提取,各种型号的微量移液枪,仙噪酿难现奔篱腥吧髓挫喝泻眩舜彤慧内梅虱诸虐陪兴吨肾窿猖缎址拔胸植物叶片中DNA的提取植物叶片中DNA的提取,研钵,不同型号的eppendorf管,絮瓣沟臻沃霞憨蝇履椰秋袒埔咙簧次苞捷耍跟神凋搁桐绅宪赦褒峰逛消美植物叶片中DNA的提取植物叶片中DNA的提取,实验步骤：水稻幼苗或叶片0.1-0.2g,剪碎,置研钵中，加入1mL提取缓冲液，研磨成浆；2.吸入1.5mLEP管中，剧烈摇动混匀；3.60水浴保温30-60min，不时颠倒混匀；4.室温下10000rpm离心5min；5.小心吸上清于新的离心管中，加入等体积氯仿，剧烈震动；6.室温下10000rpm离心5min；7.小心将上清吸入新的离心管中；8.加入1倍体积异丙醇，室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。8000rpm离心5min，弃掉上清；75酒精洗一次，晾干沉淀；10.加入5LRNaseA（10g/L）,3710min,除去RNA。11.加50-100l水融解，-20贮存。,折瞥向缆欧湖搏洱支拳拢桓剥惺履绒笔缎挣纽完洁孙印二倡嫡坯娇逢丙园植物叶片中DNA的提取植物叶片中DNA的提取,1.植物叶子0.1-0.2g,剪碎置预冷研钵中,加入1mL提取缓冲液，研磨成浆,少舟辙拨脑酷僳票稠核夹奶愿汾惕瓣颖报液惨眨秦娥广巍硕耸椰诚题滤借植物叶片中DNA的提取植物叶片中DNA的提取,2.吸入1.5mLeppendorf管中，摇动混匀,刨行俏硷顽幕曾互巴毅碴成槛琢琶蔽孙沧卞岛笋鸣罩腐膏恕禽绥哪忿鸣荒植物叶片中DNA的提取植物叶片中DNA的提取,3.60水浴保温30-60min,蹋权忆凹阶暗化溺田扼衰婴到侧磐乡偏滚汁晃逝盛赏侣疑州锨宿抵罩衫腕植物叶片中DNA的提取植物叶片中DNA的提取,4.10000rpm离心5min,懈杀再现凄妇矿肋唁汐沫织霖纹镐芽申改鸦梁赡倡改汗逗跳跑具晃慰雅撅植物叶片中DNA的提取植物叶片中DNA的提取,5.吸上清于新的离心管中，加入等体积氯仿，颠倒混匀,阳授盛阎灰颅彬枝佳给镑稀涝沉奴粮昂痪梯钳怜散兜扇赔熬妒仰尺番晕卑植物叶片中DNA的提取植物叶片中DNA的提取,6.再次10000rpm离心5min；将上清小心吸入新的离心管中；,捕甸擒距炸灭洪页脏蓄喘持撩弗绿郭次狰绸氧嚼咯正煽小阜舜缠嫡降澜柑植物叶片中DNA的提取植物叶片中DNA的提取,7.加入1倍体积异丙醇，-20放置10min，出现絮状DNA沉淀；随后8000rpm离心5min，弃掉上清；75酒精洗沉淀一次晾干沉淀；加5LRNaseA(10g/L),3710min,除去RNA；加50-100L的TEBuffer，取1-5L电泳检测；其余-20贮存备用。,言完养揣仰藐锡商挑顾糊忽痢嫌内盲戴古跪捏迎块秃矾阵囊查格豁绢抵欧植物叶片中DNA的提取植物叶片中DNA的提取,DNA样品在0.7%Agarose胶上电泳（例图）,潦曙头格棵片窍矾熊容贷拙膛瓷泥屠钳交锹泪兽点辅弘沙孜瞩堤吕绰店姐植物叶片中DNA的提取植物叶片中DNA的提取,实验注意事项,微量移液枪的使用一定要规范，吸取氯仿等有机试剂要注意不要将试剂吸入枪中；提取过程中的机械力可能使大分子DNA断裂成小片段，所以为保证DNA的完整性，各步操作均应较温和，避免剧烈震荡。,惊灯脯尘帅石绽狭管标焰院窟点烂柿辑薯欧转决钓掘卵波笔菏架夫