检验基础知识

检 验 基 础 知 识 讲 座,崔 志 刚,株式会社 日立高新技术,问 题：,1、检验科是做什么的？ 工作流程如何？2、生化仪的用途是什么？3、生化仪分析的是什么？,检验科科室工作分布情况,临检室,微生物室,生化室,免疫室,血液室,血常规,小便常规,大便常规,肝功能,肾功能,血脂,心肌酶谱,电解质,糖类,脑脊液、体液常规,肝炎类,部分免疫项目,肿瘤标志物,肾炎类,心肌损伤标志物,爱滋病,风湿类,急性时相蛋白,培养,鉴定,药敏,骨髓涂片,鉴别实验,检验科科室工作流程,朝会交接工作,接收标本整理分类,样本前处理准备,工作前准备,上机测定,结果审核,上级主管,报告发出,填写记录,维护保养,关机,异常告知,复查,朝会交接工作,接收标本整理分类,样本前处理准备,工作前准备,上机测定,结果审核,上级主管,报告发出,填写记录,维护保养,关机,异常告知,复查,检验科科室工作流程（朝会交接工作）,朝会交接工作,接收标本整理分类,样本前处理准备,工作前准备,上机测定,结果审核,上级主管,报告发出,填写记录,维护保养,关机,异常告知,复查,检验科科室工作流程（接收标本整理分类）,标 本 分 类,血清血浆尿液脑脊液体液（胸水、腹水）,检验科科室工作流程（接收标本整理分类）,血清与血浆的成分区别,血清,纤维蛋白原,血细胞,血浆,血细胞,不抗凝管,抗凝管,血 清/血浆 标 本 测 定 项 目,生化项目 1、肝功能：ALT、AST、TP、ALB、TBIL、DBIL、ALP、GGT、CHE、TBA、PA 2、肾功能：BUN、CRE、UA、CO2-CP 3、血脂：TCHO、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA1、ApoB、Lp（a） 4、心肌酶谱：AST、LDH、HBDH、CK、CK-MB、LDH-1 5、电解质：K、Na、Cl、Ca、Mg、P、Fe、Cu、Zn 6、免疫类：ASO、RF、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP 7、其他特殊项目：免疫项目血液病检查项目微生物项目 根据项目分类后，送各科室，各科室进行样本编号。,检验科科室工作流程（接收标本整理分类）,ALT（GPT） 丙氨酸氨基转移酶谷丙转氨酶 AST（GOT） 天门冬氨酸氨基转移酶谷草转氨酶 ALT/AST 谷丙/谷草 ALP（AKP） 碱性磷酸酶碱磷酶 GGT（-GT） -谷氨酰转肽酶转肽酶 TBIL 总胆红素 DBIL 直接胆红素 IDBIL 间接胆红素 TP 总蛋白 ALB 白蛋白 GLO 球蛋白 A/G 白球比值 CHE 胆碱酯酶 TBA 总胆汁酸 PA 前白蛋白,肝 功 能 生 化 项 目,1、肝细胞的损害情况2、肝细胞参与的代谢功能3、肝细胞的合成功能,为什么选用以下项目作为肝功能指标？,ALT（GPT） 丙氨酸氨基转移酶谷丙转氨酶 AST（GOT） 天门冬氨酸氨基转移酶谷草转氨酶 ALT/AST 谷丙/谷草 ALP（AKP） 碱性磷酸酶碱磷酶 GGT（-GT） -谷氨酰转肽酶转肽酶 TBIL 总胆红素 DBIL 直接胆红素 IDBIL 间接胆红素 TP 总蛋白 ALB 白蛋白 GLO 球蛋白 A/G 白球比值 CHE 胆碱酯酶 TBA 总胆汁酸 PA 前白蛋白,肝 功 能 生 化 项 目 临 床 意 义,检查亚临床肝病估计肝组织损害程度观察黄疸性质和程度判断肝病以便拟订治疗措施检测肝病病程、评价疗效估计病人能否接受某种治疗措施，如手术等常规体检,肾 功 能 生 化 项 目,BUN/UREA 尿素氮/尿素CRE 肌酐UA 尿酸CO2-CP 二氧化碳结合力U-TP 尿蛋白U-ALB 尿白蛋白,临床意义：用于排除和发现肾脏和泌尿道疾病。,血 脂 生 化 项 目,TCHO 总胆固醇TG 甘油三酯HDL-C 高密度脂蛋白-胆固醇LDL-C 低密度脂蛋白-胆固醇ApoA1 载脂蛋白A1ApoB 载脂蛋白BLp（a） 脂蛋白a,临床意义：用于心血管疾病的临床观察、干预研究、实验室和流行病学调查。,心 肌 酶 谱 生 化 项 目,AST （GPT） 丙氨酸氨基转移酶谷丙转氨酶LDH 乳酸脱氢酶LDH-1 乳酸脱氢酶-1CK 肌酸激酶CK-MB 肌酸激酶同工酶MB-HBDH -羟丁酸脱氢酶 临床意义：用于诊断急、慢性心脏疾病。,注：同功酶是指同一种属酶分子结构组成不同能催化同一种化学反应的一组酶，其物理、化学性质乃至生物学功能均可有所差异。由于分子结构的差异，虽然催化同一种反应，但其底物专一性与亲和力，乃至酶的动力学都可能存在差异，在代谢过程中的功能也有所不同。,电 解 质和微量元素 生 化 项 目,K 钾Na 钠Cl 氯Ca 钙Mg 镁P 磷Fe 铁Cu 铜Zn 锌,免 疫 类 生 化 项 目,IgG 免疫球蛋白GIgA 免疫球蛋白AIgM 免疫球蛋白MC3 补体C3C4 补体C4CRP（hsCRP） C-反应蛋白（超敏C-反应蛋白）,临床意义：用于诊断、监测感染、免疫性疾病和急性炎症。,糖 类 生 化 项 目,GLU 葡萄糖HBA1C 糖化血红蛋白 FMN 果糖胺/糖化血清蛋白,临床意义：用于诊断糖尿病、监测治疗过程。,尿 液 标 本 测 定 项 目,临检项目（尿常规、尿沉渣检查）生化项目（尿淀粉酶、尿肌酐、尿尿酸等）免疫项目（尿2-微球蛋白等）微生物项目（培养、鉴定、药敏）血液病检查项目,脑 脊 液 标 本 测 定 项 目,临检项目（细胞计数、分类等）生化项目（葡萄糖、乳酸脱氢酶、氯化物、蛋白等）免疫项目（免疫球蛋白等）微生物项目（培养、鉴定、药敏）,胸 腹 水 标 本 测 定 项 目,临检项目（细胞计数、分类等）生化项目（葡萄糖、乳酸脱氢酶、氯化物、蛋白等）免疫项目（免疫球蛋白等）微生物项目（培养、鉴定、药敏）,检验科科室工作流程（接收标本整理分类）,标 本 具 备 患 者 信 息 及 编 号,姓名门诊病历号/住院病历号年龄性别临床诊断/表现开单日期检查项目采样日期及时间,编号时，观察样本状况，可添加以下信息作为该标本注释：1、标本量（是否足够）2、是否正确使用盛器3、有无溶血（溶血红细胞破裂）4、有无黄疸（黄疸血清中胆红素含量达到一定范围，所呈现类似金黄色）5、有无脂血（脂血血清中脂类含量达到一定范围，呈牛奶状）,检验科科室工作流程（样本前处理准备）,朝会交接工作,接收标本整理分类,样本前处理准备,工作前准备,上机测定,结果审核,上级主管,报告发出,填写记录,维护保养,关机,异常告知,复查,检验科科室工作流程（样本前处理准备）,生化室 1、血清/血浆：离心、分注 2、尿液/脑脊液/胸/腹水：离心，取上清液免疫室 1、同上 2、抗凝血：细胞分离使用微生物室：直接使用临检室： 1、全血：直接使用 2、血清/血浆：离心、分注 3、尿液/脑脊液/胸/腹水：直接使用或离心，取上清液/沉渣血液室： 1、血液/骨髓：涂片使用 2、血清：离心、分注 3、抗凝血：细胞分离使用,影响测定的样本因素,溶血：K、LDH、AST、ALT抗凝剂：样本的稳定性 ： GLU、K样本稀释： 因大多数蛋白质在浓溶液中的分子 构象比稀溶液中稳定；,检验科科室工作流程（样本前处理准备）,朝会交接工作,接收标本整理分类,样本前处理准备,工作前准备,上机测定,结果审核,上级主管,报告发出,填写记录,维护保养,关机,异常告知,复查,检验科科室工作流程（工作前准备）,检验科科室工作流程（工作前准备）,检验科科室工作流程（工作前准备）,试 剂 种 类 介 绍,干粉试剂,液体试剂,单试剂,双试剂,单试剂,双试剂,试剂,检验科科室工作流程（工作前准备）,液体试剂与干粉试剂的比较,检验科科室工作流程（工作前准备）,单试剂与双试剂的比较,时间,吸光度,A 1,A 1,时间,吸光度,A 1,A 1,S+R1,S+R1,R2,A 2,A 2,：表示正常颜色样本反应曲线；：表示样本本底颜色高的标本,检验科科室工作流程（工作前准备）,单试剂与双试剂的比较,ALT-酮戊二酸+L-丙氨酸 L-谷氨酸+丙酮酸 LDH丙酮酸+NADH+H L-乳酸+NAD,原理：,试剂成分：,R1：Tris缓冲液L-丙氨酸NADHLDH,R2：Tris缓冲液L-丙氨酸a-酮戊二酸,检验科科室工作流程（工作前准备）,使 用 双 试 剂的优点,扣除样本空白的影响（R1多为缓冲液，R2多为启动试剂）去除内源性干扰物质（R1含与内源性干扰物质反应的物质，R2为启动试剂）使用方便，不易造成浪费,检验科科室工作流程（工作前准备）,使 用 双 波 长 的 优 点,波长,吸光度,1,2,主波长,付波长,A 1,A 2,A 1,A 2,1、使用单波长1测定时，待测物的吸光度A为：A=A1+A12、使用双波长测定时，待测物的吸光度A为：A=（A1+A1）-（A2+A2）,：待测物的吸收曲线；：干扰物的吸收曲线,检验科科室工作流程（工作前准备）,使 用 双 波 长 的 优 点,1、补偿由于样本溶血、黄疸、脂血造成的样本本底颜色增高的影响；2、补偿由于电压波动造成的影响。,朝会交接工作,接收标本整理分类,样本前处理准备,工作前准备,上机测定,结果审核,上级主管,报告发出,填写记录,维护保养,关机,异常告知,复查,检验科科室工作流程（上机测定）,朗伯-比尔定律（Lamber-Beer定律）,比色分析的基础,入射光0,出射光t,L,当一束强度为0的平行单色光通过一个含有浓度为C的吸收物质、厚度为L的吸收池时，一些光子被物质吸收，光强从0减少至t。经数学推导，可用以下数学公式表示:,-lg = CL,t,0,-lg = CL,t,0,朗伯-比尔定律（Lamber-Beer定律）,比色分析的基础,t,0,用T表示，称为透光率。-lg用A表示，称为吸光度。,是摩尔消光系数，在给定条件（单色光波长、溶剂、温度）， 是物质的特性常数，它只和该物质分子在基态和激发态的跃迁几率有关。在A与C或L之间的直线关系中， 是斜率，值越大，测定的灵敏度越高。,t,0,A = CL,检验科科室工作流程（上机测定）,分 析 方 法 简 介,时间,吸光度,A 1,t,终点法,时间,吸光度,A 1,t,速率法,t2,t1,t3,t4,A1,A2,A3,S+R,S+R,利用反应到达终点时的吸光度A1来计算物质浓度。,利用0级反应期，用最小二乘法计算出单位时间的吸光度变化A/min，来反应酶的活性。,检验科科室工作流程（上机测定）,酶 测 定 简 介,酶是生物体内具有催化活性的一类蛋白质，具有高效性和专一性。,例： 酶 葡萄糖+B C+D测量对象不同： 1、葡萄糖是待测物，B和酶是试剂，充分反应后，测定B的减少量或C、D的生成量，就可以反映葡萄糖的浓度。 2、酶是待测物，葡萄糖和B是试剂，测定葡萄糖、B减少的速度或测定C、D生成的速度，就可以反应酶的活性。表示单位不同： 1、酶以活性单位表示，如国际单位IU/L 2、其他项目，多使用物质的量作为单位：如国际单位mmol/L（国内多用）或常用单位mg/dl（日本多用）,检验科科室工作流程（上机测定）,标 本 测 定 物 质 分 类,酶：ALT、AST、ALP、GGT、CHE、LDH、CK、CK-MB、HBDH、LDH1蛋白：TP、ALB、U-TP、U-ALB、PA糖类、小分子：GLU、BUN、CRE、UA离子：K、Na、Cl、Ca、Mg、P脂类：TCHO、TG、HDL、LDL、Apo1、ApoB、Lp（a）,检验科科室工作流程（上机测定）,上 机 测 定 的 流 程,质控品测定,检查操作，新开一瓶质控血清,在控,失控,常规标本测定,检查试剂，重新校准,在控,失控,重做质控,在控,检验科科室工作流程（上机测定）,质 控（QC）,室内质控：,1、质控品来源：购买商品化质控血清（定值或不定值）或科室自制（混合血清，分装冰冻）；2、质控品测定频率：按科室质控管理程序，每日或更小的时间间隔（每RUN或每？小时）测定一次；3、测定方式：混入常规样本中测定；4、数据处理：绘制质控图，根据按科室质控管理程序判断在控或失控，以及是否或如何进行下一步工作。 例：,+3SD,-3SD,+2SD,-2SD,+1SD,X,-1SD,检查准确度，保持精度,质控数据超出3SD的概率是0.3%,属于小概率事件，可判断为失控。,Levey-Jennings质控图,检验科科室工作流程（上机测定）,日立生化仪上的实时质控,使用两个不同浓度的质控品，均值分别做为X、Y两个浓度质控品同时测定，数据即可在坐标图上确定出位置,+3SD,-3SD,+2SD,-2SD,+1SD,Y,-1SD,+3SD,-3SD,+2SD,-2SD,+1SD,X,-1SD,数据点落在 区域，表明系统误差；数据点落在 区域，表明系统偶然误差,室间质评：实验室间比对,检验科科室工作流程（上机测定）,质 控（QC）,1、质控品来源：由各级临检中心定期发放给各家医院检验科2、质控品测定频率：一年两次或三次3、测定方式：要求混入常规样本中测定4、数据处理：科室将数据回报给临检中心。临检中心收到数据后经过处理，将科室室间质评成绩发回科室。,存在误区： 1、将室间质评成绩作为科室绩效考核标准之一； 2、将室间质评成绩作为医院等级评审考核标准之一。,结果： 1、质控品特殊处理（与常规标本待遇不同）； 2、医院之间互相通告室间质评结果。,重视室内质控 正视室间质评,检验科科室工作流程（上机测定）,校 准（Calibration）,通过校准品将仪器和试剂联系起来，建立一条浓度和吸光度的关系曲线（标准曲线），用于进行未知浓度标本的测定。,吸光度,浓度,A 1,A 2,STD（ 1）,STD（ 2）,A X,C X,溯 源,检验科科室工作流程（上机测定）,校 准 类 型,吸光度,浓度,A 1,A 3,STD（ 1）,STD（ 3）,A 2,STD（ 2）,吸光度,浓度,A 1,A 3,STD（ 1）,STD（ 3）,A 2,STD（ 2）,非线性校准,线性校准,校准类型以何种方式制成标准曲线,检验科科室工作流程（上机测定）,标 本 测 定,常规标本追加标本急诊标本复查标本,朝会交接工作,接收标本整理分类,样本前处理准备,工作前准备,上机测定,结果审核,上级主管,报