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文档简介

实验十七,准备工作及细菌活菌计数实验抗菌药物体外抗菌活性的检测最小抑菌浓度（MIC）的测定,准备工作及细菌活菌计数实验,实验目的,细菌培养技术：包括细菌的分离、培养，含菌量的测定；掌握细菌分离培养过程中的无菌操作。,实验器材、培养基、菌种、药品,【器材】96孔板、移液枪1mL、200L各一支、1mL、200l、枪头各一盒、吸耳球1个、小试管、锥形瓶、容量瓶、小药瓶加塞、试管架、一次性平皿、接种棒、酒精灯、分析天平、自动高压灭菌锅、超净工作台、37恒温培养箱。【培养基】MH肉汤培养基、麦康凯琼脂、LB肉汤【菌种】大肠杆菌标准菌ATCC25922【药品】阿米卡星、氨苄西林、四环素、粘菌素,实验步骤,1.试验前的准备器具的清洗、高压灭菌将试管、锥形瓶、枪头等实验器具洗净、包好，121、20min高压灭菌，放烘箱烘干备用。96孔细胞培养板（不可高压灭菌）用洗液浸泡超声、冲洗干净后，泡75%酒精备用。（用前取出放超净台吹干，紫外杀菌2h以上）,1.磷酸缓冲液（PBS）的配制,2.,3.,4.,试剂的配制,药物原液的配置及保存,各种抗菌药是用蒸馏水或不同pH值的PBS，稀释至所需浓度，抗生素过滤除菌(化学合成药高压灭菌)，分装备用。,菌液的配制,挑取大肠杆菌标准菌ATCC25922，放入LB营养肉汤37培养1624h，第2天在麦康凯琼脂平板上划线培养1624h，第3天挑单个菌落接种于2mLLB营养肉汤中，温箱培养1624h，制得供试菌液。,2.细菌含量的测定（活菌平板计数法）,用生理盐水将上述菌液作10倍梯度稀释（0.5mL菌液4.5mL生理盐水）,菌液,4.5ml,4.5ml,4.5ml,4.5ml,4.5ml,4.5ml,4.5ml,稀释比例：10-110-210-310-410-510-610-7,取105、106、107三个滴度的菌液各0.1mL滴在琼脂平板中央，轻轻拍打，使其均匀摊开，不要接触平皿边缘，每个梯度做2个平板，放入37恒温培养箱培养1624h。计算菌落数，挑选平板上生长30300个菌落的计数，数两个平板取其平均值为细菌浓度，要求生长浊度达9108/mL。计算示例：106两个平板上生长菌落数分别为68、70个，平均69个/0.1mL，则1mL含活菌数690106/mL，即6.9108/mL。将供试菌液
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