血液学一般检查.ppt

实验一,实验一血液学一般检查,内容血红蛋白测定（氰化高铁血红蛋白测定法）白细胞计数（WhiteBloodCellCount）,实验一,1.血红蛋白测定-氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法,该法具有操作简便，结果稳定可靠，试剂容易保存等优点，被国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐为参考方法，为我国测定血红蛋白首选方法。,血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白被高铁氰化钾K3Fe(CN)6氧化为高铁血红蛋白（Hi），后者与氰离子（CN-）结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。在特定波长（540nm）和光径（比色杯内径1.0cm）条件下具有一定的吸光度，通过用标准液制备的标准曲线，可求出血红蛋白浓度来。,原理,HbHi+CN-HiCN,K3Fe(CN)6,试剂血红蛋白转化液（文齐氏液）：氰化钾（KCN）0.05g高铁氰化钾K3Fe(CN)60.20g无水磷酸二氢钾（KH2PO4）0.14gTritonX1001.0ml蒸馏水加至1000ml,器材1.血红蛋白吸管，5ml吸管2.大试管3.722分光光度计,上述试剂为淡黄色溶液，贮存于棕色瓶中室温保存，其中非离子表面活性剂可加速溶血，缩短转化时间，防止因血浆蛋白改变引起的混浊,标本来源EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血,实验一,操作,1.取血红蛋白转化液5.0ml加入大试管中。,2.用血红蛋白吸管吸取全血20l，轻拭管尖外余血，并准确调节血柱液面至20l。加入到准备好的血红蛋白转化液底部，并用上清液吸、吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液，充分混匀，静置5分钟。,3.于722分光光度计上以转化液为空白进行比色测定，波长540nm,光径1.0cm。,4.通过标准曲线间接求出血液中Hb的含量,实验一,将HiCN标准液倍比稀释（如50g/L、100g/L、150g/L、200g/L）后,在所用的分光光度计上540nm处，光径1.0cm，以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以标准品血红蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线,或求出换算常数K(K=Hb/A)。则通过待测标本吸光度值查标准曲线或用K值计算血红蛋白浓度（Hb=KA）。,附HiCN标准曲线绘制和K值计算：,实验一,参考值成年男性：（120160）g/L成年女性：（110150）g/L新生儿：（170200）g/L注意事项1.试剂因含氰化钾，虽浓度较低，但在配制、保存、使用中需妥善。2.标准曲线或K值，应定期检查、校准。3.722分光光度计的使用：转化液作空白(可共用)。透射比模式，开盖调0，闭盖调100；吸光度模式比色。,报告方式吸光度：Hb：_g/L（小数点后留一位）,实验一,2.白细胞计数,原理血液用白细胞稀释液（2%醋酸溶液）稀释，使红细胞溶解，白细胞形态更加清晰后，充入血细胞计数池，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数量,实验一,1.血细胞计数板，盖玻片2.血红蛋白吸管（具有10l及20l刻度）3.1ml吸管，小试管，玻棒4.光学显微镜,器材,实验一,试剂白细胞稀释液：2%冰醋酸标本来源EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血,实验一,1.加稀释液：取白细胞稀释液0.38ml于一干净小试管中。2.加血：用血红蛋白吸管取全血20l，轻拭管尖外余血，准确调节血液液面至20l处，将血红蛋白吸管插入白细胞稀释液中（即小试管底部），迅速将血液放出，并用上清液吸吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液。3.溶血：混匀后室温静置，待液体变为棕褐色，即红细胞被完全破坏。4.冲池：用一次性吸管取适量混匀的白细胞悬液充入血细胞计数池（一次充好，液体不可外溢，不可有气泡，否则擦净重充），室温水平静置23分钟，待细胞下沉后显微镜下计数。,操作,实验一,5.计数：将血细胞计数盘放在显微镜载物台上，低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数（压线细胞：数上不数下，数左不数右）6.计算：白细胞/L=(N/4)1010620=(N/20)109,式中N表示四个大方格内数得的白细胞总数。/4:为平均每个大方格（0.1mm3）稀释液内WBC数。10：将一个大方格白细胞数换算为1l内的白细胞数。106：1L=106l。20：为血液稀释倍数。,白,白,白,白,白细胞计数区,实验一,实验一,实验一,实验一,白细胞计数操作步骤,实验一,报告方式左上：右上：左下：右下：换算公式：白细胞数（WBC）：_109/L参考值成人：（410）109/L新生儿：（1520）109/L,实验一,1、EDTA-K2抗凝全血使用前必须混匀。2、计数盘和盖玻片在使用前需用纱布擦拭干净。3、血红蛋白吸管内腔要干燥，否则会影响吸血量。4、在稀释液转为棕褐色后方能充池计数，否则因RBC残存而干扰计数使结果偏高。5、显微镜调节：光镜光圈调暗，光源可调亮，微调计数。6、用好的器材及时清洗（Hb吸管、计数盘、盖玻片、吸管）,注意事项,实验一,实验报告（注意学号，报告下次实验交）,1原理（0.5分）2简单步骤（0.5分）3实验结果（2分）原始数据、最后报告各1分4分析讨