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文档简介

利用16SrDNA鉴定细菌的种属,1.什么是16SrDNA？,16SrRNA为原核生物核糖体RNA的一个亚基，16SrDNA就是编码该亚基的基因。原核生物的rRNA含有3种类型：23S、16S、5SrRNA，它们分别含有2900、1540和120个核苷酸。2.用16SrDNA进行细菌鉴定的原因16SrDNA在原核生物中普遍存在。16SrDNA的相对分子量大小适中，约1500bp，便于序列分析。在16SrRNA分子中，既含有高度保守的序列区域，又有中度保守和高度变化的序列区域，因而它适用于进化距离不同的各类生物亲缘关系的研究。bp=basepair,图16SrDNA基因组成（灰色为保守区，绿色为可变区）,16SrDNA基因全长1542bp，由9个可变区和10个保守区组成。其中保守区反映了生物物种间的亲缘关系，而可变区则表明物种间的差异，且变异程度与细菌的系统发育密切相关。,DNA的提取,挑取单菌落,然后置于装有100LPrepManUltra的离心管中,涡旋震荡混匀30s左右，然后100水浴10min后，以离心机最大转速离心3min，取10L上清液与490LddH2O（即稀释50倍），混匀作为下步PCR的模板DNA。提取的DNA于-20保存。检测：核酸蛋白仪/琼脂糖凝胶电泳,1525R5AAGGAGGTGWTCCARCC3,PCR反应条件,试剂使用量（20L体系）模板DNA（10ng100ng）2LTaq酶(5U/L)0.2L10TaqBuffer(Mg2+)2LdNTPs(2.5mM)1L引物F(10M)0.5L引物R(10M)0.5LddH2O13.8L,1min30s,判断16SrDNA序列扩增是否成功:经琼脂糖凝胶电泳在1500bp附近出现条带，说明16srD
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