临床常用免疫学检查.ppt

临床常用免疫学检查,免疫学（immunology）是研究机体自我识别和对抗原性异物排斥反应的一门科学。由免疫组织、免疫细胞、免疫分子组成。包括细胞免疫和体液免疫1.免疫防御超敏反应、免疫缺陷病2.免疫稳定自身免疫病3.免疫监视病毒感染、肿瘤发生临床免疫学检查常用于感染性疾病、自身免疫性疾病、变态反应性疾病、免疫缺陷病、肿瘤等疾病诊断与疗效监测。,免疫功能检查,1,感染免疫检查,2,肿瘤标志物检查,3,自身抗体检查,4,Contents,查一查自己的免疫力,我们中有些人在流感袭来时很容易就传染上了，而另一些人对任何感染都有较强的抵抗力。我们通常用免疫系统的强弱来解释这种现象。这项测试有助于我们了解自己的免疫力的强弱程度，从而决定有没有必要求助于免疫学专家。用“是”或“否”回答下列问题：,1.你能经常从事体育运动吗？2.冬天，你常常冻伤手脚吗？3.你从不为琐碎小事而心绪不佳，哪怕一点点时间也能用于休息，是吗？7.你是个善于交际的人，有许多朋友，是吗？16.每天你喝足够多的水，是吗？17.你的工作很紧张，家务活也很繁重，是吗？18.你多数时间是在温暖的房间里度过的，是吗？,现在，统计分数：如果1、3、6、7、8、9、11、13、16题的回答是“是”，得1分；如果2、4、5、10、12、14、15、17、18题的回答是“否”，也得1分。16分：可以说，你的免疫力为零，因此，经常得病。你需要免疫学专家的帮助，否则无法增强抵抗力。712分：你的防卫系统有些问题，应尽快改变生活方式和饮食习惯，多呼吸新鲜空气，多吃富含维生素的食物，并补充多种维生素，每天早晨洗一个水温反差大的澡，这些小措施对增强免疫力十分有益。1318分：你的免疫力很强，疾病绕着你走，即使有点不舒服，也容易恢复。你关心自己的健康，精力充沛，很好！,酶原活性糖蛋白参与灭活病原体的免疫反应也可破坏自身组织或自身细胞造成免疫损伤,根据各类免疫细胞（T、B、NK）膜表面所表达的独特标志及特殊功能，在体内外测定这部分细胞的数量和功能,1.免疫功能检查P411,IgG：最多、占70%80%抗体活性IgA：血清型和分泌型两种IgM：有效的凝聚和溶解细胞的因子IgD：功能尚不完全清楚IgE：与变态反应有关,免疫电泳原理,血清M蛋白测定（Mprotein，monoclonalimmunoglobulins）,M蛋白是一种单克隆B淋巴细胞（浆细胞）异常增殖时产生的免疫球蛋白分子或其片段（如轻链、重链等），它们与正常免疫球蛋白相同结构和电泳迁移速度，但不具有抗体活性。蛋白电泳法，免疫电泳法：阴性1.多发性骨髓瘤（MM）2.巨球蛋白血症3.重链病（HCDs）4.半分子病5.恶性淋巴瘤6.良性M蛋白血症,Waldenstromsmacroglobulinemia:MystoryBySteveKirsch,参与灭活病原体的免疫反应，也可破坏自身组织或自身细胞造成免疫损伤,总补体活性CH50测定(非特异性）溶血素（抗体）致敏绵羊红细胞补体溶血总补体活性(1/血清量)稀释倍数,Totalhemolyticcomplement(CH50),血清中补体代谢速度非常快，在病理情况下更会出现其他蛋白质所没有的急剧变化。因此，临床检测血中补体时，要在不同时期反复多次进行才能更有助于诊断和治疗。,甲型肝炎一、抗原检测:HAVAg在发病前两周从粪便中排出，提示急性感染二、HAV-RNA早期诊断三、IgM抗体（ELISA法测定）：早期感染，现实感染，诊断意义IgG抗体（ELISA法）：感染恢复期，既往感染，流行病学意义,地球上，对人类健康威胁最大的病毒是什么？,根据世界卫生组织截止到2005年的统计数据，全球乙型肝炎病毒感染者总数超过20亿，其中3.5亿人会成为慢性乙肝患者。亚洲是乙肝病毒肆虐的重灾区，全球2/3以上的慢性乙肝患者生活在亚洲。根据1992年全国乙肝血清流行病学调查的结果，中国的乙肝病毒携带者近1.3亿人，平均每10个人中有一个，感染率更高达57.6%。,乙型肝炎1.最常用的检测项目（两对半-见表）测定方法：ELISA、放射免疫法（RIA）、发光免疫法2.乙肝DNA定量PCR检测：病毒复制的指标正常：PCR(-)或10-3Copy/ml拉米夫定(贺普丁）、干扰素治疗效果的主要指标。,Anti-HBc或抗HBc：反映肝细胞受到HBV侵害的一种指标，主要包括IgM、IgG、IgA。,Anti-HBe或抗HBe：急性感染的恢复期，持续时间较长。意味着HBV部分被清除或抑制、复制减少，传染性降低。,HBeAg：有乙型肝炎，是病毒复制活跃、传染性强的指标；持续阳性易转变为慢性肝炎；可垂直传播,Anti-HBs或抗HBs：中和抗体,HBsAg（+）表示肝中有HBV。见于：乙型肝炎潜伏期和急性期；慢性迁延性肝炎，慢性活动性肝炎，肝硬化，肝癌；慢性HBsAg携带者。可垂直传播,抗HBcIgM：最早出现的特异性抗体，是诊断急乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，提示病人的血液有强传染性。也见于慢性活动性肝炎,丙肝病毒RNA病毒输血传播多引起慢性肝炎1.RNA-RT-PCR（方法学评价优）2.抗HCV-IgM近期、急性感染指标，传染性强3.抗HCV-IgG感染史其它戊肝与甲肝类似；丁肝为RNA缺陷病毒，需有HBV的存在方能复制和传播,血清抗链球菌溶血素“O”测定,参考值：乳胶凝集法（LAT）免疫比浊法（定量）：500U意义：增高常见于A组溶血链球菌感染相关疾病，如扁桃腺炎、感染性心内膜炎、风湿热、链球菌感染后肾小球肾炎等。ASO在A组溶血链球菌感染后1周开始升高，46周达高峰，可持续几个月或几年,不一定是近期感染的指标。假阳性与假阴性,肥达氏反应（Widal）：原理：是利用伤寒和副伤寒沙门菌菌液为抗原，检测病人血清中有无相应抗体的一种凝集试验。伤寒第三周后阳性率达80%，初期阴性方法：直接凝集法H1:160鞭毛抗原预防接种记忆反应O1:80感染早期交叉反应甲乙丙1:80副伤寒,O、H抗原血清型多变，检测结果有较大的局限性。,梅毒螺旋体感染检测筛选试验：RPR快速血浆反应素试验确诊试验：TPHA梅毒螺旋体血凝试验HIV感染检测筛选试验：ELISA法测HIV抗体确诊试验：蛋白印迹试验RT-PCR测HIV-RNA,肿瘤标志物（tumormarker)是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。这类物质可反映细胞恶变各阶段表型及基因特征性。,3、肿瘤标志物检测,应用:1.肿瘤患者的辅助诊断、疗效判断、病情检测、预后评估、评价手术、放疗、化疗是否有效。反映手术是否根除，判断肿瘤有无复发和转移2.肿瘤高危人群的定期筛查3.肿瘤分子流行病学调查及肿瘤标志物生物学研究,临床常用肿瘤标志物,1.AFP（甲胎蛋白）：方法：RIAELISA化学发光参考值：300g/L2病毒性肝炎和肝硬化时也升高但一般不超过20-200g/L3妊娠时也升高，但一般不超过300g/L4生殖腺胚胎癌、胃癌、胰腺癌可升高。,AFP鉴别诊断,良性肝病阳性率:急性肝炎31%52%慢性肝炎15%58%肝硬化11%47%,良性肝病患者血清AFP有不同程度升高，但大多1000ng/ml,其升高与肝细胞坏死和再生有关。一般来说，良性肝病AFP升高是暂时性的，大多在23周后下降或处于波动状态，常有转氨酶的升高，常在ALT升高后516天AFP升高，而恶性肿瘤则进行性升高，早期常无转氨酶的升高。因此动态观察既是鉴别良、恶性肝病的一种手段，又是早期诊断肝癌的方法之一。,2.CEA（癌胚抗原）：方法：RIA；ELISA；化学发光参考值：,Righthandof65-year-oldwoman.Notedistalgangreneofthreedigitsandseverelyischemicthumbandindexfinger.,18年的向日葵,牙齿好像棉花糖心在跳没脉搏白净脸变成“面具脸”,4、自身免疫检测,由异常免疫反应引起的慢性退行性或炎症性疾病。不同的自身免疫性疾病对机体的影响各有不同。同种疾病对不同个体的组织和器官的影响程度不尽相同。女性和老年人居多。本病大多见于年轻女性，我国的发病率约为十万分之七十五。炎症是许多此类疾病的常见症状，其他症状包括：眩晕、疲劳、不适及低烧。器官特异性自身免疫性疾病可侵害靶器官或组织，导致功能受损。免疫测定（通常为酶免疫测定）、间接免疫荧光显微技术(IFA)、免疫印迹及免疫沉淀。,类风湿因子（rheumatoidfactor,RF）:变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿关节炎患者的血清和关节液内。RF可分为IgM型、IgG型、IgA型等，用胶乳凝集法测出的主要是IgM型，用ELISA法可进一步检出其它型方法：胶乳凝集法；RIA；ELISA参考值：阴性30U/L临床意义：类风湿关节炎（阳性率70%）其它自身免疫性疾病（SLE、SS）慢性活动性肝炎、某些感染性疾病(传染性单核细胞增多症、结核病感染性心内膜炎等）,类风湿关节炎早期,类风湿关节炎晚期,类风湿关节炎中期,(二)按抗不同靶抗原成分抗体分类,抗非组蛋白抗体,抗Sm抗体抗RNP抗体抗SSA抗体抗SSB抗体抗Scl70抗体抗Jo1抗体,抗其它细胞成分抗体,抗核仁抗体,抗着丝点抗体,抗DNA抗体,ANAS分类,抗组蛋白抗体,抗ENA抗体,抗单链DNA抗体抗双链DNA抗体,ANA阳性最多见于未治疗的SLE，阳性率达80100%ANA阳性是结缔组织病的标志其它疾病,如原发性胆汁性肝硬化、慢性肝病、慢性感染、肿瘤等也可出现阳性,抗ds-DNA抗体：靶抗原是细胞核中DNA的双螺旋结构SLE的高特异性试验，但敏感性较低，活动期SLE阳性率70-90其它风湿病中抗ds-DNA抗体也可阳性,可提取性核抗原多肽抗体谱（extractableantinuclearantigen，ENA）由多种相对分子质量不同的多肽构成，利用免疫印迹试验可对这些抗原的自身抗体进行检测包括抗Sm、核糖体、Scl70、Jo1、SSB、SSA和RNP等的抗体,抗核抗体（antinuclearantibody,ANA）:血清中存在的一类和自身组织细胞的细胞核发生反应的自身抗体的总称。无器官和种属特异性。,抗Sm抗体：SLE的特异性标志之一，抗dsDNA和抗Sm抗体同时检测，可提高SLE的诊断率。抗SSA、SSB抗体干燥综合征抗RNP抗体-混合性结缔组织病,EUROIMMUN,ANAs的荧光染色型别(1)均质型：核质染色均匀一致，此型与抗组蛋白抗体和抗DNA抗体有关(见图1)；(2)斑点型：核质染色呈斑点状，核膜存在，此型多与可溶性核抗原(ENA)抗体有关(见图2)；(3)核仁型：仅核仁着染荧光，与46SRNA抗体相关，在硬皮病中较多见(见图3)；(4)核周(核膜)型：荧光包绕在核膜周围，多与抗双链DNA抗体有关；(5)着丝点型：处于分裂时相的Hep-2细胞为底物可出现依着丝点散在排列的特殊点状圆形(见图4)，与斑点型区别的重要之处在于前者