实验三细菌革兰氏染色(Gram stain)_第1页
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实验三细菌的革兰氏染色（Gramstain）,一、目的要求,了解革兰氏染色的原理；学习并掌握革兰氏染色的方法。,二、基本原理,革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。革兰氏染色法（Gramstain）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。,肽聚糖(peptidoglycan),革兰阳性菌肽聚糖聚糖骨架、四肽侧链、五肽交联桥,革兰阴性菌肽聚糖聚糖骨架、四肽侧链,肽聚糖(peptidoglycan),革兰阳性菌细胞壁特殊组分,革兰阴性菌细胞壁特殊组分,革兰阳性菌与阴性菌细胞壁结构比较,革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料（basicdye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorisingagent）和复染液（counterstain）。碱性染料初染液结晶紫（crystalviolet）媒染剂碘（iodine）脱色剂95的酒精（ethanol）复染液番红,三、实验器材,大肠杆菌，枯草芽孢杆菌、未知菌；草酸铵结晶紫，番水水溶液，碘液，95%乙醇，载玻片，显微镜等。,四、实验步骤,1涂片：将培养24小时的大肠杆菌和未知菌，培养12-18小时的枯草芽孢杆球菌、分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。固定时通过火焰12次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。,2染色,（1）初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗。（2）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。（3）脱色：将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约2030秒钟，立即用水冲净酒精。（4）复染：用番红液染12分钟，水洗。,（5）干燥和镜检：干燥后，置油镜观察。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。（6）同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。,大肠杆菌革兰氏染色,1结果列表比较大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和未知菌的染色反应，并判断它们分别是G-或G+.2思考题（1）作革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？其染色成败的
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