药物分析实验讲义.ppt

实验一维生素B1片的质量测定,制药科学与技术学院专业实验室,.实验目的及要求,1.学会查阅中国药典（二部）及相关资料。2.熟悉片剂的前处理方法。3.能用紫外-可见分光光度法准确测定维生素B1片的含量。掌握测定原理、操作方法及含量计算。4.能正确填写相关检验原始记录及检验报告单。,2.理化性质,嘧啶亚甲基噻唑连成的季铵盐化合物,维生素B1，又称硫胺。分子式C12H17ClN4OS。它是人体必需的13种维生素之一，是一种水溶性维生素，属于维生素B族，为无色结晶体，溶于水，在酸性溶液中很稳定，在碱性溶液中不稳定，易被氧化和受热破坏。,硫色素反应,氯化物,紫外吸收,维生素B1广泛存在于天然食物中，含量较丰富的有：动物肝脏脏(肝、心及肾)、肉类、豆类、花生及精细加工的谷物类。由于人体不能自行合成维生素B1，必须从食物中摄取。因此，食品中的维生素B1测定对指导食品加工、保存、膳食营养配比等都有一定的意义。,3.来源及测定意义,HCl（鉴别）,二个碱性基团,可与多数生物碱沉淀剂,硅钨酸（白色沉淀）苦酮酸（扇形白色结晶）K2HgI4（淡黄色沉淀）I2（红色沉淀）,生成组成恒定的沉淀可用于鉴别和含量测定。,可用非水碱量法进行含量测定。,硫化铅反应硫色素反应,样品,NaOH,开环,-H2O,KFe(CN)6,合环,O,硫色素（溶于正丁醇中蓝色荧光），用于鉴别和含量测定。,Na2S,Pb(Ac)2,PbS,-2H,NaOH,共热,4.鉴别实验,5.维生素B1的测定方法,HPLC法,维生素B1衍生化后导入高效液相色谱仪，经柱分离通荧光检测器测定。本法适用于体系复杂的样品，干扰严重时采用此法。,荧光法,用碱性铁氰化钾溶液将其氧化成硫色素，在紫外线下，硫色素发出荧光，再给定的条件下以及没有其他物质干扰时，此荧光之强度与硫色素量成正比即与溶液中维生素B1量成正比。,246nm（定量）,分光光度法,吸收系数法：按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定波长处测定其吸收度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算供试品溶液的浓度。使用吸收系数法测定时，对仪器需进行严格的校正和检定，保证吸收度测定的准确性。,=421,（每片）相当于标示量的%=,A=ECL,max=246nm,规格g/片,g,W,E,A,%,cm,D,100,1,1,6.实验内容,1、鉴别实验,2、定量分析,取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素B125mg），置100ml容量瓶中，加盐酸溶液（91000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml容量瓶中，再加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OSHCl的吸收系数（E1%1cm）为421计算。,实验二替硝唑氯化钠注射液质量分析,制药科学与技术学院专业实验室,.实验目的及要求,1.掌握中国药典中有关物质含量分析方法2.熟悉注射剂分析方法。3.能用HPLC准确测定替硝唑注射液的含量，掌握HPLC定量定性分析方法。4.能正确填写相关检验原始记录及检验报告单。,2.结构与性质,检测依据中国药典2010年版二部P921；本品为替硝唑与氯化钠的灭菌水溶液，无色或几乎无色的澄明液体。含替硝唑(C8H13N3O4S)与氯化钠均应为标示量的95.0%-105.0%。,3.高效液相色谱分析,高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。,进样,输液泵,柱子,检测器,信号收集,面积归一化法,面积归一化法指按各品种项下的规定，配制供试品溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图。测量各峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积占总峰积的百分率。用于杂质检查时，由于峰面积归一化法测定误差大，因此，通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。除另有规定外，一般不宜用于微量杂质的检查。,4.实验内容,一、供试品溶液制备,10ml100ml(400g/1ml)10ml100ml(40g/1ml）10ml100ml（4g/1ml）,已有4000g/ml,二、鉴别实验,取40g/1ml溶液，照分光光度法测定，在317nm与229nm的波长处有最大吸收，在263nm的波长处有最小吸收。,三、相关物质分析,取400g/ml作为供试品溶液；取4g/m溶液，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件进行测定，取对照溶液20l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%；再取供试品溶液及对照溶液各20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如显示杂质峰，各杂质峰峰面积的和，不得大于对照溶液的主峰面积。,四、含量测定,测定法：取40ug/ml中溶液20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积；另取经五氧化二磷减压干燥至恒重的替硝唑对照品，加水溶解并定量稀释成每1ml中含40ug的溶液，同法测得峰面积。,色谱条件：甲醇-水-冰醋酸（20:80:0.2）为流动相；检测波长310nm。,含替硝唑标示量=,CX,C,=,AXCR,CAR,规定(95.0%105.0%)。,实验三复方丹参滴丸中冰片的含量分析,制药科学与技术学院专业实验室,.实验目的及要求,1.掌握滴丸剂的处理分析方法。2.学会安捷伦6890N使用方法。3.能用利用内标法对药品定量分析。4.能正确填写相关检验原始记录及检验报告单。,2.实验介绍,复方丹参滴丸是在现代高科技条件下提取丹参、三七的有效成分再加入适量冰片而制成的新型纯中药滴丸剂，具有剂量小、服用方便、溶出速度快、起效迅速、可直接经粘膜吸收入血、生物利用度高、疗效高及无胃肠刺激、无明显毒副作用的特点。复方丹参滴丸的主要成分为丹参酸（danshensu,Da）、原儿茶醛（protocatechuicaldehyde,Pra）和丹酚酸B（salvianolicacidB,SalB）以及冰片等。合成冰片为龙脑和异龙脑的混合物，具挥发性。因此本实验采用GC法，对冰片中龙脑进行测定，并用内标法计算含量。,龙脑,异龙脑,3.气相色谱分析,GC主要利用物质的沸点、极性、及所吸附性质的差异来实现混合物的分离，待测分析样品在汽化后被惰性气体带入色谱柱，柱内含有液体或固体固定相，由于样品各组分的沸点、极性或吸附性能不同，每组分都倾向于在流动相和固定相形成分配或吸附平衡，但由于载气是流动的，这种平衡是很难建立起来的，各组分在运动中进行反复多次的分配或吸附/解吸，使组分依次流出柱，从而进入检测器转变为电信号，电信号与组分含量成正比并被记录，以色谱图形式表示。,电子部件,PC,检测器,稳压器,分子筛脱水管/净化装置,固定限流器,流量控制器,空气,载气,色谱柱,进样口,测定法：,本实验采用内标法是将一定重量的纯物质作为内标物加到一定量的被分析样品混合物中，然后对含有内标物的样品进行色谱分析，分别测定内标物和待测组分的峰面积（或峰高）及相对校正因子，按下列公式和方法即可求出被测组分在样品中的百分含量：,注：As为内标物质的峰面积或峰高；AR为对照品的峰面积或峰高；Cs为内标物质的浓度；CR为对照品的浓度；Ax为供试品（或其杂质）峰面积或峰高；Cx为供试品（或其杂质）的浓度,4.实验内容,一、气相色谱分析条件,色谱条件：以交联苯基甲基聚硅氧烷为固定相(HP5)；气化室温度为200；柱温为110；载气为氮气；分流比10:1；检测器为氢火焰离子化检测器，温度为200。理论塔板数按龙脑峰计算应不低于1900。,二、校正因子计算,取苯乙酮适量，精密称定，加正己烷制成每1ml含5mg的溶液，作为内标溶液。另取龙脑对照品适量，精密称定，置25ml量瓶中，精密加内标溶液1ml，加入正己烷稀释至刻度，摇匀，吸取0.3l，注入气相色谱仪，计算校正因子。,三、供试品溶液制备,取本品25丸，置具塞棕色瓶中，加水10ml，密塞，超声处理（功率250W，频率50kHz）5min，