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2020/5/11,实验十九,根瘤或土壤固氮酶活性的测定,根瘤或土壤固氮酶活性的测定,目的要求实验材料实验程序思考题,目的要求,初步掌握根瘤或土壤样品中固氮酶活性测定的方法,实验材料,豆科植物根瘤或土壤样品。102G型气相色谱仪/标准乙烯灵敏度为103，衰减为1/128。待测样品中乙烯测定：灵敏度为104，衰减为1/1。（但可根据固氮酶活性，改变灵敏度和衰减）。乙炔气体。100mL带有异丁基胶塞的血清瓶。1mL、10mL（密封性能好的）注射器，100mL微量注射器,实验程序,根瘤固氮活性的测定土壤固氮酶活性的测定乙烯含量的计算,实验程序（根瘤固氮活性的测定）,从田间挖取豆科植物植株，剪掉地上部分，根部洗净，稍干，将结瘤的根系部分分别剪开，主根上的瘤可直接剥下，侧根上的瘤要带少量根剪断，将鲜根瘤称重，收集到100mL血清瓶中，立即用异丁基胶塞密封，然后按瓶子中气相体积用注射器从瓶中抽出510%的空气，再用注射器注入等体积的C2H2，280C保温2h。取出瓶子，用注射器吸出100uL的混合气体，用气相色谱仪以外标法测定其固氮酶活性。,实验程序（土壤固氮酶活性的测定）,取田间土样15g于100mL血清瓶中，加入0.1mole/L葡萄糖液2mL，摇匀，塞上异丁基胶塞，加铝盖密封。用注射器从瓶中抽出5mL乙炔气体，280C培养2d。培养结束后，用1mL注射器从瓶中吸出0.5mL气样，用气相色谱仪测定其固氮酶活性。,实验程序（乙烯含量计算）,因乙烯峰高与气体中乙烯含量成正比，故可用外标法来测定待测样品中乙烯的量。,由乙烯含量的百分比，再根据血清凭中气相体积计算mmoles数：,固氮酶活性用形成nmoles/mg瘤鲜重或g干土/min表示。,X100,思考题,固氮酶活性测定的原理是什么？为什么测定时要用带异丁基胶塞密封的
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