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实验二细菌革兰氏染色,一、实验目的,学习微生物制片、染色的基本技术掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术进一步观察细菌的基本形态,C.Gram（革兰）于1884年发明的一种鉴别不同类型细菌的染色方法。,二、实验原理,革兰氏染色,1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染,2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。,3、用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细胞呈无色。,4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对涂片进行复染。例如沙黄，它使原来无色的革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革兰氏阳性细菌继续保持深紫色,三、实验材料1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S）2、染料：结晶紫、复红、碘液等3、材料：95%酒精等,涂片风干固定初染水洗媒染水洗脱色水洗复染水洗干燥镜检,四、实验方法,Smearpreparation,Heatfixing,crystalvioletstainwashwithwater,Staining,CounterstainwithSafranin,注意事项：,（1）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀，固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。（2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱色时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足，革兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。（3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。（4）设定阴性和阳性对照，确保实验的可靠性。,五、思考题,1、讲述革兰氏染色的原理并指出E.C和B.S分别属于革兰氏阳性或阴性？2、观察细菌为什么要染色？为什么细菌染色多采用碱性染料？3、做革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？革兰氏染色成败的关键一步
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