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文档简介

IgG抗A(B)测定,安徽省合肥市第一人民医院输血科,一、试验原理二、试剂三、操作步骤四、注意事项五、临床应用,一、试验原理,待检血清,2-me(巯基乙醇),IgM抗体分子裂解,IgG抗体分子不被灭活,保持血清学特性(致敏相应红细胞),IgA抗体分子部分灭活,失去与相应红细胞凝集的作用,三、试剂,0.2mol/L2-巯基乙醇应用液。受检者血清。5%A型和B型红细胞生理盐水悬液(标准红细胞)。抗人球蛋白血清。,四、操作步骤,1、吸取受检者血清0.4ml,加2-me应用液0.4ml,混合,将试管口塞紧,置37水浴中2h(充分破坏IgM类抗体)。2、排列小试管(10mm60mm)两排,每排10支,第一排每管各加生理盐水0.4ml。,3、第1排第1管加2-me处理血清0.4ml,混合,吸出0.6ml,移0.2ml至第2排第1管内,其余0.4ml移入第1排第2管内,混合。以此类推,作倍量稀释至第10管,每管内留有12,14,1:1024不同稀释度的血清各0.2ml。,4、第1排每管各加5%A型红细胞悬液0.2ml,第2排每管各加5%B型红细胞悬液0.2ml,置37水浴温育1h。5、结果观察:如在前几管内发现有红细胞凝集者,是由于高效价IgG抗A(B)或IgA抗A(B)所引起,称为“盐水效价”。,6、其余红细胞未见凝集的试管,再以生理盐水洗涤3次,除去洗涤液,留取压实红细胞。7、每管各加生理盐水2滴,混合。8、每管各取1滴,分别移至另一排小试管中,再各加抗人球蛋白血清1滴,混合。,9、1000r/min离心1min。10、轻轻摇动试管,观察结果,红细胞凝集的最高稀释度的倒数即为IgG抗A或抗B效价。,五、注意事项,加入2-me后应塞紧盖子,防止其挥发影响而试验结果。置于37水浴箱应水浴2小时。作倍量稀释时应充分混匀血清,倍量稀释的加样量应准确。,二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)也可用于灭活IgM抗体,以测定IgG抗体。DTT制备方法:0.01mol/LDTT(0.77gDTT溶于500ml等渗盐水)与等量受检者血清混合,置37水浴30min,再以此处理血清进行试验。DTT的优缺点:无恶臭味,反应快速,但对强抗体灭活效果较差。,六、临床应用,常应用于ABO血型的IgG抗A或抗B效价的测定,如A

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