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文档简介
生物质谱室生命科学研究中心1062室62731128,蛋白质组样品污染,污染来源角蛋白:皮肤,毛发,衣服,灰尘PEG:塑料试剂瓶,离心管,保鲜膜和PE塑料手套(PEG是塑料加工中的“润滑油”,国产离心管PEG残留可能较多)表面活性剂:蛋白提取液,清洗玻璃试剂瓶的残留(SDS,CHAPS,Triton,Tweens,ND-40),影响范围角蛋白:角蛋白质谱信号压制样品蛋白质谱信号,引起低丰度蛋白信号丢失。导致色谱柱污染和超载。PEG和表面活性剂:抑制多肽电离,降低样品信号强度,驻留色谱柱,降低分离效率。,角蛋白和PEG:污染SDS-PAGE胶和蛋白溶液表面活性剂:污染蛋白溶液,蛋白质组样品污染的影响,角蛋白污染无法根除,可通过如下方法缓解交叉污染:专用,分开储存的优质离心管环境污染:洁净的实验室空间,减少灰尘和空气流动接触污染:洁净的乳胶手套和实验服表面活性剂和PEG:使用超滤管(10kDa)去除,样品污染解决方法,4,样品污染问题,污染较少的SDS-PAGE样品酶解后的TIC图,严重PEG污染的的SDS-PAGE样品酶解后的TIC图,PEG污染信号,相对污染较少的SDS-PAGE样品酶解后的质谱图,严重PEG污染的的SDS-PAGE样品酶解后的质谱图,PEG污染信号,污染较少的SDS-PAGE样品蛋白鉴定结果:目标蛋白得分远高于角蛋白污染,蛋白鉴定结果,角蛋白污染结果,严重角蛋白污染的SDS-PAGE样品蛋白鉴定结果:角蛋白得分远高于目标蛋白,蛋白鉴定结果,角蛋白污染结果,2fmol,约0.1-0.2ng蛋白样品就能实现较可靠鉴定不必一味追
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