




已阅读5页,还剩23页未读, 继续免费阅读
版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
.,核技术:能量的放大,计算机芯片:信息的集成,20世纪自然科学的两大成就,.,PCR技术:生命信息的放大,基因芯片:生命信息的集成,20世纪生命科学的两大成就,.,PCR技术,高考专题复习,.,目的基因的检测与鉴定,基因工程的基本操作程序的步骤:,目的基因的获取,基因表达载体的构建,将目的基因导入受体细胞,.,一、目的基因的获取,1、目的基因概念:主要指的是编码蛋白质的结构基因。也可以是一些具有调控作用的因子。2、目的基因获取方法:从基因文库中获取目的基因利用PCR技术扩增目的基因化学方法直接人工合成,.,从基因文库中获取目的基因,基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA片断,导入到受体菌的群体中,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,称为基因文库。,基因文库,基因组文库,部分基因文库(如cDNA文库),.,基因文库的构建过程,基因组文库,.,基因文库的构建过程,mRNA,单链DNA,双链DNA,cDNA文库,.,.,利用PCR技术扩增目的基因,PCR的全称:聚合酶链式反应PCR的原理:DNA复制PCR技术扩增目的基因的前提条件:要有一段已知的目的基因的核苷酸序列。,.,模板原料引物酶控制温度,利用PCR技术扩增目的基因,目的基因DNA,四种脱氧核苷酸,如单链DNA分子片段,耐热的DNA聚合酶,PCR仪自动调控,PCR的条件:,.,多聚酶链式反应(PolymeraseChainReaction),是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。,1988年美国穆里斯(K.Mullis)等人发明,荣获1993年诺贝尔化学奖。,PCR,.,【基础知识】,一、PCR原理:,DNA复制:,半保留复制;,DNA的热变性原理。,TaqDNA聚合酶,耐高温。,.,【基础知识】,一、PCR原理:,DNA复制:,半保留复制;,需要提供合成模板;不能起始新的DNA链,必须要有引物提供3-OH;合成的方向都是53。,DNA聚合酶,.,【基础知识】,二、PCR条件:,胞内DNA复制与PCR技术的比较:,变性,TaqDNA聚合酶,DNA母链,dNTP,3个温度,Mg2+,缓冲对,连续复制,DNA,.,【基础知识】,二、PCR条件:,引物:,引物设计的原则:,决定PCR扩增产物的特异性和长度。,1.引物长度:,通常为2030bp,尽量降低引物与非扩增区的同源性;,2.引物内部不能存在部分互补序列;,3.两个引物之间不能存在部分互补序列;,.,例题1,【2011年安徽】家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养,可以提取干扰素用于制药。采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应该包含:扩增缓冲液(含Mg2+)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、和。,对干扰素基因特异的DNA引物对,TaqDNA聚合酶,.,例题2,【2011年江苏】请回答基因工程方面的有关问题:(1)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图),请分别说明理由。,第一组:;第二组:。,引物和引物局部发生碱基互补配对而失效,引物自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效,(2)PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶,下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能,这是因为。,DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上,.,【基础知识】,二、PCR条件:,温度:,7075:,9095:,5560:,变性;,复性;,延伸。,【注意】,具体温度与DNA母链及引物中的G、C含量有关。,.,例题3,【2008年江苏】回答下列问题。(1)在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中,使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶,其最主要的特点是。(2)PCR过程中退火(复性)温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列,图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度?。,耐高温,引物对B,.,【基础知识】,三、PCR过程:,预变性;,复性;,延伸;,循环。,变性;,.,【2011年江苏】利用PCR技术扩增目的基因,其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。图中引物中为单链DNA片段,它是子链合成延伸的基础。(1)从理论上推测,第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占比例为。(2)在第轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。,15/16,三,例题4,.,【2011年北京】根据T-DNA的已知序列,利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。如下图,从图中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取作为引物进行扩增,得到的片段将用于获取该基因的全序列信息。,B、C,例题5,.,.,【实验操作】,一、实验仪器:,.,二、设置对照:,【实验操作】,三、程序设计:,避免外源DNA的污染。,.,【实验操作】,微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌;,微量离心管在每吸取一种试剂都必须更换枪头;,所有的成分加入离心管后,盖严盖子,用手指
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 2025年计算机技术与软件专业技术资格(中级)《软件设计师》智慧海洋监测算法设计模拟考核试卷
- 旅游平台短视频内容创意策划考核试卷
- 媒体融合中的媒体融合人才培养计划策略考核试卷
- 模具激光表面处理技术与应用考核试卷
- 解析卷-人教版八年级上册物理物态变化《汽化和液化》专题攻克试题(含答案解析)
- 学生自主学习导学资源的建设及其应用研究
- 基于“计数单位”视角:苏教版教材中数与运算的整体化与一致性探究
- 重难点解析人教版八年级物理上册第5章透镜及其应用-生活中的透镜专项训练试题(详解版)
- 难点解析-人教版八年级物理上册第6章质量与密度-质量综合练习练习题(解析版)
- 2025年建筑节能政策咨询合同协议
- 海上风电基础知识培训课件
- 2025年医疗器械临床试验质量管理规范培训考试试题及答案
- 国际道路应急预案
- 人防指挥所信息化建设方案
- 生死疲劳阅读报告课件
- 胸椎管狭窄症诊疗规范
- 2025年国家管网集团高校毕业生招聘945人正式启动笔试参考题库附带答案详解
- 夜班护士安全培训内容课件
- 新版中华民族共同体概论课件第九讲混一南北与中华民族大统合 (元朝时期)-2025年版
- 2025至2030中国城际出行市场发展前景与趋势预测分析报告
- 征拆工作课件
评论
0/150
提交评论