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实验二叶绿体的分离与观察一、实验目的与原理,原理：采用差速离心分离细胞器组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和离心时间，就能使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。沉降顺序：核线粒体溶酶体与过氧化物酶体内质网与高尔基体核蛋白体叶绿体具有荧光现象，可利用荧光显微镜观察。菠菜叶富含叶绿体，可采用徒手切片观察其形态和分布；,目的：1、通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理与方法；了解差速离心（Differentialcentrifugation）特点与用途.2、了解菠菜叶绿体的形态、分布与数量。,Lowspeed,Highspeed,Differentialcentrifugation,二、实验用品,1.材料：新鲜菠菜2.器材：离心机，研钵，漏斗，试管架，纱布，显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、50ml烧杯2个、10ml刻度离心管20支3.试剂:0.35M氯化钠溶液,三、实验步骤,（一）叶绿体的分离与观察1.取新嫩菠菜叶，洗净檫干、去梗，称20g，分批放入研钵。2.加入0.35mol/L氯化钠溶液，共20ml，研磨，制成匀浆；3.将匀浆用层纱布过滤于烧杯中；4.取过滤液ml，放入5ml离心管中，1000r/min离心min；5.取上清液转入另一5ml离心管中，3000r/min离心min；6.去上清，沉淀即为叶绿体（混有部分细胞核），加入0.35mol/LNaCl溶液100ul悬浮沉淀；7.取含有叶绿体悬液滴于载玻片上，加盖片，普通光镜下观察。荧光显微镜下演示（二）菠菜叶徒手切片观察用刀片将新鲜的嫩菠菜叶切削出一斜面（片）置于载玻片上，加入0.35mol/L氯化钠溶液滴，加盖片轻压，光镜下观察叶绿体在表皮细胞和保卫细胞中的分布。,四、实验结果普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄形，在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒，即基粒
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