发酵工艺综合实验PPT课件

,生命科学技术系发酵工程综合实验,发酵工程教研室,2012.05,实验内容发酵工程实验-酵母的液体发酵发酵工程实验-黑曲霉的固体发酵,-,3,内容,本次实验分酵母的液体发酵和黑曲霉固体发酵两个内容；以实验小组为单位，分发、清洗本小组实验所需要玻璃仪器、结束后清洗回收；配制本小组所需基本试剂。,准备,每班选出1-2个同学跟着实验室毛会丽老师准备实验，配制试剂，活化菌种，准备时间段在第十五周。选出人员后报与毛会丽老师。,分组,每个实验室由班长总负责，分为2大组；每一大组分2小组，自由组合分别作液体、固体发酵实验；分组名单由班长报给辅导老师，向辅导老师留联系方式。,李端晨妍振华红会丽辅导老师联系方式：,发酵工程实验-液体发酵,实验目的实验材料和器材实验内容作业及思考题,实验一酵母的液体摇瓶发酵实验,掌握液体发酵种子液的制备和摇瓶发酵技术及方法掌握总糖和还原糖含量的测定方法掌握常用的比色分析方法的操作技术熟悉酵母菌的微生物学特性及培养方法,一、实验目的,二、实验材料和试剂配制方法,1.实验菌种：酵母菌,菌丝显微照片,平板照片,2.实验仪器：玻璃试管、试管架、吸管（1mL，2mL，10mL）、吸耳球、容量瓶、烧杯、三角瓶（250mL，500mL）、量筒（250mL，500mL，1000mL）、玻璃棒、试纸、塑料漏斗、电炉、接种铲（针）、振荡培养箱、恒温箱、台秤等。,3.培养基,(1)斜面培养基,麦芽汁培养基：10o麦芽汁100mL，琼脂2g(2%)，加热煮沸溶解，蒸发所失体积用水补足，定容至100mL。,PDA培养基：取去皮马铃薯20g，切成小块，加水100mL。微沸30min，用纱布过滤，加2g葡萄糖，加热煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化并补足失水，定容至100mL。,(2)种子培养基：10麦芽汁，pH5.0或葡萄糖10%，玉米浆1%，尿素0.2%，pH5.0。(3)发酵培养基：玉米粉经液化、糖化，折合葡萄糖浓度为10%，玉米浆1%，硫酸铵0.4%，pH5.5。,装量：30mL/250mL,4.试剂的配制,(1)1mg/mL葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖，置于小烧杯中用少量的蒸馏水溶解后，定容转移到100mL的容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱保存备用。（每小组！）,DNS试剂：称取20.00g3,5-二硝基水杨酸溶解于1.5L水，一边不断地搅拌一边逐渐加入32.0gNaOH，让其溶解。然后逐渐加入苯酚10g，亚硫酸钠10g，酒石酸钾钠600g，加热至45，冷却后在2.0L的容量瓶中定容。室温存放在棕色瓶中。（已经配制！）,(3)酚酞指示剂：称取5g酚酞，溶于250mL70%乙醇中。(4)6moL/LHCL:先于1000mL容量瓶中加入约200mL蒸馏水，然后取540mL浓盐酸沿瓶壁缓慢加入，加水定容至1000mL。(5)6moL/LNaOH：称取240gNaOH，溶于800mL蒸馏水中，待散热冷却后，加水定容至1000mL。（每个实验室！）,三、实验内容,摇瓶酵母的接种与培养总糖含量的测定还原糖含量的测定pH值的测定,无菌条件下，从冷藏的产生菌的斜面孢子中，刮取适量孢子涂在PDA斜面上，然后置28-30的恒温箱培养2-3d。,斜面菌种的制备,内容1摇瓶酵母的接种与培养,斜面培养基按照配方种子培养基称量,分装250mL锥形瓶(50mL),加封口膜,121下灭菌30min,冷却备用,种子培养基,置于超净工作台上,种子培养基的制备,PDA酵母斜面刮取2-3环,菌体细胞悬浮液,28摇床140rpm培养2d,摇瓶接种,加入无菌水洗下细胞,移液管吸取孢子液加入摇瓶接种量10%,种子液,种子液制备流程,发酵培养基,发酵培养物,接种量10%,种子液,发酵设置及培养,140rpm28,Ps：每个瓶子设一个平行,发酵培养物,取样时间：0、8、16、24、32、40、48h,测定：pH、总糖含量、还原糖含量,取样和需测定的指标,内容2总糖与还原糖含量的测定,DNS法,取2.5mL发酵上清液，加入装有5mL6moL/LHCL及10mL蒸馏水的50mL的三角瓶中，微沸加热水解30min。待三角瓶冷却后，加入1滴酚酞指示剂，以6moL/LNaOH中和至微红色，将水解液全部收集在50mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为总糖待测液。,总糖的水解和提取,CW定容至25mL,标准曲线的绘制,然后沸水浴5分钟，冷却到室温，于540nm波长处进行测定。,总糖和还原糖的测定,计算公式,还原糖（g/mL）=,总糖（g/mL）=,内容3pH值的测定,将发酵液混匀后，用玻璃棒沾取发酵液，用4.0-5.8或5.5-9.0pH试纸检测，测出发酵液的pH值。,四、作业及思考题,1.观察记录酵母菌细胞液体发酵过程中发酵液的颜色，粘度，菌丝形态以及气味。2.测定酵母菌的简单分批发酵中每次取样中菌体细胞生长量、总糖和还原糖含量和pH值，绘制发酵曲线。,实验二木聚糖酶（XyLanase）固体发酵,实验目的实验原理实验材料和器材实验内容作业及思考题,发酵工程实验-固体发酵,（1）熟悉实验室固体发酵技术（2）观察并记录黑曲霉培养过程中菌种生长变化情况（3）掌握xyLanase酶活力的测定方法,一、实验目的,在畜禽和水产动物肠道内形成较高的粘度的食糜，不易被动物消化。,同时肠道粘度增加导致营养物质在肠道内蓄积，形成富含养分的食糜，使得微生物增殖，损害肠道黏膜正常形态与功能，还可导致腹泻和死亡率的增加。,导致动物采食量下降，妨碍消化液与底物的混合，从而阻止脂肪的消化吸收,抗营养因子,二、实验原理,1.实验菌种：黑曲霉（Aspergillusniger）,2.实验仪器及设备玻璃试管、试管架、吸管（1mL，2mL，10mL）、吸耳球、离心管、容量瓶、烧杯、三角瓶（250mL）、电子分析天平、移液枪、玻璃棒、试纸、塑料漏斗、电炉等。自动灭菌锅、无菌间、超净工作台。振荡培养箱、分光光度计，,三、实验材料,3.试剂配制,1%（W/V）木聚糖底物：称取1.00g木聚糖加入80mL预热至80的蒸馏水中，再加热至沸点，冷却后定容至100mL，4保存备用。（每小组！）,10mg/mL木糖母液：准确称取1.0000g分析纯木糖，用适量蒸馏水溶解，定容到100mL，4保存备用，用时稀释10倍。（每小组！）,每个三角瓶（500mL）麸皮6g，玉米芯4g，以固水比为1:1.2的比例加入自来水，pH自然。121下灭菌30min（装量30ml/500ml）,4.发酵培养基的配制与灭菌,四、实验内容,发酵培养基接种取样及样品处理Xylanase酶活测定,超净工作台上，制备孢子悬液(50mL/250mL)，混匀后取5mL接入三角瓶中，于室温培养48h。,发酵培养基接种,取样,取样：0、24、32、40、48、56、64、72h测定：xyLanase的活力,酶液浸提：采用四分取样法，精确称量样品2g，40用25mL蒸馏水浸提4h，过滤，所得滤液作为待测酶样；,样品处理测定,将试管于沸水浴中沸腾5分钟（样品放入重新沸腾时算起），取出后立即加入蒸馏水10mL混匀，冷却后，在分光光度计540nm比色。以0管调零，标线不设0点。,木糖标准曲线的绘制,待测酶液0.2mL,XyLan底物1.8mL,40预热,精确反应300s,加入DNS试剂3mL,沸水浴5分钟,10mL,540nm比