《各类成分分析》PPT课件

第七章中药各类成分分析,中药各类成分分析,生物碱*黄酮*皂苷*蒽醌挥发油,一、概述二、理化性质*三、供试品溶液制备（提取、净化）*四、鉴别：化学反应、TLC*五、含量测定：总成分、单体成分,中药各类成分分析,1生物碱,一、概述,黄连：小檗碱、巴马汀、药根碱、表小檗碱、黄连碱,马钱子：马钱子碱、士的宁,延胡索：延胡索乙素、延胡索甲素,益母草、苦参、黄柏、贝母、洋金花、川乌,麻黄：麻黄碱、伪麻黄碱,1生物碱,生物碱与兴奋剂,1988年奥运会，卡尔刘易斯，麻黄碱1992年奥运会，巫丹，士的宁1992年奥运会，玛丽乔费尔南德斯，伪麻黄碱1994年世界杯，马拉多纳，麻黄碱2000年奥运会，拉杜坎，麻黄碱,生物碱与毒品,1生物碱,1生物碱,二、理化性质,1、结构：,麻黄碱,小檗碱,C、H、O、N，碱性,1生物碱,二、理化性质,2、溶解性,亲脂性：大多数，在CHCl3中溶解度最大亲水性：少，季铵型,一般都易溶于酸水,1生物碱,二、理化性质,3、沉淀反应,（1）碘化铋钾（BiI3KI）（2）雷氏盐NH4Cr(NH3)2(SCN)4（3）苦味酸,特点：酸性水溶液（苦味酸在中性）沉淀有颜色，常易溶于有机溶剂,干扰：蛋白质、多肽、鞣质,1生物碱,二、理化性质,4、光谱特征,麻黄碱,小檗碱,210nm,225、270、331nm,365nm下有荧光,1生物碱,三、供试品溶液的制备,1、有机溶剂提取法,碱化+CHCl3,例：九分散中士的宁的含量测定,九分散中士的宁的含量测定（10药典）,处方：马钱子粉、麻黄、乳香（制）、没药（制）,1生物碱,四、鉴别,1、化学反应法,例：马钱子散中生物碱成分的鉴别【处方】马钱子地龙取1g加浓氨试液三氯甲烷浸泡滤过滤液蒸干加稀盐酸加碘化铋钾试液黄棕色沉淀,1生物碱,四、鉴别,2、薄层色谱法,（1）展开系统：乙二胺、氨水例：急支糖浆中麻黄碱的鉴别,1生物碱,四、鉴别,2、薄层色谱法,（2）氨蒸气预饱和,例：黄连（黄连上清片）甲苯-异丙醇-EtOAc-MeOH-水（6:1.5:3:1.5:0.3）置氨蒸气饱和的展开缸内展开,1生物碱,（3）对薄层板改性：12%NaOH溶液,四、鉴别,2、薄层色谱法,例：钩藤（天麻钩藤颗粒）1%NaOH硅胶G板甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲醇-浓氨试液（4:5:4:3:0.8）,1生物碱,四、鉴别,2、薄层色谱法,365nm下看荧光例：小檗碱（黄连）,显色：改良碘化铋钾稀碘化铋钾+亚硝酸钠乙醇液例：苦参碱、氧化苦参碱（苦参）茚三酮例：麻黄碱、辛弗林,1生物碱,（一）总生物碱的含量测定,1、化学分析法（1）酸碱滴定法：返滴法例：止喘灵注射液中总生物碱的含量测定（2）重量法例7-2：昆明山海棠片中总生物碱的含量测定,五、含量测定,止喘灵注射液,精密量取10ml加N,【处方】麻黄、洋金花、苦杏仁、连翘,1生物碱,排除干扰：化学分离、柱色谱,2、分光光度法,（一）总生物碱的含量测定,定量方法：标准曲线法对照品比较法吸收系数法,在适当的pH介质中，生物碱盐的阳离子BH+与酸性染料阴离子In定量地结合成有色离子对（BH十In）。BH十十In（BH十In）BH十In,酸性染料比色法,常用酸性染料：溴麝香草酚兰（BTB）、溴甲酚绿,CHCl3、CH2Cl2,关键：pH、酸性染料、有机溶剂,例：小儿宝泰康颗粒中贝母素类总生物碱的含量测定对照品：贝母素甲0.28mg/ml标准曲线：精密量取对照液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml，分别置分液漏斗中，加水至2ml，各加溴甲酚绿溶液2ml，摇匀，再精密加入三氯甲烷10ml，剧烈振摇约2分钟，静置，分取三氯甲烷液，滤过，取续滤液。=411nm，绘制A-C曲线。测定法：取8g，加水30ml，氨试液调pH11，用乙醚振摇提取4次，合并乙醚液，挥干，残渣加0.1M盐酸和水，移至25ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液2ml，置分液漏斗中，照标准曲线，测定A，从标准曲线上读出贝母素甲的量，计算，即得。,B+NH4Cr(NH3)2(SCN)4=BHCr(NH3)2(SCN)4,1、在酸性介质中定量反应2、硫氰酸铬铵本身有颜色，生成的反应物的颜色的吸光度取决于硫氰酸铬铵部分3、反应物不溶于水，易溶于丙酮,测定方法：1、沉淀过滤，溶于丙酮，直接测定A2、滤除沉淀后，测定残存的过量雷氏盐，间接计算,雷氏盐比色法,例：产复康颗粒中益母草总生物碱的含量测定对照液：盐酸水苏碱加0.1M盐酸制成1mg/ml。供试液：取12g，乙醇超声，滤液蒸干，加0.1M盐酸10ml使溶解。测定法：上述两溶液各加活性炭0.5g，水浴加热1min滤过，滤液分别置25ml量瓶，用0.1M盐酸洗涤，洗液并入同一量瓶中；另取0.1M盐酸20ml置另一25ml量瓶中，作为空白溶液。各精密加2%硫氰酸铬铵3ml，加0.1M盐酸稀释至刻度，冰浴放置1h，滤过，取续滤液，以0.1M盐酸为空白，=525nm，用空白溶液的吸光度分别减去对照品与供试品的吸光度，计算，即得。,1生物碱,（二）单体生物碱的含量测定,1、HPLC,离子抑制色谱法：二乙胺、三乙胺,例：浙贝母中贝母甲素和贝母乙素,乙腈-水-二乙胺（70：30：0.03）,此外，也可加入缓冲盐,1生物碱,（二）单体生物碱的含量测定,离子对色谱法：SDS、辛烷基磺酸钠为控制pH常加入缓冲盐,例：牛黄千金散中盐酸小檗碱,乙腈-水（50：50）每100ml含0.34gKH2PO4和0.17gSDS,1、HPLC,1生物碱,（二）单体生物碱的含量测定,2、TLCS,例1：益母草口服液中盐酸水苏碱的含量测定显色，=527nm单波长扫描,例2：万氏牛黄清心丸中黄连盐酸小檗碱的含量测定荧光扫描，激发波长366nm,例3：九分散中马钱子（士的宁）的含量测定荧光淬灭扫描，s=254nm，R=325nm,1生物碱,3、HPCE,【1】高效毛细管电泳法测定复方苦参结肠溶胶囊中氧化苦参碱.中草药，2010，41（5）：725,【2】高效毛细管电泳法测定清胃黄连丸中盐酸小檗碱的含量.中国药业，2011，20（19）：20,（二）单体生物碱的含量测定,2黄酮,一、概述,黄芩：黄芩苷,陈皮、枳实：橙皮苷、新橙皮苷,槐米：芦丁、槲皮素,葛根：葛根素,淫羊藿：淫羊藿苷,化橘红：柚皮苷,银杏叶：山奈酚、芦丁、银杏双黄酮,2黄酮,一、概述,具有广泛活性：抗菌消炎：黄芩苷、木犀草素扩张血管：银杏黄酮、葛根素防治高血压：芦丁、橙皮苷止咳祛痰：杜鹃素、金丝桃苷抗癌：紫檀素、黄柏素,1、化学结构：,二、理化性质,2黄酮,黄酮,黄酮醇,二氢黄酮,异黄酮,二、理化性质,2、酸碱性：显酸性,3、光谱特征可见光：黄色紫外光：I带（桂皮酰）：300400nmII带（苯甲酰）：240280nm,2黄酮,4、溶解度：黄酮苷元：醇、EtOAc、CHCl3、乙醚黄酮苷：醇、水,5、显色反应：盐酸-镁粉反应AlCl3：生成黄色配合物，且有荧光,二、理化性质,2黄酮,2黄酮,三、供试品溶液的制备,提取,苷元：乙酸乙酯、三氯甲烷、乙醚、醇苷：甲醇、乙醇,净化,聚酰胺柱大孔树脂柱,2黄酮,三、供试品溶液的制备,例：HPLC测定强阳保肾丸中淫羊藿苷的含量取强阳保肾丸3g，.提取至已处理好的聚酰胺柱（内径1.5cm，聚酰胺4g，干法装柱，先用50ml乙醇洗，继用150ml水洗）上，先后以纯化水150ml、乙醇70ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干溶解，定容即为供试品溶液。,净化,2黄酮,四、鉴别,（一）化学反应法：盐酸-镁粉反应,例：大山楂丸（10药典）取9g，剪碎，加乙醇40ml，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，加热使溶解，用正丁醇15ml振摇提取，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，滤过。取滤液1ml，加少量镁粉与盐酸23滴，加热4-5min，显橙红色。,2黄酮,四、鉴别,（二）薄层色谱法1、硅胶板：酸性条件下斑点形状好,展开剂：EtOAc-丁酮-甲酸-水（10:1:1:1）苷甲苯-醋酸乙酯-甲酸苷元,显色剂：AlCl3，生成黄色配合物，有荧光,2黄酮,四、鉴别,（二）薄层鉴别,2、聚酰胺展开剂：醇、酸或水,蒲黄,2黄酮,五、含量测定,（一）总黄酮,分光光度法：,显色方法：NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色，max=510nmAlCl3-KAc显色，max=420nm,比色法,对照品：芦丁,例：排石颗粒中总黄酮的含量测定（比色法）【10药典】,对照品：芦丁0.2mg/ml（溶剂为50%甲醇）标准曲线：精密量取对照液1、2、3、4、5ml，分别置10ml量瓶，各加50%乙醇至5ml，加5%NaNO20.3ml，摇匀，放置6min，加10%Al(NO3)30.3ml，摇匀，放置6min，加NaOH试液4ml，加50%乙醇至刻度，摇匀。以相应溶液为空白，在510nm处测定A。测定法：取5g或1g，甲醇回流提取，滤过，取续滤液25ml，加水稀释至50ml。取2ml，置10ml量瓶，加50%乙醇至刻度，摇匀，作为空白。另取2ml，置10ml量瓶，照标准曲线项下方法测A。,41,儿茶素,芦丁,槲皮素（甲）,槲皮素（水）,黄芩苷,黄芩素,香蒲新苷,山奈酚,橙皮苷,原儿茶醛,原儿茶酸,咖啡酸,绿原酸,没食子酸,阿魏酸,2黄酮,（二）单体成分,五、含量测定,固定相：ODS、苯基硅烷键合硅胶,流动相：乙腈-0.5%冰醋酸；乙腈-0.2%磷酸溶液；甲醇-0.1%磷酸,检测器：UVD,RP-HPLC,3蒽醌,一、概述,大黄、决明子、何首乌、虎杖：大黄素、大黄酚、大黄酸,番泻叶：番泻苷,茜草、巴戟天：茜草素类,活性：泻下、抗菌等,1、化学结构,二、理化性质,3蒽醌,蒽醌（大黄素型）,蒽醌（茜草素型）,二、理化性质,2、酸碱性：显酸性,3蒽醌,3、溶解度蒽醌苷元：乙醚、氯仿、甲醇、乙醇蒽醌苷：甲醇、乙醇、热水,4、显色反应碱性条件下：红色等醋酸镁反应：红色等络合物,5、光谱特征可见光：黄色紫外光：苯甲酰254nm,二、理化性质,3蒽醌,提取：甲醇或乙醇；回流或超声水解：盐酸或硫酸萃取：三氯甲烷或乙醚,3蒽醌,三、供试品溶液的制备,总蒽醌：,游离蒽醌？结合蒽醌？,3蒽醌,四、鉴别,（一）化学反应法碱性条件下红色等醋酸镁反应：红色等络合物,（二）显微鉴别,大黄的草酸钙簇晶,3蒽醌,四、鉴别,（三）升华法,例：大黄流浸膏,取本品1ml，置瓷坩埚中，在水浴上蒸干后，坩埚上覆以载玻片，置石棉网上直火徐徐加热，至载玻片上呈现升华物后，取下载玻片，放冷，置显微镜下观察，有针状、羽状等，滴加NaOH试液，结晶溶解，溶液显紫红色。,3蒽醌,四、鉴别,（四）薄层色谱法,展开剂：石油醚（3060）-甲酸乙酯-甲酸（15:5:1）的上层溶液,检视：365nm，氨熏,例：大黄的鉴别（10药典）,3蒽醌,五、含量测定,（一）总蒽醌,5%NaOH-2%NH4OH混合碱液显色，max=510nm醋酸镁显色，max=498nm,比色法,对照品：1,8-二羟基蒽醌,显色方法：,3蒽醌,五、含量测定,色谱柱：ODS柱流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15）检测波长：254nm,（二）单体蒽醌,例7-8三黄片中大黄的含量测定（P188）,HPLC,4三萜皂苷,一、概述,活性：抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒等,人参、西洋参、三七：人参皂苷Rg1、Re、Rb,黄芪：黄芪甲苷,甘草：甘草酸、甘草次酸,柴胡、远志、桔梗、商陆、绞股蓝,1、化学结构,二、理化性质,4三萜皂苷,二、理化性质,2、溶解度苷元：石油醚、CHCl3、乙醚皂苷：甲醇、乙醇、正丁醇水泡沫反应,4三萜皂苷,3、显色反应：无水条件下与强酸作用呈现颜色或有荧光，放久易褪色,4、光谱特征：紫外末端吸收=205nm,二、理化性质,4三萜皂苷,甘草酸,甘草次酸,齐墩果烷型，=250nm,三、供试品溶液的制备,4三萜皂苷,1、有机溶剂提取法：水饱和正丁醇,3、氧化铝柱：40%甲醇洗脱,2、大孔树脂柱：70%乙醇洗脱,4、C18小柱：甲醇洗脱,玉屏风口服液中黄芪甲苷的含量测定,【处方】黄芪防风白术,例7-12黄芪中黄芪甲苷的含量测定（P191）,启脾丸中人参皂苷的鉴别,取本品9g，剪碎，加硅藻土5g，研匀，加三氯甲烷40ml，超声处理30分钟，滤过，药渣备用，挥干溶剂，加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，加在中性氧化铝柱（100-200目，15g，内径10mm）上，用40%甲醇150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，正丁醇液蒸干，残渣加0.5ml甲醇使溶解，作为供试品溶液。,【处方】人参、白术、茯苓、甘草、陈皮、山药等,四、鉴别,（一）化学反应法：泡沫反应,4三萜皂苷,（二）薄层色谱法,CHCl3-Me-H2O（65:35:10），10下放置过夜，下层CHCl3-EtOAc-Me-H2O（15:40:22:10），10下放置过夜，下层Bu-EtOAc-H2O（4:1:5），上层,1、展开系统：,四、鉴别,（二）薄层色谱法,4三萜皂苷,2、检视,四、鉴别,（二）薄层色谱法,4三萜皂苷,3、皂苷元,供试液：酸水解石油醚萃取展开剂：三氯甲烷-乙醚（1:1）,显色剂：10%硫酸乙醇液,人参养荣丸中人参二醇、人参三醇的鉴别,取本品18g，剪碎，加硅藻土10g，研匀，加7%硫酸溶液充分研磨提取3次（100ml、50ml、50ml），离心，取酸水液，置水浴上加热回流1小时，放冷，用石油醚（3060）振摇提取3次，每次50ml，合并石油醚液，挥干，残渣加无水乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。展开剂：三氯甲烷-乙醚（11）显色：10%硫酸乙醇溶液，在105加热检视：紫外光灯365nm,【处方】人参、茯苓、甘草、当归、熟地黄等,4三萜皂苷,五、含量测定,（一）总皂苷,比色法,显色剂：5%香草醛/冰醋酸溶液+高氯酸,例7-10人参中人参总皂苷的含量测定（P190）,4三萜皂苷,五、含量测定,（二）单体成分,1、TLCS,例：复方扶芳藤合剂（黄芪甲苷，TLCS）,供试液：三氯甲烷脱脂正丁醇抽提氨试液洗大孔树脂70%乙醇洗脱,展开剂：正丁醇-EtOAc-水（4:1:5）的上层-甲醇（9:1），氨蒸气饱和展析缸,测定：s=530nm，R=700nm,4三萜皂苷,五、含量测定,（二）单体成分,2、HPLC-UVD,例：三七片中人参皂苷的测定,3、HPLC-ELSD,例：玉屏风口服液中黄芪甲苷的测定,色谱条件：ODS柱，=203nm流动相：乙腈（A）-水（B）按下表梯度洗脱,三七片中人参皂苷的测定,色谱条件：ODS柱流动相：乙腈-水（35:65）检测器：ELSD,例7-12黄芪中黄芪甲苷的测定（P191）,测定法：分别精密吸取对照液10l、20l，供试液20l，注入高效液相色谱仪，测定，用外标二点法对数方程计算，即得。,=,A1：对照品进10l的峰面积A2：对照品进20l的峰面积Ax：供试品进20l的峰面积,W1：对照品10l的进样质量W2：对照品20l的进样质量Wx：供试品20l的进样质量,5挥发油,一、概述,冰片：龙脑、异龙脑,广藿香：广藿香醇,白术、苍术：苍术醇、苍术酮丁香、砂仁、鱼腥草、莪术、苏合香,肉桂：桂皮醛,川芎：藁本内酯,薄荷：薄荷脑,活性：发汗、理气、止痛、抑菌、矫味等,1、化学结构,二、理化性质,5挥发油,二、理化性质,2、挥发性,5挥发油,3、溶解度：石油醚、乙醚、三氯甲烷、无水乙醇,4、显色反应：香草醛浓硫酸液2,4-二硝基苯肼：醛、酮对二甲氨基苯甲醛：薁类,三、供试品溶液的制备,5挥发油,提取方式：水蒸气蒸馏冰水浴中超声冷浸,提取溶剂：正己烷、环己烷、EtOAc、CHCl3、无水乙醇,小儿感冒口服液中百秋李醇的含量测定,处方：广藿香、菊花、连翘等,四、鉴别,5挥发油,（一）化学反应法,显色剂：1%香草醛浓硫酸溶液注意：排除假阳性，即要除杂,（二）薄层色谱法,展开剂：石油醚、正己烷搭配乙醚、CHC