课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (19).ppt

,（方法指导课）,1.情境激趣,2.温故知新,基本技术,1.制备培养基2.接种技术3.无菌技术,2.温故知新,制备培养基,定容,称量,溶化,分装,调pH,包扎,灭菌,倒平板,称量,计算,2.温故知新2,接种技术平板划线法,2.温故知新2,接种技术稀释涂布平板法,2.温故知新2,无菌技术,消毒：煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法,灭菌：灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、干热灭菌,2.理论指导1,生物科学社,校园土壤中真菌的分离与计数,2.理论指导1,生物科学社,校园中土壤真菌的分离与计数,2.理论指导1,筛选菌株,选择培养基,水：1000ml葡萄糖:10g蛋白胨：5gKH2PO4：1gMgSO47H2O：0.5g孟加拉红：1%3.3ml链霉素：1%0.3ml琼脂：20g，pH自然,2.理论指导1,筛选菌株,选择培养基,一种氨基糖苷类药，其作用机制是作用于细菌体内的核糖体，抑制细菌蛋白质合成，并破坏细菌细胞膜的完整性。,选择性抑菌剂，可抑制细菌的生长，并可减缓某些霉菌因生长过快而导致菌落漫延生长。,孟加拉红又叫虎红,2.理论指导1,筛选菌株,选择培养基,概念：将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。,2.理论指导1,筛选菌株,选择培养基,方法a加入特殊物质,方法b改变营养物质,方法c改变培养条件,营养构成：碳源、氮源、水、无机盐生长条件：pH、特殊物质、气体要求,2.理论指导1,筛选菌株,目的菌株,方法：根据生存环境要求,到相应环境中寻找。,美国黄石国家公园热泉,水生耐热细菌Taq,2.理论指导1,筛选菌株,原理,人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他种类微生物生长。,3.理论指导2,生物科学社,2.2106株克,统计菌落数目,3.理论指导2,统计菌落数目,方法,稀释涂布平板法，当样品的稀释度足够高时，聚集的菌种被分散开来。培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。,原理,3.理论指导2,统计菌落数目,菌落数目的选择,稀释度的确定,30300,不同微生物采用不同稀释度第一次选择范围宽泛,3.理论指导2,统计菌落数目,数据处理,2.38109株克,平均数：238稀释倍数：106接种量：0.1ml,3.理论指导2,统计菌落数目,每克样品中的菌落数=（CV）M其中，C代表某一稀释度下平板生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（ml），M代表稀释倍数。,3.理论指导3,生物科学社,设置对照,2.2106株克,可信度,3.理论指导3,设置对照,空白对照,对比对照,证明未被污染,去除孟加拉红和链霉素,证明选择作用,3.理论指导4,生物科学社,培养与观察,真菌283天,3.理论指导4,生物科学社,培养与观察,3.理论指导4,生物科学社,培养与观察,教室空气中微生物总数的检测,3.理论指导4,生物科学社,培养与观察,大小、颜色、形态、突起、边缘,3.理论指导5,初步鉴定,预实验,阴性,阳性,对照,3.理论指导5,初步鉴定,原理,pH6.6：黄色pH8.4：红色,4.实验流程,准备工作取样样品稀