真菌感染与实验室诊断进展_ 李若瑜.ppt

全国基层医疗机构抗菌药物合理应用,培训项目,常见病原真菌,李若瑜北京大学第一医院北京大学真菌和真菌病研究中心,真菌感染的分类,根据真菌侵犯人体的部位分为四类：浅表真菌病皮肤真菌病皮下组织真菌病系统性真菌病,浅部真菌病,深部真菌病,临床常见的真菌病,浅表真菌病：花斑癣掌黑癣毛结节菌病,皮肤真菌病：皮肤癣菌病手足、体股、头、甲皮肤念珠菌病,皮下真菌病：孢子丝菌病着色芽生菌病暗色丝孢霉病足菌肿,系统性真菌病：念珠菌病曲霉病隐球菌病接合菌病双相真菌感染,浅部真菌病,限于皮肤最外层，甲板、毛发和粘膜的感染。主要的感染是皮肤癣菌病和浅表念珠菌病。大多轻微，容易诊断，对治疗反应良好。,手、足、甲癣最常见的真菌病,各种头癣：传染、危害健康,皮下真菌病往往经过外伤发病,孢子丝菌病,着色芽生菌病,系统性真菌病,常起源于肺，可以播散到全身许多器官。常通过吸入致病菌孢子而获得，其致病菌腐生于土壤或腐败有机物中，或作为植物致病菌。病原体可分为两组：真正的致病菌和条件致病菌。,系统性真菌病危及生命,系统性真菌病主要的致病真菌,荚膜组织胞浆菌粗球孢子菌皮炎芽生菌巴西副球孢子菌,临床常见的条件性真菌感染,念珠菌病:最常见，血源感染的第4位。曲霉菌病:常见于干细胞移植、实体器官移植、大剂量化疗患者。隐球菌病:艾滋病人患病率为10-20%。接合菌病（毛霉病）:多见于重症糖尿病、烧伤病及器官移植病人。,临床有增多趋势的条件性真菌,非白念念珠菌感染毛孢子菌感染地霉感染镰刀菌感染枝顶孢霉感染暗色真菌感染马尔尼菲青霉,真菌感染的诊断方法,真菌镜检真菌培养组织病理生理生化血清学方法分子生物学,真菌感染的实验诊断方法及问题,显微镜检查-阳性率？培养-时间？敏感性？意义？血清学-敏感性？特异性？分子生物学-标准化？,组织病理学,阿申蓝染色,H39:199-205,侵袭性真菌感染中葡聚糖检测,AML,MDSReceivingantifungalprophylaxis,Cutoff60pg/ml,ClinInfectDis2004;39:199-205.,30,30,withcandidemia,controlsubjects,侵袭性真菌感染的葡聚糖检测Fungitellassay,检测曲霉半乳甘露聚糖抗原的EIA方法（Platelia）,检测位于曲霉细胞壁上的galactomannan,（GM）3.Detectionavidin-enzyme+substrate2.DetectingAbanti-galactomannanbiotinconjugatedAgblood,urine,BAL1.Captureantibodymonoclonalanti-galactomannan,Specificity=90%sensitivity=75%,PlateliaAspergillusEIA结果判断,曲霉的GM抗原检测,乳胶凝集试验（Pastorex）(15ng/ml)酶连免疫吸附试验（Platelia）(1ng/ml),Sabettaetal.JID1985;152:946Ansorgetal.EurJClinMicrobiolInfectDis1994;13:582Verweijetal.JCM1995;33:3150Maertensetal.Blood2001;97:1604Herbrechtetal.JClinOncol2002;20:1898,GM抗原,GM抗原检测用于侵袭性曲霉病诊断,与临床诊断和疗效反应有良好的一致性。检测方法有ELISA、放射免疫分析（RIA）和乳胶凝集试验等。Platelia试剂盒采用ELISA方法，敏感性80%，特异性80%。儿童假阳性10%。Cut-off值影响结果0.5:早期诊断,特异性差;1.5:特异性提高。可动态观察。Dr.MaschmeyerG.in2ndTrendsinMedicalMycology,23-26October2005,Berlin,曲霉感染检测的影响因素,半乳甘露聚糖在血中存在时间短，建议：高危人群每周至少检测2次，动态观察结合影象学、培养结果综合分析诊断,假阴性,假阳性,哌拉西林/他唑巴坦与其它细菌或真菌成分有交叉反应肠道中定植的曲霉释放GM进入血液循环含有谷物的食物中存在GM抗原，通过受损肠黏膜进入血循环导致抗原血症，化疗后出现严重黏膜炎的更易发生,检测真菌DNA的PCR试验,标本：全血血清活检组织BALCSF,不同方法：DNA提取PCR设计产物检测,PCR,PCR技术用于诊断,种特异-PCR非特异PCR杂交,StandartsinglenestedPCR-EIAReal-time,标本全血血浆血清BAL,最低检测范围4-10cfu/ml25-100fgDNA,原位杂交,目的基因多拷贝基因,PCR过筛试验诊断IA,每周监测2次通用引物;确定采用巢式和实时定量;敏感性100%,特异性65%;早于临床症状2天,早于确诊9天;动态观察持续阴性可排除;,Dr.MaschmeyerG.in2ndTrendsinMedicalMycology,23-26October2005,Berlin,Germany.,JunZhaoetal.JCM2001,NestedPCRinAnimalModels,余进，等。中华检验医学杂志，2003,种特异引物巢式PCR扩增烟曲霉rRNA基因,动物模型中巢式PCR方法检测的灵敏度,灵敏度=77.8%,余进，等。中华检验医学杂志，2003,突破方向,对基因组序列和功能的了解，找出特异处改进目前方法，提高敏感性Real-timePCR多重PCR芯片技术其它特异抗原,DNA微阵列,芯片、探针:Candidaspp.Aspergillusspp.临床标本:10-20cfu/mlbodyfluidPCRelectrophoresis:75.6%DNAmicroarray:87.9%Zhuetal.AAA.SanFrancisco,9-12thSeptember2004,真菌非培养诊断小结,在诊断侵袭性真菌感染有一定价值，尤其早期诊断和疗效监测理想的检测方法很少隐球菌乳胶凝集曲霉ELISAGlucanPCR方法有待验证多次取材重要结合临床表现、真菌学等传统方法和影象学,122p