高效液相色谱法测定饲料中维生素A含量的测量不确定度评定

福建畜牧兽医第31卷第3期2009年高效液相色谱法测定饲料中维生素A含量的测量不确定度评定江秀红陈瑞清陈如登福建省农产品质量安全检验检测中心福州350003摘要对饲料中维生素A含量的测量不确定度进行评定，分析测量不确定度的来源，建立数学模型，经计算得到维生素A的含量测定结果的扩展不确定度为46IUG。在维生素A的含量测定过程中，标准溶液浓度是影响含量测量不确定度的主要因素。关键词不确定度维生素A高效液相色谱含量测定文献标识码B文章编号10034331200903004603UNCERTAINTYMEASUREMENTINTHECONTENTDETERMINATIONOFVITAMINABYHPLCJIANGXIUHONGCHENRUIQINGCHENRUDENGFUJIANPROVINCIALQUALITYSAFETYINSPECTIONANDTESTCENTERFORAGRICULTURALPRODUCTS，FUZHOU350003ABSTRACTTHEMEASUREMENTUNCERTAINTYOFVITAMINAINFEEDWASEVALUATEDINPAPERTHESOURCEOFTHEMEASUREMENTUNCERTAINTYWASANALYZED，ANDTHEMODELOFMATHEMATICALWASESTABLISHEDTHEEXPANDEDUNCERTAINTYOFTHEDETERMINATIONRESULTINVITAMINAWAS46IUGBYCALCULATIONATTHEDETERMINATIONOFVITAMINA，THEMAINFACTOROFTHECONTENTDETERMINATIONUNCERTAINTYWASAFFECTEDBYTHESTANDARDSOLUTIONCONCENTRATI0NKEYWORDSUNCERTAINTYOFMEASUREMENTVITAMINAHPLCCONTENTDETERMINATION目前，检测饲料中维生素A的方法是采用GB1R178171999标准，该方法是高效液相色谱法，杂质干扰少，测定结果准确。测定饲料中维生素A含量的测量不确定度，是准确反映测定结果的重要指标。因此，本试验对于如何确定饲料中维生素A含量的测量不确定度进行了系统研究。1测定步骤、数学模型及实验数据11测定步骤采用GBT178171999饲料中维生素A的测定高效液相色谱法测定，精密称取供试品，置入250ML圆底烧瓶中，加50ML抗坏血酸乙醇溶液，使试样完全分散、浸湿，加10ML氢氧化钾溶液，混匀。置于沸水浴上回流30MIN，不时振荡防止试样粘附在瓶壁上，皂化结束，分别用5ML乙醇、5ML水自冷凝管顶端冲洗其内部，取出烧瓶冷却至约4O。定量转移全部皂化液于盛有100ML乙醚的500ML分液漏斗中，用50ML蒸馏水分23次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗，加盖、放气、随后混合，激烈振荡2MIN，静置分层。转移水相于第二个分液漏斗中，分次用100ML、60ML乙醚重复提取2次，弃去水相，合并3次乙醚相。用蒸馏水每次100ML洗涤乙醚提取液至中性，乙醚提取液通过无水硫酸钠脱水，转移到250ML棕色容量瓶中，加100MGBHT使之溶解，用乙醚定容至刻度。从乙醚提取液中分取一定体积置于旋转蒸发器烧瓶中，50下蒸干，残渣用甲醇溶解，并用甲醇稀释至10ML，过膜，上机。准确称取维生素A标准品于皂化瓶中，按上述样品皂化和提取方法进行处理，将乙醚提取液全部浓缩蒸发至干，用正己烷溶解，残渣置入100ML棕色容量瓶中并稀释至刻度，混匀；准确吸取100ML置于100ML棕色容量瓶中，用氮气吹干，用甲醇溶解并稀释至刻度。12测量数学模型式中0A为样品中含维生素A的量，IUG；M为样品质量G；为提取液总体积ML；VN为从提取液中分取的溶液体积ML；为试验溶液最终体积ML；为标准溶液浓度IGML；为维生素A标准溶液进样体积IXL；为从试验溶液中分取的进样体积IXL；P为与标准工作液进样体积相应的峰面积响应值；P为与从试验溶液中分取的进样体积相应峰面积响应值为转换系数，1IU相当于0344G维生素A乙酸酯。13试验数据称样质量M20115G，标样质量M3444MG，样品提取液的总体积V250ML，从提取液中分取的溶液体积25ML，试验溶液最终体积V10ML，标样及样液的进样体积V20L，标样峰面积P550897，样液峰面积P福建畜牧兽医第31卷第3期2009年2152130，将以上数据代入式1，样品中维生素A的含量为1944IUG。2测量不确定度的来源分析从数学模型及其他有关信息分析可知，高效液相色谱法测定饲料中维生素A含量的测量不确定度影响因素有样品及对照品峰面积产生的不确定度；样品及对照品称量产生的不确定度；样品及对照品定容及取样稀释产生的不确定度；皂化、提取、浓缩、进样等随机效应所引入的不确定度。不确定度来源因果图见如图1。饲料中维生素A测定的相对标准不确定度U可通过下式计算H1HMLRELH【PIMTUVLRELUPIRELHPMTUVRELUVRELUOGRELM，其中为标样称样量；、为标液定容体积100ML，为标液移取体积1ML，则标准溶液浓度P的相对不确定度计算公式为厂丁广1FRELV，LFFJ，订HF加LFR川321对照品质量的相对标准不确定度HM011MGM伽UMMO11344432X10一322100MLA级容量瓶、引起的相对标准不确定度UV1VUVLHR2JRW3UVL1100MLA级容量瓶的允许误差皂化、提取、浓缩随机效应螅占VLVV3M图1不确足厦来源因果图3测量不确定度分量的分析和评定31样品质量的相对标准不确定度，_1丁1一JV，HJHFM，J2UM1精密电子分析天平最大允许误差UM2精密电子分析天平四角误差UM3精密电子分析天平重复性误差UM1AX3O05173003MGFB类不确定，精密电子分析天平AX105DR1的最大允许误差鉴定值为005MG，即区间半宽度为005MGUM201V3006MGB类不确定度，检定证书上表明四角误差为01MGUM30153009MGFB类不确定度，检定证书上表明重复性误差为015MG代入公式2UJ011MG精密电子分析天平引起的相对标准不确定度UMRELMM0112011555X1032标准溶液浓度DI的相对不确定度UV12L00MLA级容量瓶的充液重复性误差UV13100MLA级容量瓶的温度变化引起的误差UVL1A、V30101735810MLB类不确定度，100MLA级容量瓶的允许误差鉴定证书为010ML，即区间半宽为010MEU1112RC001011388X10MEA类不确定度用极差计算，充液2次其极差为RO010MLUV13AVAT21XL0XL0000X363X10MLA类不确定度，设温度变化为3，水的膨胀系数在20时A211042代人公式3得LF，W产【58XLO88XLO63X10_221286X10之ML100MLA级容量瓶引起的相对不确定度UV1RELU，86X10210086XLOLFF订JUFWJ86X1043231MLA级移液管引入的相对标准不确定度类似322，1MLA级移液管的允许误差AO006ML，计算标准不确定度UA,295XI04ML，1MLA级移液管的相对标准不确定度HRM95X10。标准溶液浓度P的相对不确定度厂丁1一FTELVF_HR川HFJHR加FV32X102X86X1095X1010XL0之3310MLA级容量瓶引入的相对标准不确定度48福建畜牧兽医第31卷第3期2009年类似322，10MLA级容量瓶的允许误差A002ML，计算标准不确定度H16XLONL，10MLA级容量瓶相对标准不确定度UWREL16XLO34样品及对照品峰面积引入的相对不确定度峰面积的标准不确定度由以下两部分组成仪器波动引入的不确定度A类评定，U和仪器分辨率引入的不确定度B类评定，U，仪器波动引入的不确定度分量另外通过复现性试验计算。检定证书表明WATERS2695高效液相色谱仪的定量重复性误差为0001，则UPAUJ0O01NF3578X10UEAREOUREJPI27X10一。HFP_TELUEJP,F10XL035250ML容量瓶的相对标准不确定度类似322。250MLA级容量瓶的允许误差A015ML，标准不确定度J018ML，250MLA级容量瓶相对标准不确定度R。RE172X103625MLA级移液管的相对标准不确定度类似322，25MLA级移液管的允许误差A004ML，计算标准不确定度UVA29X10之ML，25MLA级移液管的相对标准不确定度UVREL1210量。可以用合并样本标准差来计算标准不确定度，实验室以前的技术档案资料见表L。从表中可以看出，若对检验结果直接用贝塞尔公式计算，由于数据太大，计算出的标准偏差会很大，这时，对其取对数后，计算出2次检验结果对数值的均值及残差，再根据贝塞尔公式，可计算出检验结果对数值标准偏差的合并样本标准差SFI一。I82一17510。USCV253X10，LFF口53XLO4不确定度分量汇总表表2标准不确定度分量汇总表分量相对标准不确定度UXXLFR肺，JLRYJFUPDRELUPRELRLUVRELUREL5510_51OX10216102710一10X10一721O12X1O_353X1035合成相对标准不确定度分量的计算和维生素A含量测量结果的报告37随机效应所引入的相对不确定度竺墨兰竺。，根据多次测量在重复性条件下或复现行条件下的重复观测结果的分散性标准偏差，复杂的测量过程包括样品皂化、提取、浓缩、试剂纯度、仪器进样