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文档简介

血清谷丙转氨酶活性的测定,实验题目,实验目的,掌握谷丙转氨酶活性测定的原理和方法,血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及a一酮戊二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即反应出谷丙转氨酶活性的大小。丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在酸性溶液中显黄色，在碱性溶液中成醌型显棕红色。,实验原理,本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反应丙酮酸的量，即反应了谷丙转氨酶的活性。本法以lml血清与基质液在37，保温30分钟生成2.5g丙酮酸为谷丙转氨酶活性1单位求酶活性单位的方法：1、标准品对照法：检品与标准丙酮酸液同样处理呈色，进行比色，计算出酶活性单位。2、标准曲线法：取含待测物的一系列标准溶液，作标准曲线，由标准曲线查得活性单位。,一、标准品对照法取试管4支，标号，按下表加试剂：,实验操作,56放置5分钟。,加0.4NNaOH液5.0ml慢慢加入（约1分钟），边加边混匀。,室温放置30分钟，,测OD值，波长520nm，用蒸馏水调零点。,计算,二、标准曲线法配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液，并且各加以适量的基质液，作成标准曲线。具体做法如下表。,。,各管混匀，放37水浴5分钟,加0.4NNaOH液5.0ml慢慢加入（约1分钟），边加边混匀,然后各加呈色试剂0.5ml，混匀,56放置5分钟。,室温放置30分钟,测定OD值,波长520nm，用蒸馏水调零点。,一标准对照法,.原始数据记录,2、公式计算酶活性单位（要求带入数据，写出结果）,二、标准曲线法,.原始数据记录,2、绘制标准曲线，（要求规范作图）3、通过方法一的ODA-ODB，在标准曲线中，查得酶活性单位,实验结果,注意事项,操作中加0.4NNaOH液时，需以较慢速度加入，并且边加边摇匀加快时则a一戊酮二酸引起的发色增强。本实验中各试剂加量都需要准确，并且要注意控制条件，保温时间要严格本法测定SGT
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