安捷伦液相色谱仪ppt课件

,高效液相使用方法,太原市医达维科医药科技开发有限公司,1,使用方法,进样前准备,开机,仪器参数设定,打印数据报告,数据分析告,HPLC使用方法,关机,2,开机,打开电脑打开液相各模板电源（等待仪器自检）双击仪器一联机脱气（旋开冲气阀-设计流速）,3,仪器参数设定,开始编辑完整方法泵参数设定自动进样器设定柱温箱、检测器设定,4,素据分析,双击仪器一脱机选择调用数据积分打印报告,5,关机,关机前，先关灯退出工作站，依次关其它模块电源关闭计算机,6,关于高效液相操作的相关知识,流动相1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质；3、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相；A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。,7,关于高效液相操作的相关知识,色谱柱：1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等；2、使用符合要求的流动相；3、使用保护柱；4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。5、色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存；6、不要高压冲洗柱子；7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；,8,关于高效液相操作的相关知识,反相色谱柱的清洗作为普通C18柱，尤其是硅胶基质的普通C18柱，对酸碱盐以及水，都是造成柱子的损坏的流动相构成。水不能过多（除了带AQ的纯水柱，一般各家品牌都有这款防水柱）。一般认为只要超过80%的水的流动相，都会造成C18的寿命缩短。所以做高水相的流动相分析时请注意选合适的柱子。酸对柱子的损伤是不可逆的，一定要控制PH，一般认为PH在2以下的都会对柱子造成致命损伤。碱性条件是对于硅胶基质的C18的弱项，一般的硅胶基质的C18碱性条件都不太耐用，但现在也有碱性PH11的柱子，但比较贵。盐对色谱柱的影响主要是盐析造成的，而且是致命。,9,关于高效液相操作的相关知识,冲洗方法根据使用的流动相和样品的不同冲洗方法要加以区分。一般不加酸碱盐，水相也不高的情况（如甲醇水60:40），无需太过冲洗，冲洗的目的就是为了把样品的杂质冲出即可。酸和碱的条件下，原则上是将酸碱冲出色谱柱，保存在甲醇水即可（如60:40比例可根据要使用的流动相，只要水相不高即可）。盐的条件比较麻烦，处理不好，不仅仅色谱柱出问题而且仪器也比较麻烦。常用的就是高水相流动相甲醇-水（10：90）将盐冲出（注意压力），然后用纯甲醇冲洗（这一步是恢复高水相对色谱柱的损伤），最后保存在一般的甲醇水体系即可。,10,关于高效液相操作可能出现情况分析,操作过程若发现压力很大，可能柱端过滤器堵塞，柱子塌陷，柱污染。（分析生化，染料易污染样品等）操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。泵压不稳或流量不准，可能为柱塞杆密封圈问题或sealwash垫圈问题，需更换。基线产生不规则噪声，可能原因为系统不稳定或没达到化学平衡及流动相被污染等。色谱峰比预计的小，可能原因为进样体积错误，检测器灯故障，进样问题（瓶号错、进样体积不合适、进样错误、针头堵塞）。,11,关于高效液相操作可能出现情况分析,柱效降低可能由于色谱柱老化，以及污染等原因峰发生分裂可能样品有异构体，物质降解，进样量大，色谱柱柱效等。基线有尖峰不规则漂移，色谱柱污染，检测器有气泡，实验室一些