课题3　分解纤维素的微生物的分离.pptx

课题3分解纤维素的微生物的分离,专题二：微生物的培养与应用,一、基础知识,（一）纤维素与纤维素酶,1.纤维素,(1)基本组成单位：。,(2)含量：是地球上最丰富的类物质。,(3)分布：是自然界中纤维素含量最高的天然产物。此外，木材、作物秸秆等也富含纤维素。,葡萄糖,多糖,棉花,2.纤维素酶,(1)组成：,纤维素酶是一种，至少包括三种组分，即、和。,复合酶,C1酶,Cx酶,葡萄糖苷酶,(2)作用：,3.纤维素酶分解纤维素的实验：,11,1mL,完全分解,基本无变化,实验组,对照组,Q、该实验是如何构成对照的？,自变量、无关变量等,4.纤维素分解菌的筛选,(1)原理：,纤维素被分解后，刚果红纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的_,透明圈,可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌,纤维素分解菌,(2)方法：,刚果红染色法,该方法可以通过_反应直接筛选。,颜色,刚果红：,简称CR，一种染料；,可与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。,二、实验设计,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别培养基,挑选菌落,Q1.为获得纤维素分解菌，取样时应选择怎样的环境？,1.土壤取样：,在富含纤维素的环境中（如多落叶的腐殖土）寻找,Q2.为什么要在富含纤维素的环境中寻找？有无其他方法？,纤维素分解菌的含量相对较多,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别培养基,挑选菌落,2.选择培养：,（1）选择培养的目的：,增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物；,Q、为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？,在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制。,1、纤维素分解菌选择培养基属于_（固体、液体）培养基，原因是_,液体,没有添加琼脂,2、该培养基对微生物_（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是：,具有,以纤维素粉为唯一碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖；,（2）选择培养的成分：,以纤维素为唯一碳源,3、你能否设计一个对照实验，说明选择培养的作用？,应控制的变量是将_改为_。,葡萄糖,纤维素粉,（3）选择培养的操作步骤：,P29,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别培养基,挑选菌落,3、鉴别培养基：,固体培养基,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别培养基,挑选菌落,4.刚果红染色法：,（1）方法一：,培养微生物,加入刚果红进行颜色反应,操作过程：,长出菌落的培养基,覆盖CR溶液10-15min,倒掉CR，加入NaCl10min,倒掉NaCl，观察透明圈,注意：CR不需要灭菌,4.刚果红染色法：,（1）方法二：,刚果红灭菌培养基灭菌,倒平板,注意：刚果红、培养基都需要先灭菌，后混匀,长出菌落，出现透明圈,接种,混匀,13,颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用,操作繁琐，刚果红会使菌落之间发生混杂,操作简便，不存在菌落混杂问题,产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。,思考：这两种方法各有哪些优点与不足,三、结果分析与评价,对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。,2、选择培养基是否筛选出菌落？,如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。,1、培养基的制作是否合格？,四、课题延伸,1、为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行实验。,2、纤维素酶的发酵方法有发酵和_发酵。,发酵产纤维素酶,液体,固体,3、纤维素酶的测定方法：,对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的_含量进行定量测定。,葡萄糖,小结：本实验流程与课题2中的实验流程有哪些异同,课题2：,土样制成菌悬液,稀释,涂布在选择培养基上,（尿素为唯一氮源）,分离菌落，鉴定菌种,本课题