自身抗体检测项目及临床意义VIP

一、抗核抗体抗核抗体(antinuclearantibodies，ANA )是指抵抗各种核成分的抗体，是广泛存在的自身抗体。 ANA的性质主要为IgG，也有IgM和IgA，以及IgD和IgE。 ANA与不同来源的核发生反应，无器官特异性和种特异性。 ANA主要存在于血清中，也存在于滑膜液、胸水、尿等其他体液中。ANA虽然SIE患者滴度高，但也出现在许多其他自身免疫病中，很多研究报告都检测出ANA作为自身免疫或自身免疫的存在的依据。 这种现象的机制尚不清楚，需要进一步研究。(一) ana的类型和意义；因为核成分的复杂性，根据成分的不同抗原性也不同的安娜有各种各样的种类。1 .抗核蛋白抗体核蛋白抗原(DNP )由DNA和组蛋白组成。 由于DNP抗原存在不溶性和可溶性两个部分，可以产生各自的抗体。 不溶性DNP抗体通常不完全被DNA和组蛋白吸收，形成狼疮细胞的因子可溶性抗原存在于各种关节炎患者的滑膜液中，其相应抗体也出现在RA患者的滑膜液中。2 .抗DNA抗体可以分为两类：抗天然DNA(nDNA )抗体，或抗双链DNA(dsDNA )抗体；抗变性DNA抗体，或抗单链DNA(ssDNA )抗体。 抗dsDNA抗体对SLE有较高的特异性，70%90%的活动期SLE患者该抗体阳性，有效价格高，与病情有关。 抗ssDNA抗体多见，特异性差。3 .抗ENA抗体提取性核抗原(ENA )多从动物胸腺中提取。 将胸腺匀浆破碎细胞，用分离核的盐水或磷酸盐缓冲液处理后，容易从细胞核中提取。 ENA不含DNA，对核糖核酸酶很敏感。 近年的研究表明，ENA分为十几种，目前仅介绍了一些主要的ENA及其相应的抗体。(1)抗PNP抗体： PNA即核糖酶对核糖核酸酶和胰蛋白酶敏感，经加热561h改性。 抗PNP抗体多见于混合性结缔组织病。 高效抗PNP抗体对混合性结缔组织病有诊断意义低效价抗PNP抗体可在SIE患者中发现。(2)抗Sm抗体：该抗体首次在名为史密斯的患者血液中被发现，以其名字的前两个字母命名。 Sm抗原系的非核酸性糖蛋白虽然对DNase和RNase不敏感，但用碘酸盐和胰蛋白酶处理后会被水解。 抗Sm抗体是SLE的特异性标记之一，但阳性率低，可能是约30%4%的SIE的回忆抗体，因此在非活动期也能检测出来。 同时检测抗dsDNA和抗Sm抗体可以提高SLE的诊断率。(3)抗SSA抗体： SSA是干燥综合征(ss )的a抗原，可从动物胸腺的细胞中提取。 抗SS-A抗体主要见于SS，但也见于其他自身免疫疾病如SLE。(4)抗SS-B抗体： SS-B是SS的b抗原，也可从动物胸腺和小鼠肝细胞浆中提取，可通过胰蛋白酶、轻度加热和溶液pH的变化破坏。 SLE的13%和SS的30%具有抗ssb抗体。(5)抗组蛋白抗体(AHA ) :组蛋白为碱性蛋白，含有大量赖氨酸和精氨酸。 目前发现组蛋白抗原可分为H-1、H2A、H-2B、H-3、H-4个亚基。 抗组蛋白抗体及其抗亚基抗体见于SLE和药物诱发的LE。 SLE患者血清中抗组蛋白亚基抗体的检测率依次为：抗H-2B、抗H-1、抗H-3、抗H-2A和抗H-4，以抗H-2B和抗H-1为主，与SLE活性有关。(2)ana的检测方法由于ANA的复杂性和多样性，测定方法很多。 目前ANA常用的方法有免疫荧光法、放射免疫法、ELISA、免疫双扩散、对流免疫电泳和免疫印迹技术等。1 .免疫荧光法测定血清总ANA最常见的方法是荧光免疫组化法。 以大多数小鼠肝切片和板块为核基质，结果表明，其相对稳定可靠，荧光显微镜下观察到的核荧光着色呈阳性反应。 首先以不同比例稀释患者血清，可进行大体定量试验，1:80稀释尚阳性时，对SLE的诊断有很大参考价值。 油镜下观察结果表明，ANA阳性荧光现象可分为4种主要荧光核型，核型的确定对临床诊断具有更大的参考价值。 周边型显示抗DNA抗体的存在均质型显示有抗DNP抗体斑点(粒子)型多为抗ENA抗体核仁型多为抗核小体抗体。 SLE患者常出现周边型、均质型或混合型，斑点型多见于混合结缔组织病，而硬皮病多为核仁型的周边型对SLE有较高的特异性。近年来，有人以锥虫和血鞭毛虫(如绿蝇短膜虫试验)为基质测定抗dsDNA抗体。 这些血寄生虫的运动基质中含有大量纯dsda，其他抗原无干扰的阳性结果表明鞭毛一端的运动基质显示出明显的荧光。 因此，该试验具有检测抗dsDNA抗体特异性强、敏感性高的优点。 此外，短膜虫对人畜无害，可人工养殖，来源方便，值得推广。2 .放射免疫法常检测抗DNA抗体，有Farr法和过滤法。 Farr法的原理是用同位素标记DNA，将标记的DNA与被检血清的抗DNA抗体结合，用50%硫酸铵饱和液沉淀，将沉淀物与上清液中的放射活性进行比较，得到DNA结合活性，一般结合率为20%以上为阳性。 过滤法在分离结合物时用纤维素酯膜过滤器(孔径0.45m )过滤，游离的DNA过滤后与抗体结合的复合物停留在过滤膜上。3.ELISA临床主要采用间接ELISA测定抗dsDNA抗体，其重现性和敏感性高于对流免疫电泳和双扩散。 目前正在准备试剂盒。4 .免疫印迹(immunoblotting )首先以混合抗原为凝胶电泳，从不同区域分离，转录到硝酸纤维素膜上，最后用酸标抗体或放射性同位素标记抗体进行检测和分析。 因此试验不需要精制的单一抗原，可在同一固相下进行多项分析检查，灵敏度高，特异性强。 因此，目前已广泛应用于检测自身免疫患者血清中的多种自身抗体，如抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗SS-A抗体和SS-B抗体。此外，传统的琼脂双向扩散法、对流免疫电泳法、间接凝血法和补体结合试验等也可以应用。这些试验所要求的实验条件低，但敏感性也低。二、类风湿性关节炎因子类风湿性关节炎因子(RF )是抗变性IgG的自身抗体，主要为19S的IgM，也可见7S的IgG和IgA。 与人和动物变性IgG结合，与正常IgG无凝集反应。 RF主要出现在类风湿性关节炎患者中，在约70%90%的血清中和约60%的滑漠液中检测到IgG类RF，很可能是自身IgG变性引起的自身免疫应答的表现。IgG是由感染等原因引起的免疫应答中的主干抗体，这些抗体与相应抗原结合后发生变性，炎症等病理条件下降，在其他部位可能发生异常的IgG，这些变性IgG构成自身抗原，刺激免疫系统产生各种抗IgG抗体。 滑膜液中的IgG类RF与变性IgG结合形成中度免疫复合物，比血清中的IgM类RF具有致病意义。 这种免疫复合体容易堆积在关节滑膜等部位，可激活补体，形成慢性进行性免疫炎性损伤。RF的测定最初用致敏绵羊红细胞凝集试验(Rose-Waaler法)测定，目前吸附在IgG上的胶乳粒子凝集试验最为常用，但该方法灵敏度和特异性都不高，只能检测血清中的IgM类RF。 IgG类和IgA类的RF需要用RIA和ELISA等方法进行测量。类风湿性关节炎患者RF检出率高，RF阳性支持早期RA的倾向性诊断，如诊断应对年轻女性进行RA与风湿热之间的鉴别的非活动期RA，应参考病史。 但是，RF也不像ANA那样是RA特有的特异性抗体。 SLE患者有50%的RF阳性，其他结缔组织病如SS、硬皮病、慢性活动性肝炎和老年人有一定阳性率。三、其他自身抗体(1)抗甲状腺球蛋白及微粒体抗体对于甲状腺的许多成分，这种抗体以甲状腺球蛋白和微粒体为代表。 抗体主要为IgG，通过ADCC活性，引起慢性淋巴细胞性甲状腺炎，又称乔本(Hashimoto )甲状腺炎。 检查方法多采用免疫荧光技术，以甲状腺组织冰冻切片为基质。 也可以通过RIA、ESISA等方法进行检查。 强阳性反应和高滴度抗体对焦班甲状腺炎和原发性甲状腺功能减退症有诊断意义，抗体变化对评价疾病治疗转归非常重要，对焦班甲状腺炎和甲状腺功能亢进的鉴别诊断也有很大价值。 健康人的血清中没有检测出甲状腺抗体，或者没有病症的人只有5%10%有低反应的女性和年龄大的人的检测率高。 一旦检测出这种抗体，表明过去患过自己的病，可能是自己免疫疾病的早期指标。甲状腺功能亢进症(Graves病)患者血清中存在甲状腺刺激抗体(TSAb )，包括长期甲状腺刺激素(LATS )和LATS者(LATS-P )。 这些抗体作用于甲状腺细胞表面的TSH受体，激活受体，促进甲状腺素释放的甲状腺激素过剩会促进机体的代谢。(2)抗乙酰胆碱受体抗体抗乙酰胆碱受体(AchR )抗体与横纹肌细胞乙酰胆碱受体结合，引起运动终板的破坏，神经肌间信号传导失败，引起骨髓肌运动无力，称为重症肌无力(myastherniagravis，MG )。 疾病可以在任何年龄发生，最初出现的症状常常是眼肌无力，甚至涉及其他部位，呈进行性加重。抗AchR抗体多采用敏感的方法检测。 ELISA法：用-银环蛇毒素包复酶标板，赋予骨骼肌和匀浆(包括AchR )作用，加入测定的血清和对照血清，加入酶标抗体。 试验正常结果为阴性或0.03mmol/L。 释放法：放射性同位素标记银环蛇毒素与骨匀浆相结合，加入患者血清和抗人IgG沉淀，检测沉淀物的放射性。抗AchR抗体的测定对MG有诊断意义，特异性和敏感性高，约90%的MG患者伴有阳性眼肌症状的患者，抗体效价低于一般症状，也可用于监测对该病的免疫抑制治疗效果。 肌萎缩侧索硬化症患者经蛇毒治疗后出现假阳性。(3)抗平滑肌抗体抗平滑肌抗体(ASMA )的产生机制尚不清楚，但与肝和胆管的自身免疫疾病，特别是慢性活动性肝炎(狼疮性肝炎)和原发性胆汁性肝硬化(PBC )有关。 这种疾病的发生与自身免疫性密切相关，试验结果有助于诊断及与其他肝病的鉴别诊断。ASMA检测采用间接免疫荧光法，以大鼠胃大弯或小弯冰片为基质的正常结果为阴性或336020。 阳性率高的疾病在慢性活动性肝炎和检测出PBC的肝外性胆汁梗阻、药物诱发性肝病、急性病毒性肝炎、肝细胞癌等中，ASMA的检测率极低。(4)抗心肌抗体心肌损伤(如手术、感染、梗塞等)时，心肌细胞内的物质释放出来，作为隐蔽抗原刺激生物体抗体。 这些抗体与心脏的结合可引起新的免疫性损伤，如心包切开综合征、风湿性心脏病等。抗心肌抗体检查以胎儿或大鼠心肌冻结切片为抗原基质进行免疫荧光检查，正常值为阴性。 阳性结果相关疾病有心脏术后综合征、心肌梗死后综合征、风湿性心脏病等。(5)抗线粒体抗体(AMA )检测抗线粒体抗体(AMA )抗原为内层线粒体膜，无器官特异性和种特异性。 该抗体主要为IgG，与PBC有关，但对肝细胞和胆管无直接损伤效果，在疾病中的作用不明。AMA用免疫荧光法测定，以大鼠肾的冻结切片为基质的补体结合试验也能检测出来。 正常结果阴性或有效价在1:5以下。 PBC患者79%94%可为阳性反应或有效价值1:160的长期持续性肝梗阻、慢性活性肝炎； 原因不明性肝硬化等也呈阳性反应。 但肝外性黄疸为阴性。(6)抗胃壁细胞抗体抗胃壁细胞抗体(APA )破坏胃粘膜壁细胞，使内因子产生障碍，有时发现抗内因子抗体阻碍功能，引起恶性贫血。 患者无前驱症状或患胃炎。APA采用间接免疫荧光法测定，以人或兔胃冻结切片为抗原基质，正常成人呈阴性反应，正常儿童检出率为2%20%。 恶性贫血患者可检测出抗胃壁细胞或抗内源性抗体。 其他各种贫血患者均无法检测出任何抗体。 胃溃疡和胃癌等这种抗体阳性极少。(7)抗胰岛素抗体抗胰岛素抗体可在体内与胰岛素结合形成抗原抗体复合体，引起胰岛素活性显着降低或无效的胰岛素依赖性糖尿病，如果不大量注入胰岛素就无法取得疗效。 该抗体主要为IgG，其他4种Ig也存在的IgE类抗体可能引起患者过敏反应，IgM类可能引起胰岛素抵抗。测定抗胰岛素抗体及其免疫球蛋白的种类，采用多种琼脂扩散试验、间接凝血和ELISA等方法，试验结果有助于糖尿病的分型诊断和适当治疗。 它还可用于监测患者的胰岛素耐受性。(8)抗肾小球基底膜抗体抗肾小球基底膜(GBM )抗体在链球菌感染后，多发生于共同抗原交叉诱导中。 抗GBM抗体可引起GBM损伤，导致肾小球肾炎的发生。抗GBM抗体的检测也采用荧光和酶联免疫组化法，以动物和人的肾组织冷冻切片为抗原基质。 阳性反应与肾小球血管走向一致，发现荧光染色或酶基质染色，这与免疫复合体时斑状分布的染色现象完全不同。 试验正常值为阴性。 该试验主要用于肾小球肾炎的分型和鉴别诊断。 约5%的肾小球肾炎是抗GBM抗体诱发的自身免疫性。(9)抗精子抗体正常情况下，精细胞是隐蔽抗原，但在外伤、手术或感染时，精子与免疫系统接触，使机体产生抗精子抗体。 高滴度的抗精子抗体降低精细胞的活力，进一步减少数量，是男性不育症的原因之一。 部分女性也检测出抗精子抗体，可能与不育有关。抗精子抗体的检测方法很多，如精子制动试验、精子凝集试验、免疫荧光法、ELISA法和免疫磁珠结合法等。 抗精子抗体阳性相关疾病包括实验性输精管阻塞和输精管切断等，一些妇女和孕妇也能检测出抗精子抗体。(10 )抗血细胞抗体抗红细胞抗体主要与ABO的Rh血型抗体和自身免疫性抗体有关，与输血、新生儿溶血病和自身免疫性溶血性贫血等有关。 抗血小板和抗白细胞抗体等与自身免疫性血液病有关。四、其他免疫学检查(1)淋巴细胞检查自身免疫