《研究生科研讲座》PPT课件.ppt

科研基本训练专题讲座,如何选题和设计课题,高成江,高成江,教授,泰山学者山东大学医学院免疫学研究所88382292(office),88382113(lab)Office:building6,Rm438Email:cgao,1.尽快完成观念的转变:从“学生”转变为“科研工作者”从“学习”转变为“研究”“探索”克服现在学生的一些弱点：应试教育和就业问题，缺乏对科学研究的激情。众多“杂事”，众多的“节假日”。社会的浮躁与急功近利，潜不下心搞学问。,一、充分发挥自己的学习主动性,2.明确科学研究的目的:科学研究目的:探索人类认识的未知领域,探索真理.发现新事物，新现象；揭示新规律（阐明规律）；提供新认识(新解释)。科研工作者的工作目的.科研的动力：（1）追求真理（好奇心，认死理）(自然科学有无穷魅力)；（2）社会需求（指挥棒）；（3）功利驱使。事业心,上进心,虚荣心,1、定研究“方向”和“领域”所在Lab（导师）固定的研究方向1)熟悉实验室PI的工作（查文献并浏览导师发表的文章）2)参加Labmeeting,Journalclub3)熟悉实验室工作环境与实验操作(要泡实验室；参与师兄姐实验,第一学期年)，重点是熟悉实验仪器,二、如何选题，要做什么,2、复习文献，写出综述大量查阅并整理“课题”有关文献，撰写综述（是否发表？）(第一学年/学期）1）掌握学科水准;当前重大进展与趋势2）了解焦点与热点;已/正/将进行的研究课题3）(全面)历史、现状、展望;主要研究方法手段，实验技术4）从文献中找蛛丝马迹（依据），按自己的学识创新思维，大胆假设。5）打消阴性（否定）结果的顾虑，阴性实验也具有科学价值(指路标与警示牌),免疫学领域研究热点,肿瘤免疫的研究进展固有免疫的研究进展T细胞分群、分化、发育的研究进展NK细胞的研究进展microRNA与免疫调节自身免疫病的病因及治疗,Keyquestions:howtheinnateimmuneresponseisregulated?,M,Regulatoryproteins:TRIM38,TRIP,hnRNPUmicroRNA:210,147,TRAF-interactingProtein(TRIP):ANovelComponentoftheTumorNecrosisFactorReceptor(TNFR)-andCD30-TRAFSignalingComplexesThatInhibitsTRAF2-mediatedNFkBActivation.J.Exp.Med.1997TheTumorSuppressorCYLDInteractswithTRIPandRegulatesNegativelyNuclearFactorBActivationbyTumorNecrosisFactor.J.Exp.Med.2003,查文献，提假设成功的例子,EarlyembryoniclethalitycausedbytargeteddisruptionoftheTRAF-interactingprotein(TRIP)gene.BBRC.2007TRAF-interactingprotein(TRIP)isaRING-dependentubiquitinligase.BBRC.2007Theprotein-tyrosinekinaseSYKinteractswithTRAF-interactingproteinTRIPinbreastepithelialcells.Oncogene.2009,3、定“课题”：凝练科学问题，提出明确的idea1）导师研究生共同讨论制定，课题不要远离“方向”和“领域”。2）既考虑工作需要，也要尊重研究生的兴趣3）注重工作的连续性与新领域的开拓4）课题难易程度要考虑研究生能力5）利用临床资源的研究(注意伦理原则）6）现有的研究基础与工作条件，课题的前期研究工作,Novelty（新颖性）是否要有重要临床或学术价值？是否具有原创性？是否具有应用价值？不是简单重复别人的实验（换材料），不是跟踪。研究别人没有研究过的东西，难，但创新性强别人已研究过的东西，但可以研究它的新功能，容易。,1、明确课题的研究目的和研究内容。研究内容适当（做什么，编“故事”）小心求证小题大做深做不要大题小做浅做；“深入”与“全面”矛盾针对研究目的（假说）决定研究内容避免研究内容不足以得到预定目的（小于，少于）避免研究内容超越预定目的（大于，多于）,三、设计课题，如何做,例背景：巨噬细胞活化可诱导新基因A的表达。假设：A基因可调控巨噬细胞的活化。课题：研究A基因对巨噬细胞活化的作用和机制。研究内容1.A基因是否对巨噬细胞活化有作用？研究内容2：A基因调控巨噬细胞活化的机制？结论：A基因是巨噬细胞的活化调控因子。,2、实验设计要严谨全面，特别是对照实验（包括阴性和阳性对照），病例数，严格质控（repeat,duplicate)对照试验检测你的实验体系；一个试验至少要重复三次或更多次；测量的数据要重复三次至六次；临床病例材料要几百例；,3、技术路线要合理,4、实验方法要可靠并公认；动物模型要成熟公认。方法选择：目的决定方法选择；PCR，WB实验条件选方法；MS工作者熟练程度选方法模型：经典与新建（是否需与人一致或接近）,1）新基因的生物信息学分析:编码产物预测分析序列同源性分析蛋白质功能域分析2）新基因的体内表达规律分析mRNA水平的表达谱分析蛋白质水平的表达分析,基因功能研究策略,4）功能获得策略基因转染技术转基因技术5）功能失活策略基于siRNA的基因沉默技术基因敲除检测的指标：炎性细胞因子的分泌,6）基因编码产物相互作用蛋白的研究免疫共沉淀技术（co-IP)酵母双杂交系统FRED和FRET,主要分子生物学技术,Westernblotting-蛋白印迹Confocalmicroscopy-激光共聚焦Chromatinimmunoprecipitation-染色质免疫沉淀Real-timePCR-实时定量PCR流式细胞术,microRNA-210negativelyregulatesLPS-inducedmacrophageactivationbytargetingNF-B1,Background,Innateimmunity,Thebodysfirstlinetodefenseagainstmicrobialinfection.Macrophages,PRR,Background,Background,NF-B,microRNAs,Background,highlyconversed,smallnon-codingRNAmolecules,21-25ntMaturemiRNAinteractswithaspecificmRNAthroughpairingofnucleotidebasesbetweenthemiRNAsequenceandthe3untranslatedregion(3UTR)ofspecificmRNA,andleadstotranslationalrepressionortargetmRNAdegradationInhuman，700miRNAstheexpressionof20-30%genes,Background,Taganovetal.NF-B-dependentinductionofmicroRNAmiR-146,aninhibitortargetedtosignalingproteinsofinnateimmuneresponses.PNAS.2006;103(33):1248112486.Liuetal.MiR-147,amicroRNAthatisinduceduponToll-likereceptorstimulation,regulatesmurinemacrophageinflammatoryresponses.PNAS.2009;106(37):1581915824.,Taganovetal.MicroRNAsandimmunity:tinyplayersinabigfield.Immunity.2007;26(2):133137.Xiaoetal.MicroRNAcontrolintheimmunesystem:basicprinciples.Cell.2009;136(1):2636.,OConnelletal.MicroRNA-155isinducedduringthemacrophageinflammatoryresponse.PNAS.2007;104,16041609.OConnelletal.InositolphosphataseSHIP1isaprimarytargetofmiR-155.PNAS.2009;106(17):71137118.Cardosoetal.miR-155modulatesmicroglia-mediatedimmuneresponsebydown-regulatingSOCS-1andpromotingcytokineandnitricoxideproduction.Immunology.2012;135(1):73-88.,microRNAsplayanimportantrolenotonlyinthedifferentiationanddevelopmentofimmunecells,butalsointheregulationofimmuneresponse.,Background,Objective,?,Technicalroute1,ToidentifymicroRNAsinducedbyLPSinmurinemacrophages,Results1,LPS-inducedexpressionofmiR-210inmurinemacrophages.,Fasanaroetal.MicroRNA-210modulatesendothelialcellresponsetohypoxiaandinhibitsthereceptortyrosinekinaseligandEphrin-A3.JBiolChem.2008;283(23):1587815883.Chanetal.MicroRNA-210controlsmitochondrialmetabolismduringhypoxiabyrepressingtheiron-sulfurclusterassemblyproteinsISCU1/2.CellMetab.2009;10(4):273284.Biswasetal.HypoxiainduciblemicroRNA-210attenuateskeratinocyteproliferationandimpairsclosureinamurinemodelofischemicwounds.PNAS.2010;107(15):69766981.Chanetal.MicroRNA-210:auniqueandpleiotropichypoxamir.CellCycle.2010;9(6):10721083.Tsuchiyaetal.MicroRNA-210regulatescancercellproliferationthroughtargetingfibroblastgrowthfactorreceptor-like1(FGFRL1).JBiolChem.2011;286(1):420428.,microRNA-210,ToinvestigatewhetherHIF1-wasinvolvedinLPS-inducedmiR-210expression,Technicalroute2,Results2,HIF1-increasesmiR-210expression.,ToinvestigatethepossibleroleofmiR-210inLPS/TLR4signalingformacrophage,Technicalroute3,Results3-1,miR-210mimicsinhibitsTLR4-inducedproinflammatorycytokinesexpression.,Results3-2,miR-210inhibitorincreasesTLR4-inducedproinflammatorycytokinesexpression.,Technicalroute4,TodeterminethefunctionandmolecularorderofmiR-210intheLPS-inducedNF-Bactivation,Results4,miR-210targetsmoleculesdownstreamofIKK-.,Computationaltargetprediction,Technicalroute5,ToidentifythepotentialmiR-210targetsintheLPS/TLR4signaling,Results5,miR-210targetsNF-B1.,Technicalroute6,TodeterminewhethermiR-210inhibitsexpressionofendogenousp105/p