生物实验技术：对虾白斑症病毒和鱼类淋巴囊肿病毒免疫检测芯片

对虾白斑症病毒和鱼类淋巴囊肿病毒检测抗体芯片的制备与应用,中国海洋大学水产动物病害与免疫学研究室2011.5.7,水产养殖动物种类多、病原种类繁杂，针对单一病原的检测和诊断不能全面反映病害发生的原因和状况，不利于确定有效的防治措施；国际贸易中，水产疫病问题和因疫病防治带来的药物残留问题，已多次成为某些发达国家对我国水产品出口制造障碍的技术壁垒。现有的检测技术在检测成本、检测时间、检测通量、实用性、准确性等方面具有一定的局限性。新发展起来的抗体芯片技术提供了一种多样品多指标检验并行处理的方法。信息量大、快速、及时、操作简便、用途广泛。,研究背景,建立水产动物病原检测抗体芯片制备体系，优化反应条件，在此基础上拓展检测通量，并将此技术其用于养殖生产及进出口贸易中水产动物病原的监测。,研究目的,抗体芯片原理,本研究技术方法,不同载体（氨基、醛基、巯基、APES、多聚赖氨酸、丙烯酰胺凝胶、0.6%-1.4%琼脂糖凝胶修饰玻片、NC膜、PVDF膜）用于蛋白芯片制备的效果,不同修饰载体的原子力显微镜表征,一芯片载体的选择,琼脂糖浓度对信号值和背景值的影响,将兔IgG点样于不同的芯片载体上（0.6%-1.4%琼脂糖修饰片基；丙烯酰胺、APES、醛基、巯基、多聚赖氨酸修饰玻片；氨基化玻片；NC膜；PVDF膜），与Cy3标记的羊抗兔Ig反应。,1.不同载体用于蛋白芯片制备的效果,不同载体用于芯片制备的比较分析,1.不同载体用于蛋白芯片制备的效果,不同载体在最适点样抗体浓度时信号值和背景值的比较,不同载体上信号点的形态比较,IVI分别为1.2%琼脂糖、APES、氨基、MPTS、醛基、多聚赖氨酸修饰玻片,丙烯酰胺、NC、PVDF,2.不同修饰载体的原子力显微镜表征,采用接触模式于室温及大气环境下用原子力显微镜观察修饰后的玻片表面,修饰后玻片的AFM表征，图a-h的左边部分为修饰玻片表面的二维平面图、表面剖面图及粗糙度值，右边部分为其相应的三维立体图。,3.WSSV检测抗体芯片和LCDV检测抗体芯片的制备及条件优化,抗体芯片模式图.1-芯片载体，2-琼脂糖凝胶层，3-抗体微阵列，4-芯片专用围栏或SuperPAPPen划线，5-标签区域。,优化的反应条件：捕获抗体浓度，点样缓冲液，固定时间，封闭剂，封闭时间，洗涤方法，反应时间。,1.WSSV检测抗体芯片和LCDV检测抗体芯片的灵敏度,标记物对WSSV检测抗体芯片检测限影响4.95,2.48,1.24,0.62,0.31g/mL4.95,2.48,0.83,0.31,0.15g/mL4.95,2.48,1.98,1.24,0.83g/mL,标记物对LCDV检测抗体芯片检测限影响4.39,2.2,1.1,0.88,0.55g/mL4.39,2.2,1.1,0.88,0.55g/mL8.78,4.39,2.2,1.46,1.1g/mL,1.WSSV检测抗体芯片和LCDV检测抗体芯片的灵敏度,抗体芯片与ELISA检测结果的相关性，相关系数0.9802,抗体芯片用于LCDV检测的部分结果图,2.WSSV检测抗体芯片和LCDV检测抗体芯片的应用评价,抗体芯片的检测结果(附部分检测