《液相色谱》课件.pptVIP

2020/5/24,第二章高效液相色谱分析法,一、高效液相色谱仪HPLC二、高效液相色谱法的特点featureofHPLC三、流程及主要部件generalprocessandmainassemblyofHPLC,第一节高效液相色谱的特点与仪器,highperformanceliquidchromatograph,featureandinstrumentofHPLC,2020/5/24,色谱法的用途,用途：色谱法已广泛用于各个领域，是多组分混合物首选的分离分析方法。以中国药典2005版为例，一部收载中药1146个品种，用薄层色谱进行鉴别或含量测定的有1523项，用高效液相色谱进行定量分析的有479种518项，用气相色谱进行检测的有47种。二部收载的有1967个品种，采用高效液相色谱法的品种有848种。现在色谱法已形成一门专门的科学。,2020/5/24,2020/5/24,色谱柱,2020/5/24,RichardLaurenceMillingtonSynge,ArcherJohnPorterMartin,fortheirinventionofpartitionchromatography.,1952年诺贝尔化学奖得主,2020/5/24,一、高效液相色谱法的特点featureofHPLC,特点：高压、高效、高速、高灵敏度高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。,2020/5/24,三、流程及主要部件processandmainassemblyofHPLC,1.流程,2020/5/24,二、液相色谱仪器highperformanceliquidchromatograph,2020/5/24,液相色谱仪（2）,2020/5/24,液相色谱仪（3）,安捷仑公司1100,agilent1100Hplc,瓦里安Varian-Prostar230/325/363,2020/5/24,液相色谱仪（4）,2020/5/24,2.主要部件,(1)高压输液泵主要部件之一，压力：150350105Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（甲酰胺乙腈甲醇乙醇丙醇丙酮二氧六环四氢呋喃甲乙酮正丁醇乙酸乙酯乙醚异丙醚二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小),2020/5/24,4.选择流动相时应注意的几个问题,（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。,（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。,（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。,（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。,2020/5/24,第二章液相色谱分析法,一、影响分离的因素factorsinfluencedseparation二、分离类型的选择choiceofseparationtypes三、液相色谱的应用applicationofHPLC四、液相制备色谱preparativeliquidchromatography,第四节影响分离的因素与操作条件的选择,highperformanceliquidchromatograph,factorsinfluencedseparationandchoiceofoperationcondition,2020/5/24,一、影响分离的因素factorsinfluencedseparation,1.影响分离的因素与提高柱效的途径在高效液相色谱中,液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，即：H=A+Cu故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。,2020/5/24,液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。,液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。恒温改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。,2020/5/24,图示,2020/5/24,2.流速,流速大于0.5cm/s时,Hu曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。,3.固定相及分离柱气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。,2020/5/24,二、分离类型选择choiceofseparationtypes,2020/5/24,三、HPLC的应用applicationofHPLC,1.环境中有机氯农药残留量分析固定相：薄壳型硅胶(3750m)流动相：正己烷流速：1.5mL/min色谱柱：50cm2.5mm(内径)检测器：差示折光检测器,可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。,2020/5/24,2.稠环芳烃的分析,稠环芳烃多为致癌物质。,固定相：十八烷基硅烷化键合相流动相：20%甲醇-水100%甲醇线性梯度淋洗，2%/min流速：1mL/min柱温：50C柱压：70104Pa检测器：紫外检测器,2020/5/24,四、制备型液相色谱preparativeliquidchromatography,获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。半制备柱（内径8mm，长度1530cm），一次制备量.1mg；,1.色谱柱的柱容量（柱负荷）对分析柱：不影响柱效时的最大进样量；对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量；超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。,2020/5/24,2.液相制备色谱的方法,收集组分时，通常有以下情况：（1）可获得良好分离，主峰使用制备柱，超载提高效率；（2